热门试卷

解：（1）基因表达载体的组成有目的基因+启动子+终止子+标记基因．受体是动物细胞时，可以通过行为注射法转化目的基因．

（2）活体采卵时，先用促性腺激素处理母羊，使其超数排卵．精子必须先要获能，才可以与成熟的卵母细胞受精，具体获能的方法有化学培养法和培养法．

（3）受精卵移入发育培养液中继续培养，培养液成分一般都比较复杂，除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，还要添加血清等物质．

（4）胚胎分割采用机械方法将早期胚胎切割，经移植获得同卵双胚或多胚，从而获得较多基因型相同的个体．

（5）基因表达遵循中心法则，包括转录和翻译两个过程，如 （人凝血因子VIII基因）DNA→转录mRNA→翻译蛋白质（人凝血因子VIII）．

故答案为：

（1）启动子、终止子    显微注射

（2）促性腺激素    化学诱导法

（3）维生素、激素、氨基酸、核苷酸      血清

（4）胚胎分割移植

（5）（人凝血因子VIII基因）DNA→转录→mRNA→翻译→蛋白质（人凝血因子VIII）

解：（1）氨基酸是合成蛋白质的原料，而蛋白质的合成场所是核糖体．

（2）缺陷型酵母菌不能合成色氨酸，而含有重组质粒K（质粒K具有色氨酸合成基因及BD蛋白合成基因）的酵母菌能合成色氨酸，因此将重组质粒K导入缺陷型酵母菌，用不含色氨酸的培养基筛选转化的酵母菌获得菌落，从这些菌落中可筛选得到基因成功表达BD-P蛋白的酵母菌A．

（3）以mRNA为模板逆转录合成DNA时需要逆转录酶的催化．

（4）基因的转录需要RNA聚合酶的催化．

（5）酵母菌A含有重组质粒k，能合成色氨酸，但不能合成组氨酸和亮氨酸，因此需要将酵母菌A分别接种到不含组氨酸和不含亮氨酸的培养基中，以确定转入重组质粒K后酵母菌A组氨酸和亮氨酸合成未被激活．取水稻cDNA文库的多个重组质粒T分别转化到酵母菌A中，将转化产物接种在不含组氨酸、色氨酸、亮氨酸的培养基中培养，获得了分散的多个单菌落．若被测的水稻蛋白能与病毒蛋白P发生相互作用，BD、AD两个蛋白充分接近时，组氨酸合成基因才能转录，而且经检测这些酵母菌中含有4种水稻蛋白，则表明这4种水稻蛋白能够与蛋白P相互作用．

（6）研究发现，这4种水稻蛋白都是水稻不同代谢过程中的关键酶，推测该病毒引起水稻出现各种病症的原因之一可能是通过蛋白P作用于代谢关键酶，干扰细胞的代谢．

故答案为：

（1）核糖体    蛋白质

（2）色氨酸     表达（或“指导合成”） 

（3）逆转录

（4）RNA聚合酶

（5）不能合成组氨酸和亮氨酸（组氨酸和亮氨酸合成未被激活）   组氨酸、色氨酸、亮氨酸    与蛋白P相互作用

（6）通过蛋白P作用于代谢关键酶，干扰细胞的代谢

解：（1）重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子．而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子和终止子之间，只要在目的基因两侧的A和B位置分别接上这两种序列，并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种限制酶对质粒和目的基因同时进行切割，便会各自出现相同的黏性末端，便于重组与表达，同时可防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置应接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列．

（2）①用DNA连接酶可将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；②将重组质粒导入大肠杆菌体内，目的是利用大肠杆菌的无性繁殖，短时间内获取大量的重组质粒．

（3）重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除BglⅡ外，其他限制酶均会破坏含有启动子和终止子的目的基因．

（4）检测目的基因是否导入受体细胞常采用DNA分子杂交技术．

（5）资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时可诱导HBsAg基因表达．

（6）酵母菌为真核生物，细胞内具有能对分泌蛋白进行加工的内质网和高尔基体等细胞器，而大肠杆菌等原核生物不具有内质网和高尔基体等细胞器．

故答案为：

（1）SnaBⅠAvrⅡ

（2）DNA连接酶    大量重组质粒

（3）BglⅡ

（4）DNA分子杂交

（5）甲醇

（6）加工（修饰）

解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建；显微注射法是将目的基因导入动物细胞最有效的方法．

（2）植物体细胞杂交过程有两个关键，一个是在把植物细胞杂交之前，必须去除细胞外的细胞壁，该过程需要用到纤维素酶和果胶酶；另外一个是诱导原生质体的融合，方法包括物理法（离心、振动、电刺激）和化学法（聚乙二醇）．

（3）在进行单克隆抗体的生产过程中，要把两种细胞进行融合，一种是在体外能够大量增殖的骨髓瘤细胞，另外一种是B淋巴细胞；诱导该两种细胞融合常用的因素有物理（离心、振动、电刺激）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒等）．

（4）胚胎干细胞在功能上具有发育的全能性，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化．

故答案为：

（1）基因表达载体的构建    显微注射技术

（2）去除细胞外的细胞壁     原生质间的融合

（3）B淋巴细胞    灭活的病毒

（4）全能    分化

解：（1）根据图示：①过程是转录，合成mRNA，发生在细胞核中；②过程是逆转录，合成DNA，需要逆转录酶催化．

（2）⑤代表PCR技术，④过程需要耐高温的热稳定DNA聚合酶．

（3）⑧过程是将目的基因导入大肠杆菌，所以需要用Ca离子处理D使之成为感受态，从而更容易吸收C．

（4）由图可知，质粒上的两个标记基因中均有限制酶Ⅱ（-↓GATC-）的识别序列和切点，若用该酶切割会将两个标记基因均破坏，因此只能用限制酶Ⅰ切割质粒，但切割含有抗虫基因的外源DNA分子时可以只用限制酶Ⅱ，也可以同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ．故选A．

（5）因为DNA分子都是独特的双螺旋结构，且都是由四种脱氧核苷酸，所以不同生物的基因可以拼接在一起．人胰岛素基因能在大肠杆菌种表达是因为人和大肠杆菌共用一套遗传密码．

（6）检测大肠杆菌是否导入用DNA分子杂交技术，检测大肠杆菌是否转录人胰岛素基因用分子杂交技术．大肠杆菌是否合成胰岛素，检测方法是抗原--抗体杂交．

故答案为：

（1）转录  细胞核  逆转录   逆转录酶

（2）PCR    热稳定DNA聚合酶     耐高温

（3）Ca离子

（4）A

（5）DNA分子都是独特的双螺旋结构，都是由四种脱氧核苷酸   一套遗传密码

（6）分子杂交     抗原--抗体杂交

解：（1）①图2中的目的基因是GFP基因，构建的基因表达载体包括启动子、目的基因、标记基因和终止子．过程②是将目的基因导入受体细胞的过程，当受体细胞是动物细胞时，通常采用显微注射法．

②基因表达载体是否导入受体细胞可以通过检测是否有标记基因的表达产物进行确认．目的基因是否表达可以通过是否发出绿色荧光进行确认．

③早期胚胎需要利用胚胎移植技术进入代孕母鼠体内进行进一步发育．

（2）①过程①表示用激素（常用促性腺激素）对供体母牛做超数排卵处理，达到超数排卵的目的．

②图中1为透明带，2是滋养层，3是内细胞团，具有发育的全能性．

③过程③表示胚胎移植过程，胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状况有关，所以进行胚胎移植时，应对受体进行同期发情，使之处于适合的生理状况．③过程若要同时产生多个相同的转基因牛通常用到的技术是胚胎分割移植技术．

④为确保得到所需性别的转基因牛，往往对移植前的胚胎进行性别鉴定，常用的鉴别早期胚胎性别的方法有DNA分子杂交技术和分析胚胎细胞的染色体组型等．

故答案为：

（1）①GEP基因   标记基因  启动子  终止子  显微注射法

②是否有标记基因的表达产物   是否发出绿色荧光

③胚胎移植

（2）①促性腺激素

②透明带   滋养层

③同期发情  胚胎分割技术

④DNA分子杂交技术和分析胚胎细胞的染色体组型

解：（1）在该基因工程中，指导干扰素合成的基因为目的基因．

（2）图一中，A为限制酶，能切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体；C为DNA连接酶，能将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．

（3）根据图二可知，该酶的识别序列为GAATTC，切点在G和A之间．

故答案为：

（1）目的基因

（2）限制酶，DNA连接酶

（3）C

解：（1）从人的淋巴细胞中获取出干扰素基因，此基因在基因工程中称为目的基因．

（2）质粒作为运载体，作为运载体必需具备一下条件：有一个或多个限制酶切割位点，在细胞中能够自我复制，有特殊的标记基因等．

（3）构建基因表达载体时，需要同一种限制性核酸内切酶处理质粒和目的基因，使它们产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶处理，使两者形成重组质粒．

（4）基因工程成功的概率较小，因此将重组质粒移植到酵母菌体内，再通过检测（筛选），以获取能够分泌人类干扰素的酵母菌．

故答案为：

（1）目的基因

（2）运载体   有一个或多个限制酶切割位点，在细胞中能够自我复制，有特殊的标记基因等

（3）同一种限制性核酸内切酶　 黏性末端    DNA连接酶　　

（4）检测（筛选）

解：（1）基因工程常用的载体有质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物．

（2）质粒往往要带有一个抗生素抗性基因，用于检测目的基因是否导入受体细胞．

（3）基因表达载体导入烟草细胞常用的方法是农杆菌转化法，另外还有基因枪法，花粉管通道法．

（4）转基因工程改良动植物品种，最突出的优点是按照人类的需要，定向改变生物的遗传性状．

（5）植物组织培养技术的原理是植物细胞的全能性，组织培养过程中，在培养基中要添加生长素和细胞分裂素．

故答案为：

（1）动植物病毒　λ噬菌体的衍生物

（2）检测目的基因是否导入受体细胞

（3）农杆菌转化法  基因枪法  花粉管通道法

（4）按照人类的需要，定向改变生物的遗传性状

（5）植物细胞的全能性　生长素细胞分裂素

解：（1）从肝细胞中分离出相应的RNA，经反转录（或逆转录）获得内皮抑素基因，再利用PCR技术进行体外扩增，以获得更多的目的基因．

（2）双酶切后，目的基因两端的黏性末端不同，被切开的运载体两端的黏性末端也不同，这样可以避免目的基因与载体反向连接，还能减少目的基因与目的基因、载体与载体的连接，还减少了目的基因和质粒的自身连接，提高了重组质粒的比例．

（3）大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落．反之，则形成白色菌落．选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有IPTG、X-gal和氨苄青霉素．因为重组质粒的LacZ基因中插入了目的基因，使LacZ基因不能表达出β-半乳糖苷酶，所以成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成白色菌落．基因工程中选择大肠杆菌作为受体细胞的原因是大肠杆菌是单细胞生物，繁殖速度快，遗传物质相对较少．

（4）由表中数据可知，粗提表达产物浓度越高，活的内皮细胞数目越少，说明重组内皮抑素（或粗提表达产物）能够抑制毛细血管内皮细胞的增殖．

故答案为：

（1）反转录   PCR 

（2）反向   目的基因和运载体自身

（3）IPTG、X-gal和氨苄青霉素   白    重组质粒上的LacZ基因已被破坏而不能表达     大肠杆菌是单细胞生物，繁殖速度快，遗传物质相对较少

（4）对活细胞进行计数   内皮抑素能有效地抑制血管增生

解：（1）PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．PCR的原理是DNA复制，需要的条件包括：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．PCR扩增DNA的过程包括：高温变性、低温复性、中温延伸过程．因此，利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA．

（2）采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞后，需要利用植物组织培养技术培养该细胞，在培养再生植株的过程中，需要在培养基中加入植物激素，人为控制细胞的 脱分化和再分化．如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括生物安全、环境安全和食品安全．

（3）蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列．

（4）生态工程建设的目的是遵循自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到经济效益和环境效益的同步发展．

故答案为：

（1）单     引物       Taq聚合

（2）脱分化   再分化     ABC

（3）空间结构     氨基酸      脱氧核苷酸    

（4）物质循环     环境污染    经济效益    环境效益

解：（1）基因组文库包括了该种生物所有的基因，而部分基因文库只包含一种生物的部分基因，因此cDNA文库小于基因组文库．

（2）从酵母菌细胞中提取目的基因，需用到限制性核酸内切酶；以mRNA为模板合成cDNA的过程为逆转录．

（3）PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，采用该技术能在短时间内获得大量目的基因；PCR技术的原理是DNA复制．

（4）将基因表达载体导入双子叶植物细胞常用农杆菌转化法；农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．目的基因整合到植物细胞的染色体上是其能在此植物体内稳定遗传的关键；检测目的基因是否整合到植物细胞的染色体上可采用DNA分子杂交技术．

（5）蛋白质工程首先要设计预期的蛋白质空间结构，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列．

故答案为：

（1）小于    

（2）限制酶    逆转录

（3）PCR    DNA复制

（4）可转移   能整合到受体细胞的染色体DNA上     DNA分子杂交

（5）蛋白质空间结构

解：（1）PCR方法扩增目的基因的过程中，需要进行高温解链过程，因此使用的DNA聚合酶具有耐高温的特性．

（2）耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，因此稳定性强．引物B中含C与G的碱基对较多，可采用较高的退火温度．

（3）多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求．

（4）植物基因工程中常用农杆菌做受体细胞．

（5）据图分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段，且M、N片段间存在Pst I酶切点．因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒，由于保留了Pstl的切割位点，所以可以得到两种DNA分子．而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中，如图I-②过程只能产生一种DNA片断．

（6）质粒能与目的基因能够拼接其原因是它们具有共同的物质基础和结构基础，以及具有相同的黏性末端．人的干扰素基因在酵母菌体内合成了人的干扰素，说明了不同生物共用一套密码子．

故答案为：

（1）耐高温  

（2）引物对B  

（3）否  

（4）农杆菌  

（5）①2  ②1

（6）它们具有共同的物质基础和结构基础，以及具有相同的黏性末端    不同生物共用一套密码子

解：（1）过程①的DNA酶可水解DNA分子，其作用部位是磷酸二酯键；过程②的蛋白酶作用的部位是　肽键

（2）①、②两过程利用了酶的专一性，即一种酶只能催化一种或类化学反应．

（3）构建重组质粒时，需要限制酶和DNA连接酶，因此需将过程③的测序结果与限制性核酸内切酶的识别序列进行对比，以确定选用何种限制酶．

（4）RNA聚合酶能识别基因的启动子，并与之结合，从而催化基因的转录 过程．

（5）A．分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNA，采用了酶的专一性原理，A正确；

B．无水乙醇能溶解色素，因此提取叶绿体基粒膜上的光合色素时，要用无水乙醇处理菠菜叶片，这与生物分子间的特异性无关，B错误；

C．分子杂交手段的原理是DNA分子杂交技术，采用了DNA分子的特异性原理，C正确；

D．mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，这是采用了核酸的特异性原理，D正确．

故选：ACD．

故答案为：

（1）磷酸二酯　肽　     

（2）专一性     　

（3）限制性核酸内切

（4）启动子　转录        

（5）ACD