热门试卷

解：（1）向健康人体注射特定抗原，提取出A浆细胞（效应B淋巴细胞），在人体参与体液免疫．

（2）过程①至②抗体的获取称为单克隆抗体，其中①是细胞融合过程，Y细胞称为杂交瘤细胞．

（3）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．

（4）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．

（5）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．在培养前，培养基常用高压蒸汽灭菌；采用划线（或涂布）的方法接种以获得单菌落后继续筛选．

故答案为：

（1）体液  

（2）单克隆抗体       细胞融合 

（3）537、790、661

（4）4

（5）BamHⅠ抗生素B      固体      高压蒸汽灭菌      平板划线（或涂布）

解：（1）图中过程①表示注射特定抗原，获得免疫的B淋巴细胞．杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞和效应B细胞的特点，既能无限增殖，又能产生特异性抗体．

（2）促进图中两种动物细胞融合最常用的方法是灭活的病毒，过程②只考虑细胞的两两融合，则可能会出现3种细胞：骨髓瘤细胞自身融合的细胞、效应B细胞自身融合的细胞、杂交瘤细胞，图中用HAT培养基培养的目的是筛选出杂交瘤细胞．

（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）．

（4）通过⑤培养液中培养可获得大量的单克隆抗体，在培养瓶要控制一定的CO2浓度，原因是CO2能维持培养液的pH，此外还可以通过④小鼠腹腔内培养获得单克隆抗体．

（5）若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，单克隆抗体是分泌蛋白质，首先在核糖体中合成，在内质网上初步加工，之后内质网边缘以“出芽”形式冒出囊泡，囊泡离开内质网，转移到高尔基体上，与高尔基体膜融合，囊泡中的物质也进入到高尔基体中，在高尔基体中进一步加工成成熟的蛋白质，高尔基体膜也突起形成小泡，小泡离开高尔基体，转移到细胞膜上，小泡中物质释放到细胞膜外．因此放射性物质在细胞器中出现的先后顺序是核糖体、内质网、高尔基体．

故答案为：

（1）注射特定抗原        既能无限增殖，又能产生特异性抗体

（2）灭活的病毒         3      杂交瘤细胞

（3）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）

（4）维持培养液的pH       小鼠腹腔内培养

（5）核糖体、内质网、高尔基体

解：（1）由图分析，该过程为动物细胞融合，其基础是动物细胞培养．

（2）目前使用的正常细胞通常为10代以内的，因为10代以内的细胞可以保持细胞正常的二倍体核型．诱导两个动物细胞融合的方法：物理（离心、振动、电刺激）、化学（PEG）、生物诱导（灭活的病毒）．

（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞，经过一次有丝分裂，形成单核细胞．

（4）据题干信息，人成纤维细胞能在HAT培养基上存活，而小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活，则HAT培养基起选择培养作用，筛选出人成纤维细胞和成纤维细胞融合的杂交细胞；动物细胞培养的适宜温度为36.5±0.5℃；由图可知，操作中加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞，筛选出杂交细胞．

（5）杂交细胞B只存在1号染色体，其表达出酶Ⅰ、Ⅲ，说明编码酶Ⅰ的基因位于1号染色体上；杂交细胞A中只存在2号染色体，但表达出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，而杂交细胞B只存在1号染色体，也能表达出酶Ⅲ，说明编码酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于2号染色体上．

故答案为：

（1）动物细胞融合动物细胞培养

（2）10 PEG（或灭活病毒）

（3）多（双）核细胞有丝分裂

（4）选择 36.5±0.5 除去成纤维细胞

（5）1Ⅱ和Ⅳ

解：（1）图中的X细胞表示骨髓瘤细胞，在体外能无限增殖；Y细胞表示受抗原刺激过的（效应）B细胞，能够产生特异性抗体；Z细胞表示骨髓瘤细胞和（效应）B细胞融合形成的杂交瘤细胞．

（2）①过程将已经分化的细胞培养成分化程度低的细胞过程，类似于植物组织培养技术中脱分化．与纤维母细胞相比，诱导干细胞的分化程度较低，全能性较高．②过程是细胞分化的过程，其实质是基因的选择性表达．

（3）③过程表示动物细胞融合，常用灭活的病毒作为诱导剂诱导动物细胞融合．

（4）④处需要进行筛选，目的是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．

（5）放射性32P标记的核苷酸是合成DNA或RNA的原料，Z细胞中含有DNA的细胞器只有线粒体，含有RNA的细胞器有线粒体和核糖体．所以能测到放射性32P的细胞器有核糖体、线粒体．

故答案为：

（1）骨髓瘤细胞    抗原刺激过的B淋巴细胞    杂交瘤细胞

（2）脱分化   高   基因的选择性表达

（3）灭活的病毒

（4）筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞

（5）核糖体    线粒体

解：（1）单克隆抗体制备的技术涉及动物细胞融合和动物细胞培养，基础是动物细胞培养．

（2）据图分析，骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，所以骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞也不能在该培养基上存活；淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活，但不能增殖，所以经过培养后，HAT培养基上没有淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞；骨髓瘤细胞与淋巴细胞之间形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基上正常生活，并无限增殖．在培养过程中为防止杂菌感染，应向培养液中添加抗生素；其体外培养需用CO2培养箱，其中CO2的主要作用是维持培养液PH．

（3）植物细胞原生质体融合常用物理法和化学法诱导剂，动物细胞融合还可以采用灭活的病毒．

（4）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是主动运输，需要载体和能量．

（5）单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备．

故答案为：

（1）动物细胞培养

（2）筛选出杂交瘤细胞    抗生素     维持培养液PH

（3）灭活的病毒

（4）主动运输

（5）特异性强、灵敏度高、可大量制备．

解：（1）单克隆抗体制备是将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自感染H5N1病毒的动物或人的效应B细胞．诱导动物细胞融合的方法有物理法、化学法、生物法（灭活的病毒），而诱导植物原生质体融合的方法有物理法和化学法，因此C过程不同于诱导植物原生质体融合的常用诱导方法是灭活的病毒．

（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可能形成杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、效应B细胞自身融合细胞3种类型的D细胞，因此需用选择性培养基筛选出既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞用于培养．

（3）随着细胞分裂次数的增多，就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制，需要用胰蛋白酶等处理使细胞从瓶壁上分离下来．

（4）培育转基因动物时，需要将目的基因导入受精卵；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此通过早期胚胎培养和胚胎分割移植，可获得多头奶牛．

故答案为：

（1）效应B淋巴（浆）　灭活的病毒

（2）3   选择性　 既能无限增殖又能产生特异性抗体

（3）接触抑制

（4）受精卵   胚胎分割移植

解：（1）B淋巴细胞不能无限增殖，因此需要将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合生成杂交瘤细胞，使其具有在体外大量繁殖并产生特异性抗体的特性．

（2）一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体．图中将抗原注入小鼠体内，而后从小鼠脾脏中获得能产生特定抗体的B淋巴细胞．

（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生特异性抗体

（4）单克隆抗体制备过程中B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合运用了动物细胞融合技术和杂交瘤细胞在特定培养基上筛选以及体外或体内培养涉及了动物细胞培养技术．

（5）细胞培养过程中，培养液需添加一定量的抗生素，以防止杂菌污染；在含5%CO2的培养箱中进行培养时CO2的主要作用是维持培养液的pH．

故答案为：

（1）B淋巴细胞不能无限增殖

（2）抗原

（3）既能无限增殖，又能产生特异性抗体

（4）动物细胞培养动物细胞融合

（5）抗生素维持培养液的pH

解：（1）图中②为细胞融合过程，在这一过程中，常用灭活的病毒（或聚乙二醇）作诱导剂．所形成的杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质，能表现出既能无限增殖又能产生特异性抗体的特性．

（2）猴天花抗体最终可从细胞培养液和小鼠腹水中提取．

（3）得到的单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、并可大量制备．

故答案为：

（1）动物细胞融合    灭活的病毒   既能产生抗体，又能无限增殖

（2）细胞培养液   小鼠腹水

（3）特异性强、灵敏度高、并可大量制备

解：（1）单克隆抗体利用了细胞融合技术将淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，然后再利用动物细胞培养技术对细胞进行培养和筛选．

（2）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是筛选杂交瘤细胞．在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的种类和数量（浓度），以保证生命活动的正常进行．

（3）从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是将产生特定抗体的杂交瘤细胞筛选出来，使得到的抗体纯度更高．

（4）单克隆抗体属于分泌蛋白，分泌蛋白的合成、加工和分泌经过了核糖体（合成场所）、内质网（加工和运输）、高尔基体（进一步加工和分泌）和细胞膜（通过细胞膜的胞吐运出细胞）．

（5）最终筛选获得的杂交瘤细胞结合了两个细胞的优点，即能无限增殖并分泌特异性抗体．

故答案为：

（1）动物细胞培养   动物细胞融合

（2）筛选杂交瘤细胞    种类和数量（浓度）

（3）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）

（4）核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜

（5）能无限增殖并分泌特异性抗体

解：（1）在进行单克隆抗体的生产过程中，要把两种细胞进行融合，一种是在体外能够大量增殖的骨髓瘤细胞，另外一种是B淋巴细胞；体外培养的过程中，贴壁生长的细胞会出现接触抑制现象．

（2）植物体细胞杂交过程中，在把植物细胞杂交之前，必须用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，培育出诸如“番茄-马铃薯”这样的杂种植株．

（3）对于基因工程来说，其核心步骤是基因表达载体的构建，若要培育能从乳汁中分泌人的干扰素的转基因牛，需要选择的受体细胞是受精卵，导入该细胞最有效的方法是显微注射法．为了让转入的干扰素基因高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间．

（4）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其获能；为使雌性个体一次排出多枚卵母细胞，常采用促性腺激素进行处理，所形成的胚胎需要培养到桑椹胚或囊胚才可以进行胚胎移植．

（5）A．通过增加生态农业中食物链和营养级，不能提高能量传递效率，A错误；B．生态农业设计的指导原则是能量的多级利用和物质的循环再生，B正确；C．生态农业比传统农业的抵抗力稳定性更高，C正确；D．生态农业可以有效减少对环境的污染，D正确．故选：A．

故答案为：

（1）B淋巴细胞         接触抑制

（2）纤维素酶和果胶酶

（3）基因表达载体的构建        受精卵         显微注射法         启动子       终止子

（4）获能            促性腺         桑椹胚或囊胚

（5）A

解：（1）在诱导原生质体融合前先要采用酶解法去除细胞壁获得原生质体，由于细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，因此根据酶的专一性原理，可用纤维素酶和果胶酶处理细胞以除去细胞壁．

（2）将杂种细胞培育成为杂种植株需要采用植物组织培养技术，其原理是植物细胞具有全能性；图中过程④相当于脱分化过程；过程⑤相当于再分化过程，该过程中细胞通过有丝分裂方式增殖．

（3）若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞含n条染色体，则“番茄-马铃薯”细胞内含m+n条染色体；花粉经离体培育得到的植株属于单倍体植株．

（4）单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．因此，制备单克隆抗体的过程如图：

故答案为：

（1）纤维素酶和果胶

（2）细胞的全能性　　　脱分化　　　有丝分裂

（3）m+n      单

（4）

解：（1 ）细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础．

（2）据图分析，骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，所以骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞也不能在该培养基上存活；淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活，但不能增殖，所以经过培养后，HAT培养基上没有淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞；骨髓瘤细胞与淋巴细胞之间形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基上正常生活，并无限增殖．

（3）单克隆抗体最主要的优点是特异性强，灵敏度高，并可能大量制备．

（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速大量增殖特点，又具备淋巴细胞的分泌专一抗体特点，经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞．最后获得的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或在小鼠腹腔内增殖，从培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体．

（5）淋巴细胞是由动物体骨髓中的造血干细胞分化、发育而来的．

故答案为：

（1）动物细胞培养       

（2）亲本细胞    具有同种核的细胞      

（3）特异性强，灵敏度高，并可能大量制备        

（4）大量增殖  分泌专一抗体   克隆化培养   抗体检测    细胞培养液    小鼠腹水        

（5）骨髓      造血干

解：（1）图示抗体是单克隆抗体，其制备的技术基础是动物细胞培养和动物细胞融合．

（2）细胞1是小鼠体内注入抗原后产生的效应B细胞，该细胞能够产生单一的特异性抗体，但不能无限增殖；细胞2是骨髓瘤细胞，能够无限增殖，但不能产生特异性抗体．

（3）细胞3是效应B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，诱导细胞融合的方法有化学法（聚乙二醇）、灭活的病毒（如仙台病毒、灭活病毒）、和物理方法（电激、振动和离心）．

（4）过程①是筛选杂交瘤细胞的过程，主要是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．通过体外培养或体内培养，能产生大量单克隆抗体，其特点是特异性强、灵敏度高．

故答案为：

（1）动物细胞培养、动物细胞融合

（2）B淋巴    骨髓瘤

（3）聚乙二醇（或仙台病毒、灭活病毒、电击等）     杂交瘤细胞

（4）既能迅速大量敏殖，又能产生专一抗体     单克隆     特异性强（或专一性强）

解：（1）实验目的是用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体，将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，获得能产生抗X病毒抗体的B淋巴细胞（浆细胞）；乙组注射 等量不含X病毒的溶液（作对照）．

（2）超低温抑制酶活性，利于保存其特性，因此用超低温冻存杂交瘤细胞．

（3）将neoR基因插入靶基因需要限制酶处理获得相同的黏性末端，再加入DNA连接酶进行连接，故使用的工具酶是基因工程中限制酶、DNA连接酶；neoR基因可作为标记基因；“靶基因失活”是因为在该DNA片段上插入neoR基因，使得靶基因中的脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达．

（4）获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞到该细胞培育成“基因敲除”小鼠需转基因技术、动物细胞培养技术等．

故答案为：

（1）获得能产生抗X病毒抗体的B淋巴细胞（浆细胞）

等量不含X病毒的溶液

（2）超低温抑制酶活性，利于保存其特性

（3）限制酶（限制性核酸内切酶）、DNA连接酶    标记基因

靶基因中的脱氧核苷酸数量序列发生改变，不能正常表达

（4）克隆技术  转基因技术（合理给分）