热门试卷

解：Ⅰ（1）质粒分子经SmaⅠ切割前，为环状DNA，无游离磷酸基团；切割后，会断裂2个脱氧核苷酸（CG）之间的磷酸二酯键，露出2个游离磷酸基团．

（2）插入的SmaⅠ酶切位点越多，碱基对CG越多，氢键越多，故质粒的热稳定性越高．

（3）只使用EcoRI，质粒、外源DNA自身都只含有1对互补黏性末端，自身会发生连接成为环状DNA，不利目的基因导入．故使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，各自会有不同黏性末端，能防止自身环化．

Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快，能大量快速复制DNA；②多为单细胞，结构简单，容易操作；③遗传物质相对较少，不易对目的基因干扰．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用Ca2+处理细胞，使之成为感受态细胞，然后完成转化．

Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是农杆菌转化法．且一般将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中形成重组Ti质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上．移植入的目的基因为单个，故转基因植株一般为杂合子．要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的细胞质（线粒体、叶绿体），不会随着花粉进行基因污染．

故答案为：

Ⅰ．（1）0   2   

（2）高 

（3）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化

Ⅱ．③遗传物质相对较少  Ca2+   感受态

Ⅲ．农杆菌转化法  T-DNA   杂合   细胞质（线粒体、叶绿体）

解：（1）获取目的基因的主要途径包括直接提取从基因文库中获取也可人工合成．

（2）在构建基因表达载体的过程中，目的基因和质粒用同一种限制酶进行切割，使其露出相同的粘性末端，再用DNA连接酶连接成重组基因．

（3）在将基因表达载体导入受体细胞中，如果是动物细胞，常采用显微注射法，如果受体细胞是微生物，常用 CaCl2处理溶液处理大肠杆菌，使其成为处于感受态．

（4）活体采卵时，先用促性腺激素处理母羊，使其超数排卵．精子必须先要获能，才可以与成熟的卵母细胞受精，具体获能的方法有化学培养法和培养法．进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚．科学家用基因工程的技术获取乳腺发生器的生物，即能分泌含人胰岛素牛奶的母牛．

故答案为：

（1）人工合成　　

（2）限制酶     

（3）显微注射      CaCl2      感受态

（4）促性腺激素   桑椹胚或囊胚      能分泌含人胰岛素牛奶的母牛

解：（1）在形成图中③重组细胞的过程中，我们称②为目的基因，获取②的途径主要有从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成．

（2）有人对这种牛奶不敢食用，人们对这种转基因食品的担心表现在担心出现滞后效应、担心出现新的过敏原、担心营养成分改变．

（3）人血清白蛋白的生产说明该工程突破了自然界物种之间的生殖隔离；在基因表达载体中，人的血清白蛋白基因前端必须要有启动子，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．

故答案为：

（1）目的基因   从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成

（2）担心出现滞后效应   担心出现新的过敏原  担心营养成分改变

（3）生殖隔离   启动子

解：（1）据图示可知，切割目的基因时使用的限制酶XhoⅠ和HindⅢ，构建基因表达载体时，需用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，因此过程①中，需利用XhoⅠ和HindⅢ限制酶处理表达载体1．

（2）将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射技术．因此，过程②中常采用显微注射技术将表达载体2成功导入受体细胞．

（3）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素，以防杂菌污染．

（4）检测目的基因是否转录出了mRNA，使用分子杂交技术．因此为了进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因，可以提取上述猪肌肉细胞的mRNA利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交．

（5）据实验结果，只有在猪卵巢细胞中检测出绿色荧光，而猪肌肉细胞核猪羊水干细胞中均没有检测出绿色荧光，因此推测猪bmp15基因在猪卵巢细胞特异性表达．

故答案为：

（1）XhoⅠ和HindⅢ

（2）显微注射

（3）抗生素

（4）mRNA

（5）猪卵巢