热门试卷

（2016•长宁区一模）回答有关基因工程的问题．

下图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离．已知1kb=1000个碱基对的长度．

（1）片段D为目的基因中的某一片段，则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位依次是______（填数字）．

（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是______（填A/B/C）．据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______．

（3）用EcoRⅠ酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为1.1kb和______kb的两个片段，或者长度分别为______的两个片段．

（4）将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，之后，受体细胞的类型（对抗生素表现出抗性R或敏感性S，蓝白代表菌落颜色）包含______（多选）．

A．ApR、蓝色B．ApR、白色C．ApS、蓝色D．ApS、白色

（5）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是______．

A．受精卵细胞能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体

C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作．

在药品生产中，有些药品如干扰素，白细胞介素，凝血因子等，以前主要是从生物体的组织、细胞或血液中提取的，由于受原料来源限制，价价十分昂贵，而且产量低，临床供应明显不足．自70年代遗传工程发展起来以后，人们逐步地在人体内发现了相应的目的基因，使之与质粒形成重组DNA，并以重组DNA引入大肠杆菌，最后利用这些工程菌，可以高效率地生产出上述各种高质量低成本的药品，请分析回答：

（1）进行基因工程的基本操作一般要经过的四个步骤是：获取目的基因、______、导入受体细胞、______．

（2）在基因工程中，质粒是一种最常用的______，它广泛地存在于细菌细胞中，是一种很小的环状______分子．

（3）在用目的基因与质粒形成重组DNA过程中，一般要用到的工具酶是______和______．

（4）将含有“某激素基因”的质粒导入细菌细胞后，能在细菌细胞内直接合成“某激素”，则该激素在细菌体内的合成包括______和______两个阶段．

（5）在将质粒导入细菌时，一般要用______处理细菌，以增大______．

利用转基因奶牛乳腺生物发生器生产人的生长激素，需要构建一种能高水平表达的表达载体，选择合适的基因启动子至关重要．由于无法由基因表达产物推知启动子的碱基序列，运用PCR技术单独克隆启动子存在困难．科研人员经过长期研究，终于发明了下图所示的一种克隆启动子的方法．请分析回答：

（1）培育转基因奶牛时，需要在生长激素编码序列前插入______的启动子．运用______将外源基因转入动物细胞．

（2）过程③需要使用的工具酶是______，过程④中可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物进行扩增．

（3）研究发现将真核生物的蛋白质基因导入了大肠杆菌菌株中，能转录形成正常mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是______．

（4）由基因表达产物无法推知启动子碱基序列，其原因是______．

绒山羊所产山羊绒因其优秀的品质被专家称作“纤维宝石”，是纺织工业最上乘的动物纤维纺织原料．毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关．图甲表示含KIFⅡ基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图乙是获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图（MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ四种限制性核酸内切酶识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG）．请分析回答：

（1）用SmaI完全切割图甲中DNA片段，其最短的产物含______个bp．图甲中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐性纯合子中分离出图甲对应的DNA片段，用SmaI完全切割，产物中不同长度的DNA片段有______种．

（2）上述工程中，KIFⅡ称为______；为了提高试验成功率，需要通过______技术进行扩增，以获得更多的KIFⅡ．

（3）过程①必须用到的工具酶是______；在过程③中，为了获得更多的卵（母）细胞，需用______处理成年母绒山羊．

（4）过程④称为______，进行过程⑤的最佳时期是______．