热门试卷

解：（1）质粒作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．基因工程中还可以用病毒（噬菌体或动植物病毒）作为运载体．

（3）SmaI酶会破坏目的基因和质粒的标记基因（抗性基因），因此图中构建重组质粒时不能使用SmaI酶切割．

（3）根据图中DNA片段两侧的黏性末端可知，左侧是用限制酶BamHI切割形成的，右侧是用限制酶HindⅢ切割形成的，这样可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．

故答案为：

（1）有多个酶切位点、有标记基因、能在宿主细胞内复制并稳定保存           噬菌体或动植物病毒

（2）SmaI酶会破坏目的基因和质粒

（3）BamHⅠ和HindⅢ

解：（1）试管动物的培育过程包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植，因此，“试管牛”技术的操作流程是a→b→f→g．

（2）由以上分析可知，图中①是滋养层，②囊胚腔，③是内细胞团．

（3）图中d表示胚胎移植．受体子宫内胚胎发育的过程中，细胞通过有丝分裂方式不断增殖．

（4）用促性腺激素处理良种奶牛，可促使其超数排卵，这样可以获得更多的卵母细胞．由于细胞膜具有选择透过性，因此用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色．

（5）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．为了能确定目的基因已经导入到受精卵，相应的载体需要有标记基因以便于进行检测．

（6）来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹胚或囊胚阶段的早期胚胎进行胚胎分割处理，再植入到受体内．若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于冷冻或液氮条件下．在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意要将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育．

（7）移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应．

故答案为：

（1）a→b→f→g

（2）①滋养层   ②囊胚腔    ③内细胞团

（3）胚胎移植     有丝分裂

（4）促性腺激素     对物质的吸收具有选择性

（5）显微注射法    标记基因

（6）桑椹胚或囊胚    胚胎分割    冷冻或液氮    要将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育

（7）受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应

解：（1）获取目的基因的方法主要有两种：一是从供体细胞的DNA中直接分离基因，而是人工合成基因．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，通过逆转录法进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是通过化学方法人工合成．

（2）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间．图中看出，两者之间存在于三种限制酶切点，但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点，因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列．

（3）构建基因表达载体时，DNA连接酶可将目的基因（bglB基因）与运载体连接形成重组质粒．

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．图2中的C菌落即为纤维素酶产量最高的菌株．

（5）A、该过程中仅针对bglB基因进行诱变，因此该方法获取热稳定性高的bglB酶基因的效率更高，A正确；

B、基因突变具有随机性、不定向性等特点，B错误；

C、利用PCR技术能大量获得bglB基因的突变基因，C正确；

D、bglB基因突变可能会导致氨基酸的数目发生改变，D错误．

故选：AC．

故答案为：

（1）通过化学方法人工合成

（2）B

（3）DNA连接酶

（4）C

（5）AC

解：（1）过程②将基因表达载体导入小鼠受精卵时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术；过程③利用的生物技术是早期胚胎培养；在进行胚胎移植前，利用胚胎分割技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠．

（2）基因表达载体的组成为目的基因+启动子+终止子+标记基因，所以用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、目的基因和标记基因等部分．

（3）cDNA属于部分基因文库，构建方法是利用某种生物发育的某个时期的mRNA通过逆转录产生cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中．

（4）PCR技术的基本过程是：高温变性：加热至90～95℃使双链DNA解链；低温复性：冷却至55～60℃使DNA单链与引物结合；中温延伸：加热至70～75℃使Taq聚合酶从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行．

故答案为：

（1）显微注射法   早期胚胎培养  胚胎分割

（2）终止子  目的基因（GFP基因）   标记基因

（3）部分   逆转录  载体

（4）双链DNA解链     引物   Taq聚合酶

解：（1）转基因动物中的受体细胞是受精卵，因为受精卵的全能性高，能直接发育形成新个体．

（2）①若受精卵细胞从供体母鼠体内获得，其基本过程是：首先对供体母鼠用促性腺激素进行超数排卵处理，再通过自然交配或人工授精完成受精，最后从供体母鼠输卵管中获得受精卵．

②若受精卵在体外通过体外受精获得，其基本操作过程包括卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能和受精．

（3）动物细胞培养过程需要加入抗生素，以防止杂菌污染；同时提供二氧化碳，以维持培养液的PH．

（4）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用．

故答案为：

（1）全能性高，能直接发育形成新个体

（2）①超数排卵　人工授精　②卵母细胞的采集和培养（或卵母细胞的采集）　精子的采集和获能（或精子的获取）

（3）抗生素　维持培养液中的pH

（4）基因表达载体    使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用

解：（1）获取目的基因的途径有从体细胞中分离、化学方法人工合成．基因表达载体包括启动子、标记基因、目的基因和终止子等部分，为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的启动子之后．图中③表示脱分化过程，④表示再分化过程．

（2）限制酶能识别特定的DNA序列并在特定位点切割．图中质粒中含有多种限制酶识别序列和切割位点，但用限制酶HindⅢ切割会破坏启动子，用限制酶EcoRⅠ切割会破坏终止子，用限制酶KpnⅠ切割会破坏复制原点，用限制酶XbaⅠ切割会去除终止子，用XhoⅠ和其他酶切割会去除启动子，因此应该选用限制酶NdeⅠ、BamHⅠ切割．

（3）由图可知，标记基因是抗氨苄青霉素基因（Ampr）．

（4）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法（或基因枪法等）．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用抗原-抗体杂交技术．

故答案为：

（1）从体细胞中分离和化学方法人工合成    启动子    脱分化、再分化

（2）识别特定的DNA序列并在特定位点切割     NdeⅠ、BamHⅠ

（3）抗氨苄青霉素基因（Ampr） 

（4）农杆菌转化（或基因枪法等）   抗原-抗体杂交

解：（1）由以上分析可知，图示过程涉及到基因工程、核移植和胚胎移植等技术．

（2））②是目的基因，为了使血清白蛋白基因在羊恰当的细胞中表达，还应该有为羊乳腺蛋白基因启动子，其是RNA聚合酶识别和结合的位点．

（3）①～③是动物细胞培养过程，需要先用胰蛋白酶将细胞分散成单个细胞．用胰蛋白酶处理组织，可获得单个细胞．由于卵细胞大、易操作、分化程度低，体细胞的细胞核在卵细胞质中才能表现出全能性，故一般利用未受精的卵细胞去核后做受体，而不用普通的体细胞．

（4）由于要从乳汁提取药物，所以应该选择雌性，其性染色体组成为XX．

故答案为：

（1）核移植技术    动物细胞培养（不分先后顺序）

（2）目的基因      启动子       RNA聚合酶

（3）胰蛋白酶（和胶原蛋白酶）     次级卵母

（4）XX

解：（1）将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca2+处理，使细菌成为易吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，从而利于重组质粒的导入．D过程常采用的方法是农杆菌转化法．若把重组质粒导入动物细胞，常采用的方法是显微注射法．

（2）植物组织培养技术的原理是植物细胞具有全能性，所以E过程采用的植物组织培养技术主要包括脱分化和再分化两个阶段．

（3）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，F过程应该用放射性同位素标记的胰岛素基因．人胰岛素基因若表达成功会产生胰岛素，这可以从分子水平采用抗原-抗体杂交方法进行检测．

故答案为：

（1）Ca2+（CaCl2溶液）　农杆菌转化法　显微注射法

（2）脱分化　再分化

（3）放射性同位素标记的胰岛素基因