- 目的基因检测与鉴定
- 共1561题
图1表示某细菌的质粒中相关限制酶的切割位点，图2表示目的基因所在的DNA中相关限制酶的切割位点．请分析并回答下列问题：
（1）用SmaⅠ限制酶处理图1所示的一个质粒会得到______种DNA片段，会增加______个游离的磷酸基团．
（2）在实际操作中，最好选用______ （填限制酶名称）同时切割质粒和含目的基因的外源DNA，其优点是能避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，以及便于筛选需要．一个目的基因通过PCR技术扩增第n次，需要______个引物．
（3）为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌，实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含______ （抗生素）的培养基甲（图3）中，然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含______ （抗生素）培养基乙上，以筛选获得含重组质粒的细菌．含重组质粒的大肠杆菌在两种培养基的生长情况是______．
（4）经检测：在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是______．
正确答案
解：（1）图1质粒有SmaⅠ限制酶两个切割位点，用SmaⅠ限制酶切割该质粒会得到2种2个DNA片段，每个DNA片段有2个游离的磷酸基团，所以产生两个DNA片段会增加4个游离的磷酸基团．
（2）从图2可知，目的基因的右侧可用PstⅠ限制酶切割，目的基因的左侧可用SmaⅠ限制酶或HindⅢ限制酶切割，但用SmaⅠ限制酶切割质粒时会破坏两个标记基因，不利于筛选．所以，最好选用PstⅠ和HindⅢ酶同时切割质粒和含目的基因的外源DNA，其优点是能避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，以及便于筛选需要．1个DNA分子复制第n次共产生了2n个DNA分子，由于DNA分子为半保留复制，其中新合成2个DNA单链，每条新链的合成需要1个引物，所以一个目的基因通过PCR技术扩增第n次，需要2n个引物．
（3）普通质粒含有氯霉素和四环素抗性基因，重组质粒只含有四环素抗性基因，所以在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖的菌落即为含重组质粒的细菌．
（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰，所以导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性．
故答案为：
（1）2 4
（2）PstⅠ和HindⅢ酶 2n
（3）四环素 氯霉素
在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖
（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰．
解析
解：（1）图1质粒有SmaⅠ限制酶两个切割位点，用SmaⅠ限制酶切割该质粒会得到2种2个DNA片段，每个DNA片段有2个游离的磷酸基团，所以产生两个DNA片段会增加4个游离的磷酸基团．
（2）从图2可知，目的基因的右侧可用PstⅠ限制酶切割，目的基因的左侧可用SmaⅠ限制酶或HindⅢ限制酶切割，但用SmaⅠ限制酶切割质粒时会破坏两个标记基因，不利于筛选．所以，最好选用PstⅠ和HindⅢ酶同时切割质粒和含目的基因的外源DNA，其优点是能避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，以及便于筛选需要．1个DNA分子复制第n次共产生了2n个DNA分子，由于DNA分子为半保留复制，其中新合成2个DNA单链，每条新链的合成需要1个引物，所以一个目的基因通过PCR技术扩增第n次，需要2n个引物．
（3）普通质粒含有氯霉素和四环素抗性基因，重组质粒只含有四环素抗性基因，所以在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖的菌落即为含重组质粒的细菌．
（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰，所以导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性．
故答案为：
（1）2 4
（2）PstⅠ和HindⅢ酶 2n
（3）四环素 氯霉素
在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖
（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰．
下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题：
资料1：巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达【5′AOX1和3′AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子】．
资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达．
资料3：限制酶切位点
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接
上______、______限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化．
（2）酶切获取HBsAg基因后，需用______将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取______．
（3）步骤3中应选用限制酶______来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞．
（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用______方法进行检测．
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入______以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达．
（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行______并分泌到细胞外，便于提取．
正确答案
解：（1）重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子．而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间，只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列，并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种内切酶对质粒和目的基因同时切割，便会各自出现相同的粘性末端，便于重组与表达，同时防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列．
（2）①用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；②导入大肠杆菌体内，目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度，短时间内可获取大量的重组质粒．
（3）重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除BglⅡ外，其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因．
（4）用DNA分子杂交技术检测是否导入目的基因．
（5）资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时诱导HBsAg基因表达．
（6）酵母菌为真核生物，细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器，细菌等原核生物，不具有内质网和高尔基体等细胞器．
故答案为：
（1）SnaBⅠAvrⅡ
（2）DNA连接酶 大量重组质粒
（3）BglⅡ
（4）DNA分子杂交
（5）甲醇
（6）加工（修饰）
解析
解：（1）重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子．而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间，只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列，并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种内切酶对质粒和目的基因同时切割，便会各自出现相同的粘性末端，便于重组与表达，同时防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列．
（2）①用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；②导入大肠杆菌体内，目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度，短时间内可获取大量的重组质粒．
（3）重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除BglⅡ外，其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因．
（4）用DNA分子杂交技术检测是否导入目的基因．
（5）资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时诱导HBsAg基因表达．
（6）酵母菌为真核生物，细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器，细菌等原核生物，不具有内质网和高尔基体等细胞器．
故答案为：
（1）SnaBⅠAvrⅡ
（2）DNA连接酶 大量重组质粒
（3）BglⅡ
（4）DNA分子杂交
（5）甲醇
（6）加工（修饰）
下表中列出了几种限制酶识别程序及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点．
（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的______中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁．
（2）限制酶SmaⅠ和限制酶XmaⅠ作用的不同点是______．
（3）图二中的目的基因D需要同时使用限制酶MseⅠ和限制酶PstⅠ才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点．所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点．试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：
①首先用______酶处理质粒；
②然后用______酶处理质粒，使被切开的质量末端链接上相应的脱氧核苷酸
③再运用DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被限制酶______识别．
（4）基因工程中的筛选是一个重要的步骤．如图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌．培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______、______．从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌．
正确答案
解：（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的受精卵中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁．
（2）限制酶SmaⅠ的识别序列是CCCGGG，在C和G之间切割；限制酶XmaⅠ的识别序列是CCCGGG，在第一个C和第二个C之间切割．由此可见，这两种酶的识别的序列相同，但切割位点不同．
（3）图中质粒只有EcoRⅠ酶和PstⅠ酶的识别位点，而切割目的基因需要MseⅠ酶和PstⅠ酶，所以需要对质粒进行改造，在质粒上构建新的限制酶切位点，即MseⅠ酶切位点．首先用EcoRⅠ酶处理质粒，然后用DNA聚合酶等处理质粒；再运用DNA连接酶处理质粒，从而形成新的限制酶切位点，即可被MseⅠ酶识别．
（4）由图可知，质粒上含有两个抗性基因，即四环素抗性基因和青霉素抗性基因．对质粒进行改造时，已将青霉素抗性基因破坏，所以含重组质粒的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生存，但在含有青霉素的培养基上不能生存．所以图中培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素和青霉素，在含有四环素的培养基上能生存，在含有青霉素的培养基上不能生存的4和6菌落就是含有目的基因的菌落．
故答案为：
（1）受精卵
（2）切割位点不同
（3）EcoRⅠDNA聚合 MseⅠ
（4）四环素 青霉素 4、6
解析
解：（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的受精卵中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁．
（2）限制酶SmaⅠ的识别序列是CCCGGG，在C和G之间切割；限制酶XmaⅠ的识别序列是CCCGGG，在第一个C和第二个C之间切割．由此可见，这两种酶的识别的序列相同，但切割位点不同．
（3）图中质粒只有EcoRⅠ酶和PstⅠ酶的识别位点，而切割目的基因需要MseⅠ酶和PstⅠ酶，所以需要对质粒进行改造，在质粒上构建新的限制酶切位点，即MseⅠ酶切位点．首先用EcoRⅠ酶处理质粒，然后用DNA聚合酶等处理质粒；再运用DNA连接酶处理质粒，从而形成新的限制酶切位点，即可被MseⅠ酶识别．
（4）由图可知，质粒上含有两个抗性基因，即四环素抗性基因和青霉素抗性基因．对质粒进行改造时，已将青霉素抗性基因破坏，所以含重组质粒的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生存，但在含有青霉素的培养基上不能生存．所以图中培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素和青霉素，在含有四环素的培养基上能生存，在含有青霉素的培养基上不能生存的4和6菌落就是含有目的基因的菌落．
故答案为：
（1）受精卵
（2）切割位点不同
（3）EcoRⅠDNA聚合 MseⅠ
（4）四环素 青霉素 4、6
萤火虫发光是体内荧光素酶催化一系列反应所产生的现象．如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光．一直以来荧光素酶的惟一来源是从萤火虫腹部提取．但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内产生荧光素酶．请你根据已有的知识回答下列有关问题：
（1）在此转基因工程中，目的基因是______，具体操作过程中下图所示的黏性末端是由______种限制性核酸内切酶作用产生的．
（2）在上述过程中需要多种酶的参与，其中包括限制性核酸内切酶和______等．
（3）将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要载体的帮助．下列______（多选）是选取载体时必须考虑的．
A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存 B．具有特定的限制酶切割位点
C．具有与目的基因相同的碱基片段 D．具有某些标记基因
（4）本实验中将目的基因导入大肠杆菌的载体可以是______（多选）．
A．质粒 B．动物病毒 C．噬菌体的衍生物 D．植物病毒
（5）在此转基因工程中，将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内稳定保存和表达的过程称为转化．最常用的方法是首先用______处理大肠杆菌，目的是______．
（6）转基因生物的DNA上是否插入目的基因，用______技术来检测；目的基因是否表达出相应的蛋白质，除了通过大肠杆菌是否发光来确定外，还可以通过______技术来判断．
正确答案
解：（1）在此转基因工程中，目的基因是荧光素酶基因；图中所示的黏性末端都相同，但是由2种限制性核酸内切酶作用产生的，其中第一个和第三个是由一种限制酶切割产生的，另外两个是由另一种限制酶切割产生的．
（2）基因工程需要的工具酶包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶等．
（3）作为基因工程的运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABD．
（4）常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，由于受体细胞是大肠杆菌，因此可选用质粒和噬菌体的衍生物作为载体．故选：AC．
（5）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理大肠杆菌，使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态），有利于目的基因导入受体细胞．
（6）检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，常用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）荧光素酶基因 2
（2）DNA连接酶
（3）A、B、D
（4）A、C
（5）Ca2+ 使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态）
（6）DNA分子杂交 抗原-抗体杂交
解析
解：（1）在此转基因工程中，目的基因是荧光素酶基因；图中所示的黏性末端都相同，但是由2种限制性核酸内切酶作用产生的，其中第一个和第三个是由一种限制酶切割产生的，另外两个是由另一种限制酶切割产生的．
（2）基因工程需要的工具酶包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶等．
（3）作为基因工程的运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABD．
（4）常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，由于受体细胞是大肠杆菌，因此可选用质粒和噬菌体的衍生物作为载体．故选：AC．
（5）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理大肠杆菌，使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态），有利于目的基因导入受体细胞．
（6）检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，常用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）荧光素酶基因 2
（2）DNA连接酶
（3）A、B、D
（4）A、C
（5）Ca2+ 使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态）
（6）DNA分子杂交 抗原-抗体杂交
科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功．请据图回答问题．
（1）图1中①DNA是以______为模板，______形成DNA．
（2）图1中④常用______处理大肠杆菌，以利于基因表达载体进入大肠杆菌．构建的表达载体含有人胰岛素基因、______、______及其启动子等，启动子的作用是______．
（3）采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造，使之起效时间缩短，保证餐后血糖高峰和血液中胰岛素高峰一致，研制速效胰岛素的思路是：确定蛋白质的功能→______→推测应有的氨基酸序列→______．下列关于蛋白质工程的说法不正确的是______
A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更符合人类的需要
B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构
C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子
D．蛋白质工程是基因工程的延伸，又被称为第二代基因工程
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用______作探针与mRNA杂交．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______技术．
（5）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点．
图2是转基因抗病香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题：
①用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是______．
②构建含目的基因的重组质粒A时，选用BamhHI 和HindⅢ酶对______进行切割，可以防止其自身环化．
③如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上．
正确答案
解：（1）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（2）图1中④常用CaCl2溶液（或Ca2+）处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，以利于基因表达载体进入大肠杆菌．构建的表达载体含有人胰岛素基因、终止子、标记基因及其启动子等，启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）．
（3）采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造的思路是：确定蛋白质的功能→预期蛋白质的空间结构→推测应有的氨基酸序列→找到基因的碱基序列．
A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更符合人类的需要，A正确；
B．蛋白质工程是在分子水平上对基因分子直接进行操作，定向改变分子的结构，B错误；
C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子，C正确；
D．蛋白质工程是基因工程的延伸，又被称为第二代基因工程，D正确．
故选：B．
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，即分子杂交．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术．
（5）①SmaI酶会破坏目的基因和质粒的标记基因（抗性基因），因此图中构建重组质粒时不能使用SmaI酶切割．
②根据图中DNA片段两侧的黏性末端可知，左侧是用限制酶BamHI切割形成的，右侧是用限制酶HindⅢ切割形成的，这样可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．
③如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上．
故答案为：
（1）原胰岛素mRNA 逆转录
（2）CaCl2溶液（或Ca2+） 终止子 标记基因
RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）
（3）预期蛋白质的空间结构 找到基因的碱基序列 B
（4）标记的胰岛素基因片段 抗原-抗体杂交
（5）①SmaI酶会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因
②含目的基因的外源DNA和质粒
③TDNA 染色体的DNA
解析
解：（1）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（2）图1中④常用CaCl2溶液（或Ca2+）处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，以利于基因表达载体进入大肠杆菌．构建的表达载体含有人胰岛素基因、终止子、标记基因及其启动子等，启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）．
（3）采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造的思路是：确定蛋白质的功能→预期蛋白质的空间结构→推测应有的氨基酸序列→找到基因的碱基序列．
A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更符合人类的需要，A正确；
B．蛋白质工程是在分子水平上对基因分子直接进行操作，定向改变分子的结构，B错误；
C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子，C正确；
D．蛋白质工程是基因工程的延伸，又被称为第二代基因工程，D正确．
故选：B．
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，即分子杂交．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术．
（5）①SmaI酶会破坏目的基因和质粒的标记基因（抗性基因），因此图中构建重组质粒时不能使用SmaI酶切割．
②根据图中DNA片段两侧的黏性末端可知，左侧是用限制酶BamHI切割形成的，右侧是用限制酶HindⅢ切割形成的，这样可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．
③如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上．
故答案为：
（1）原胰岛素mRNA 逆转录
（2）CaCl2溶液（或Ca2+） 终止子 标记基因
RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）
（3）预期蛋白质的空间结构 找到基因的碱基序列 B
（4）标记的胰岛素基因片段 抗原-抗体杂交
（5）①SmaI酶会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因
②含目的基因的外源DNA和质粒
③TDNA 染色体的DNA
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