热门试卷

解：（1）②过程采用显微注射技术将目的基因导入受精卵．由于人生长激素属于蛋白质类物质，所以要检测目的基因是否翻译成了人生长激素，利用是抗原-抗体杂交技术．

（2）转基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，则说明基因工程能够突破自然界的生殖隔离，定向改造生物的遗传性状；在基因表达载体中，人生长激素基因的前端必须有启动子，是RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出信使RNA，最终获得生长激素．

（3）在抗虫棉培育过程中，④过程常用的方法是农杆菌转化法，是利用农杆菌会被棉花植株伤口处细胞分泌的酚类化合物吸引并移向这些细胞，而且Ti质粒含有T-DNA，可以转移并且整合到受体细胞染色体的DNA上．

（4）⑤过程将受体细胞培养成植物体，所以要用到植物组织培养技术．

故答案为：

（1）显微注射法      抗原-抗体杂交

（2）生殖隔离（或种间障碍）       乳腺蛋白基因的启动子

（3）酚类化合物    含有T-DNA，可以转移并且整合到受体细胞染色体的DNA上

（4）植物组织培养

解：（1）构建基因的表达载体时，用到的工具有工具酶及运载体．工具酶包括限制性核酸内切酶和DNA连接酶，一般常用质粒做运载体．

（2）培育转基因动物时，需要一定的营养条件，诱导受精卵分裂分化形成胚胎．

（3）内细胞团是形成胚胎的关键部分．胚胎性别的鉴定只需少量的滋养层细胞，不要伤及内细胞团；若进行胚胎分割，应将内细胞团平均分割．

（4）在分子水平上检测，应该用DNA分子杂交技术．

（5）培育出转基因羊后，可以在羊奶或羊尿中分离出该药物．羊吃的是草（成本低），产出的奶、尿液均是对环境无害的物质．

故答案为：

（1）限制酶、DNA连接酶、运载体

（2）显微注射    胚胎（发育）培养液

（3）只需分割出少量滋养层细胞进行DNA分析   将囊胚阶段的内细胞团均等分割．

（4）DNA分子杂交技术

（5）成本高；易产生有害废弃物等

解：（1）根据题干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒复制基因E1”可知，构建基因表达载体时，应选用EcoRI和BamHI切割载体和含有目的基因的DNA，这样既可以去除E1基因以防止病毒复制后损伤健康细胞，同时还能破坏55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性．

（2）由于切下片段有可能与原基因重新结合，因此将目的基因与腺病毒重组时，重组的成功率较低，依然还有大量非重组的野生型病毒的DNA．

（3）选用含E1基因的肿瘤细胞进行重组病毒侵染，可以让病毒仅在含有E1基因的肿瘤细胞中复制，而在不含E1的人体正常细胞中不能复制，提高安全性．重组病毒与非重组病毒的DNA分子长度不同，质量（密度）也不同，因此筛选重组病毒时，可采用离心分层纯化法．

（4）只用限制酶EcoRI切割能产生700kb、200kb和100kb三种长度的DNA片段，同时用EcoRI和HalⅢ两种酶切割可产生420kb、280kb和100kb三种长度的DNA片段，可见，限制酶HalⅢ又将长度为700Kb的DNA片段切成420kb和280kb两段，将长度为200kb的DNA片段切成100kb的两段，由此可推断限制酶HalⅢ在该DNA片段上的切割位点有2个．

故答案为：

（1）EcoRI和BamHI     E1    55Kda   抑制P53基因的活性

（2）切下片段有可能与原基因重新结合

（3）可以让病毒仅在含有E1基因的肿瘤细胞中复制，而在不含E1的人体正常细胞中不能复制，提高安全性   重组病毒与非重组病毒的DNA分子长度不同，质量（密度）也不同 

（4）2

解：（1）A为含目的基因的（基因）表达载体，其化学本质是环状DNA分子．

（2）过程①是构建重组基因表达载体，此过程中用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶．受体细胞是动物细胞，A常用显微注射法导入受体细胞．

（3）在核移植之前，必须先去掉受体卵细胞的核，目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞，核移植的受体应选用处于MⅡ中期的卵母细胞．由于细胞核含有发育成完整个体发育的全套基因（或该含物种的全套遗传信息），因此重组细胞能发育成绵羊．

（4）胚胎移植时，一般选择发育良好的桑椹胚或囊胚．进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能．

故答案为：

（1）DNA

（2）限制酶、DNA连接酶    显微注射法

（3）MⅡ（中）    使重组细胞（转基因绵羊）的遗传物质全部来自含目的基因的成纤维细胞     发育成完整个体发育的全套基因（或该含物种的全套遗传信息）

（4）桑椹胚或囊胚（答对一个即给分）    免疫排斥反应

解：（1）限制酶的作用特点是能够特异性识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割．

（2）单独用A酶切割后形成4个片段，说明有3个A酶识别位点；单独用B酶切割后形成3个片段，说明有2个B酶切割位点．

（3）由表中酶切割后片段长度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以连接如图所示．

（4）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示．用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多．DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键．

（5）一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因．

故答案为：

（1）能够特异性识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割

（2）3     2

（3）

（4） 磷酸二酯键

（5）启动子 终止子

解：（1）对供体用促性腺激素处理，使其超数排卵，才可以公鼠交配．对于受体母鼠接受胚胎，必须要求与供体生理状况相同，所以需同期发情处理．

（2）过程③是构建基因表达载体，此过程需要用同一种限制酶切割目的基因和运载体，是它们露出相同的末端，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体．此过程是基因工程的核心步骤．过程④是转化重组质粒，受体细胞是动物细胞，常用显微注射法．

（3）过程⑤是体外胚胎培养，需要将受精卵移入发育培养液中继续培养，培养液成分一般都比较复杂，除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，还要添加血清 等物质．

（4）过程⑥是筛选出含有目的基因的小鼠胚胎，常用基因探针根据DNA分子杂交技术检测．胚胎分割采用机械方法将早期胚胎切割，经移植获得同卵双胚或多胚，从而获得较多基因型相同的转基因小鼠．

故答案为：

（1）促性腺激素    同期发情 

（2）限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶     显微注射法     基因表达载体构建    

（3）血清

（4）DNA分子杂交技术    胚胎分割（或克隆）

解：（1）马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖种在培养基中，经过人工培养获得脱毒苗．培养基中添加生长素和细胞分裂素，诱导离体细胞经过脱分化、再分化过程，利用植物细胞的全能性原理，完成组织培养，从而形成脱毒苗．

（2）①将外源基因导入植物体内用农杆菌转化法．该方法先将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T-DNA上，然后通过农杆菌的转化作用，使目的基因进入植物细胞并插入到植物细胞的染色体DNA上．

②导入农杆菌时，首先要构建基因表达载体，这里需要的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶，还要用Ca2+处理土壤农杆菌，使之转变为感受态，使外源基因容易导入．

③由于在形成配子时同源染色体分离，配子中的染色体数目减半，所以不一定会存在导入的目的基因．

故答案为：

（1）生长素和细胞分裂素    脱分化、再分化

（2）①T-DNA    染色体DNA    ②Ca2    ③不一定

解：（1）在此过程中涉及到的现代生物技术主要有基因工程、核移植技术和胚胎移植技术．

（2）在形成图中③含目的基因的受体细胞的过程中，我们称②为目的基因，获取②的途径主要有从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成．要实现②直接进入③必须构建基因表达载体．

（3）用胰蛋白酶处理组织，可获得单个细胞．由于卵细胞大、易操作、分化程度低，体细胞的细胞核在卵细胞质中才能表现出全能性，故一般利用未受精的卵细胞去核后做受体，而不用普通的体细胞．

（4）从④到⑤的过程中采用了胚胎分割技术，对囊胚进行胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，故正确的操作方法是图乙中的C．把⑤送入⑥，即胚胎移植的最佳时期为桑椹胚和囊胚．

故答案为：

（1）胚胎移植　

（2）目的基因　基因表达载体　

（3）胰蛋白酶  BC 

（4）C　桑椹胚或囊胚

解：根据题意和图示分析可知：转基因的过程是用到同一种限制性核酸内切酶去切割目的基因和运载体，再DNA连接酶，构建基因表达载体，将重组质粒用显微注射法导入动物细胞受精卵，整合后的G如果得到表达，胚胎会发出绿色荧光．胚胎如果没有发出绿色荧光，说明荧光基因未成功表达．

故答案为：

限制性核酸内切酶  DNA连接酶    受精卵  表达

解：（1）用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为537bp，790bp，661bp．

（2）一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子和标记基因．

（3）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割．并通过DNA连接酶的作用恢复磷酸二酯键．

（4）检测目的基因D是否在受体细胞中转录出mRNA的方法是分子杂交技术．

故答案为：

（1）SmaⅠ

（2）启动子　终止子　标记基因

（3）BamHⅠDNA连接　磷酸二酯

（4）分子杂交技术

解：（1）要想利用普通番茄（AA）获得基因型为aa的抗软化、耐储存的番茄，也可以采取诱变育种的方法，使A基因突变成a基因，从而获得所需要的品种．

（2）目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法；农杆菌中的Ti质粒是目的基因表达载体；Ti质粒上的一段T-DNA能转移到受体细胞的染色体DNA上，因此目的基因必须插入T-DNA中．

（3）基因工程的工具酶有限制酶和DNA连接酶．

（4）由一个植物体细胞得到一个植物个体，必须采用植物组织培养技术；植物组织培养技术需要在无菌条件下进行；先经过脱分化形成愈伤组织，再经过再分化形成丛芽和根．

（5）从图2可以看出多聚半乳糖醛酸酶基因和抗多聚半乳糖醛酸酶基因转录出来的mRNA能够互补配对形成双链RNA，从而阻断了多聚半乳糖醛酸酶基因的表达过程（翻译过程）．

故答案为：

（1）诱变育种

（2）农杆菌转化法   Ti质粒T-DNA序列

（3）限制酶、DNA连接酶

（4）植物组织培养   无菌  愈伤组织

（5）结合形成部分双链   多聚半乳糖醛酸酶的翻译

解：（1）基因工程中，获取目的基因的方法通常有人工合成、PCR和从基因文库中获取．

（2）构建基因表达载体时，首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，然后再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．这两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键．

（3）将目的基因导入微生物细胞时，常用感受态细胞法，即将重组DNA导入前，通常用CaCl2溶液溶液对大肠杆菌进行处理，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．

（4）要从根本上解决水体污染，还需将城市污水进行回收利用，实现废物资源化，这体现了生态工程的物质循环再生原理．

故答案为：

（1）PCR    从基因文库获取

（2）DNA连接酶和限制性核酸内切酶    磷酸二酯键

（3）CaCl2溶液

（4）物质循环再生原理

解：（1）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌．用液体培养时要放在摇床不断振荡，目的是保证培养液中的溶氧，使酵母菌能快速繁殖．

（2）由图乙可知，该同学采用的接种方法是稀释涂布平板法，需要用到的接种器是涂布器；为保证其无菌，在接种前需要将涂布器在酒精液中浸泡并点燃并冷却；图中菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的．

（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气．

故答案为：

（1）淀粉为唯一碳源    筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种    保证培养液中的溶氧，使酵母菌能快速繁殖

（2）涂布器     在酒精液中浸泡并点燃并冷却     涂布不均匀

（3）工程酵母     工程酵母菌利用淀粉的速度很快，发酵产生CO2的速度也很快

解：（1）动物细胞培养时，需用胰蛋白酶将动物组织块分散成单个细胞．

（2）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素对母畜进行超数排卵处理．

（3）图中④表示核移植过程，成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核．

（4）⑤表示胚胎移植过程，应该选择处于桑椹胚或囊胚期的胚胎进行移植；胚胎移植能够成功进行的生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应．

故答案为：

（1）胰蛋白或胶原蛋白

（2）促性腺激素

（3）去核、核移殖

（4）胚胎移植、桑椹胚期或囊胚期、受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应