- 土壤中微生物的分离与计数
- 共916题
下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是（ ）
A
B
C
D
正确答案
解析
解：A、倒平板时，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故A正确；
B、左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故B正确；
C、五个区域内划线，而且每次转换划线角度后再进行划线，让菌种来源于上一次划线末端，故C正确；
D、没有让接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，故D错误．
故选：D．
金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病．金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色．如图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题．
（1）操作中在血平板上的接种方法是______，接种操作前后需要对接种工具进行______灭菌．
（2）用7.5% NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是______．
（3）在制备血平板时需将pH调节至______（“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基______后，再加入适量血液．按培养基功能分类，血平板属于______培养基．
（4）多次规范操作、重复实验，血平板上均出现______的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，需要对本次操作进行完善，完善的方案是______．
（5）为了检测其中某种菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板．将分别含有A、B两种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该病菌对抗生素B______．为方便后续使用该菌种，可将菌液用______的方法长期保存．
正确答案
平板划线法
灼烧
金黄色葡萄球菌
微碱性
冷却
鉴别
周围存在透明圈
设置不加鲜牛奶其他操作均相同的对照组
敏感
不敏感
甘油管藏
解析
解：（1）使用接种环进行接种应该只用平板划线法；接种工具灭菌的方式是灼烧灭菌．
（2）用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是分离出金黄色葡萄球菌．
（3）血液是碱性的，所以培养基应该调至碱性；灭菌法方法是高压蒸汽灭菌法，所以应该等到培养基冷却后加入血液，否则会破坏血细胞；由于该培养基能够鉴别是否含有葡萄球菌，所以属于鉴别培养基．
（4）根据题意，“金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色”，所以如果经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现透明圈的菌落，说明初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌；但这个实验要这是对照实验，对照实验的设计是在培养基中不加鲜牛奶．
（5）对相应抗生素敏感的细菌，在含有抗生素的培养基上不能生长；反之，则能生长．含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感；菌种长期保存，用甘油管藏的方法．
故答案为：（1）平板划线法 灼烧
（2）分离出金黄色葡萄球菌
（3）微碱性 冷却 鉴别
（4）周围存在透明圈 设置不加鲜牛奶其他操作均相同的对照组
（5）敏感 不敏感 甘油管藏
利用紫外线诱变选育高产β-胡萝卜素的三孢布拉霉负菌（单细胞真菌），未突变菌不能在含有浓度为10-5M的β-紫罗酮的培养基上生长．菌体随β-胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色．图甲为选育及提取获得β-胡萝卜素流程．
（1）三孢布拉霉负菌与细菌共同具有的细胞器是______．从真菌细胞中提取酶时，常常采用______法将相对分子质量不同的酶进行分离．
（2）培养基中的葡萄糖为菌体生长提供______；为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加______．
（3）进行③过程时，应选取______色的菌落接种至液体培养基．为筛选纯化β-胡萝卜素产量高的菌种，采取重复______（填图甲中数字）过程．
（4）固体平板培养基经过程②接种培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的接种方法是______；只有少数菌能生长形成菌落的根本原因是______．
（5）过程⑥是______，用纸层析法鉴定提取的胡萝卜素粗品，结果发现颜色较浅，导致该现象的原因可能是萃取时，萃取剂使用量______，提取的色素少．
（6）选取胡萝卜韧皮部细胞进行植物组织培养时，其操作步骤是①制备MS培养基；②______；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培．
正确答案
解：（1）三孢布拉霉负菌为真核细胞，细菌为原核细胞，它们共同具有的细胞器是核糖体．从真菌细胞中提取酶时，常常采用凝胶色谱法将相对分子质量不同的酶进行分离．
（2）培养基中的葡萄糖为菌体生长提供碳源（碳源和能源）；由于未突变菌不能在含有浓度为10-5M的β━紫罗酮的培养基上生长，所以为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加10-5M的β━紫罗酮．该培养基按用途分属于选择培养基．
（3）菌体随β━胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色，所以进行③过程时，应选取橙红色的菌落接种至液体培养基．为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种，采取重复③④过程．
（4）固体平板培养基经过程②接种培养后的菌落分布如图乙所示，所以该同学的接种方法是稀释涂布平板法；只有少数菌能生长形成菌落的根本原因是基因突变频率低和不定向性，只有少数基因突变的菌才能生长、繁殖．
（5）过程⑥是浓缩，用纸层析法鉴定提取的胡萝卜素粗品，结果发现颜色较浅，导致该现象的原因可能是萃取时，萃取剂使用量过少，提取的色素少．
（6）选取胡萝卜韧皮部细胞进行植物组织培养时，其操作步骤是：①制备MS培养基；②外植体消毒；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培．
故答案为：
（1）核糖体 凝胶色谱
（2）碳源 10-5M的β━紫罗酮
（3）橙红 ③④
（4）稀释涂布平板法 基因突变频率低和不定向性
（5）浓缩 过少
（6）外植体消毒
解析
解：（1）三孢布拉霉负菌为真核细胞，细菌为原核细胞，它们共同具有的细胞器是核糖体．从真菌细胞中提取酶时，常常采用凝胶色谱法将相对分子质量不同的酶进行分离．
（2）培养基中的葡萄糖为菌体生长提供碳源（碳源和能源）；由于未突变菌不能在含有浓度为10-5M的β━紫罗酮的培养基上生长，所以为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加10-5M的β━紫罗酮．该培养基按用途分属于选择培养基．
（3）菌体随β━胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色，所以进行③过程时，应选取橙红色的菌落接种至液体培养基．为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种，采取重复③④过程．
（4）固体平板培养基经过程②接种培养后的菌落分布如图乙所示，所以该同学的接种方法是稀释涂布平板法；只有少数菌能生长形成菌落的根本原因是基因突变频率低和不定向性，只有少数基因突变的菌才能生长、繁殖．
（5）过程⑥是浓缩，用纸层析法鉴定提取的胡萝卜素粗品，结果发现颜色较浅，导致该现象的原因可能是萃取时，萃取剂使用量过少，提取的色素少．
（6）选取胡萝卜韧皮部细胞进行植物组织培养时，其操作步骤是：①制备MS培养基；②外植体消毒；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培．
故答案为：
（1）核糖体 凝胶色谱
（2）碳源 10-5M的β━紫罗酮
（3）橙红 ③④
（4）稀释涂布平板法 基因突变频率低和不定向性
（5）浓缩 过少
（6）外植体消毒
如何判断制作的培养基是否灭菌彻底（ ）
正确答案
解析
解：微生物实验室培养的关键就在于防止杂菌污染，在未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后有无菌落生长，可判断是否灭菌彻底，C正确．
故选：C．
近期网络上流行一种利用制作酸奶来判断牛奶好坏的方法，以下自制酸奶的方法也随之在网络广泛流传：
①将牛奶倒入玻璃杯，放在沸水中加热10分钟．
②降温到42℃，每杯牛奶加入0.15g酸奶发酵剂．
③用干净小勺搅拌均匀，在杯子外封上保鲜膜．
④在42℃下保温5小时后，放在4℃冰箱中冷藏1小时．
请回答相关问题：
（1）牛奶在沸水中加热10分钟，属于______（消毒/灭菌）的方式，你推测酸奶发酵剂中含有的成分是______，第②步降温到420C的目的是______，第③步封上保鲜膜的目的是______．
（2）除了沸水中加热10分钟外，本过程中还有哪些操作避免了酸奶被杂菌污染？其原理是？（写出两条即可）
①操作：______，原理：______
②操作：______，原理：______
③操作：______，原理：______
④操作：______，原理：______
（3）酸奶中的多种活菌对健康有益，若要检测不同酸奶中各种有益菌的数量是否达标，可采用______法．
正确答案
解：（1）消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法．灭菌是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法．所以牛奶在沸水中加热10分钟是属于消毒．酸奶发酵剂中成分主要是乳酸菌．沸水加热后降温到42℃的目的是为了避免高温使菌种失活．牛奶中加入乳酸菌后，封上保鲜膜的作用是避免杂菌掉进去，同时也要构建一个无氧环境，抑制好氧杂菌的生长．
（2）为了避免酸奶被杂菌污染，除了沸水加热外，还可以加入酸奶发酵剂，可以使迅速使乳酸菌形成优势种群，抑制杂菌生长；封上保鲜膜的原理是避免杂菌掉落、并抑制耗氧杂菌生长；42℃下保温5小时，原因是乳酸菌的最适温度为42℃，其它杂菌在此温度下竞争力弱；使用干净的小勺，防止小勺带上过多的杂菌．
（3）检测酸奶中的有益菌是否达标，采用稀释涂布平板法．
故答案为：
（1）消毒 乳酸菌 避免高温使菌种失活 避免杂菌掉落，构建无氧环境
（2）①加入酸奶发酵剂 原理：迅速使乳酸菌形成优势种群，抑制杂菌生长
②封上保鲜膜 避免杂菌掉落、并抑制耗氧杂菌生长
③42℃下保温5小时 这是乳酸菌的最适温度，其它杂菌在此温度下竞争力弱
④用干净的小勺 防止小勺带上过多的杂菌
（3）稀释涂布平板（法）
解析
解：（1）消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法．灭菌是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法．所以牛奶在沸水中加热10分钟是属于消毒．酸奶发酵剂中成分主要是乳酸菌．沸水加热后降温到42℃的目的是为了避免高温使菌种失活．牛奶中加入乳酸菌后，封上保鲜膜的作用是避免杂菌掉进去，同时也要构建一个无氧环境，抑制好氧杂菌的生长．
（2）为了避免酸奶被杂菌污染，除了沸水加热外，还可以加入酸奶发酵剂，可以使迅速使乳酸菌形成优势种群，抑制杂菌生长；封上保鲜膜的原理是避免杂菌掉落、并抑制耗氧杂菌生长；42℃下保温5小时，原因是乳酸菌的最适温度为42℃，其它杂菌在此温度下竞争力弱；使用干净的小勺，防止小勺带上过多的杂菌．
（3）检测酸奶中的有益菌是否达标，采用稀释涂布平板法．
故答案为：
（1）消毒 乳酸菌 避免高温使菌种失活 避免杂菌掉落，构建无氧环境
（2）①加入酸奶发酵剂 原理：迅速使乳酸菌形成优势种群，抑制杂菌生长
②封上保鲜膜 避免杂菌掉落、并抑制耗氧杂菌生长
③42℃下保温5小时 这是乳酸菌的最适温度，其它杂菌在此温度下竞争力弱
④用干净的小勺 防止小勺带上过多的杂菌
（3）稀释涂布平板（法）
细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌．如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪些种类能够被彻底杀灭？（ ）
正确答案
解析
解：大肠杆菌、青霉菌和沙门氏菌都不会形成芽孢，而枯草芽孢杆菌能形成芽孢，耐高温但在121℃中会死亡．
故选：ABD．
DHA对脑神经发育至关重要．以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合技术选育高产DHA融合藻．两种藻特性如表．
据表回答：
（1）选育的融合藻应具有A藻______与B藻______的优点．
（2）通过以下三步筛选融合藻，步骤______可淘汰B藻，步骤______可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过步骤______获取生产所需的融合藻．
步骤a：观察藻落的大小
步骤b：用不含有机碳源（碳源--生物生长的碳素来源）的培养基进行光照培养
步骤c：测定DHA含量．
正确答案
解：（1）A藻自养型，产DHA，但是生长速率慢；B藻异养型，不产DHA，但是生长速率快．因此，选育的融合藻应具有A藻的产生DHA、自养特性与B藻的快速生长的优点．
（2）用不含有机碳源（碳源-生物生长的碳素来源）的培养进行光照培养可淘汰B藻和BB融合型藻类，观察藻落的大小，可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过测定DHA含量的步骤获取生产所需的融合藻．
故答案为：
（1）产生DHA、自养特性 快速生长
（2）b a c
解析
解：（1）A藻自养型，产DHA，但是生长速率慢；B藻异养型，不产DHA，但是生长速率快．因此，选育的融合藻应具有A藻的产生DHA、自养特性与B藻的快速生长的优点．
（2）用不含有机碳源（碳源-生物生长的碳素来源）的培养进行光照培养可淘汰B藻和BB融合型藻类，观察藻落的大小，可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过测定DHA含量的步骤获取生产所需的融合藻．
故答案为：
（1）产生DHA、自养特性 快速生长
（2）b a c
有些科学家欲从污染的土壤中分离筛选出能够高效降解原油的菌株进行大规模培养并应用．请回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于______培养基．筛选过程中，虽然土壤中微生物含量非常丰富，但在此培养基上长出的微生物菌落非常少，甚至有时一个培养皿中一个菌落都没有，这是因为______．
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即______和______．
（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、______和______．
正确答案
解：（1）从污染的土壤中分离筛选出能够高效降解原油的菌株需要使用以原油为唯一碳源的选择培养基．题干现象可能的原因是大部分微生物无法分解原油．
（2）固体培养基上的分离微生物的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法．
（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌法．
故答案为：
（1）原油 选择 大部分微生物无法分解原油
（2）平板划线法 稀释涂布平板法
（3）干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法
解析
解：（1）从污染的土壤中分离筛选出能够高效降解原油的菌株需要使用以原油为唯一碳源的选择培养基．题干现象可能的原因是大部分微生物无法分解原油．
（2）固体培养基上的分离微生物的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法．
（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌法．
故答案为：
（1）原油 选择 大部分微生物无法分解原油
（2）平板划线法 稀释涂布平板法
（3）干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法
“树橘柚者，食之则甘，嗅之则香”，每年的10月，正是柑橘大量上市的季节．橘子全身都是宝：不仅果肉的营养价值高，药用价值较高，其皮、核、络、叶都是“地道药材”．请回答下列问题．
（1）江南某橘子盛产地想建立一个大型的果酒、果醋加工厂，需要的发酵菌种是______和______．分离纯化这两种微生物的常用方法是：将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用______将菌液铺平．这种接种方法称为______．
（2）提取桔皮的胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是______．
（3）四川一果汁加工厂在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的______使果汁变得澄清．
（4）为了保持某橘子品种的品质，可用组织培养繁殖试管苗．培养外植体的培养基中常用的凝固剂是______．培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值______（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化．对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是______．
（5）为了检测其中某种菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板．将分别含有A、B两种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该病菌对抗生素B______．
正确答案
解：（1）果酒、果醋加工需要的发酵菌种分别是酵母菌和醋酸菌．分离纯化这两种微生物的常用方法是：稀释涂布平板法，即将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平．
（2）提取桔皮的胡萝卜素过程中，为防止石油醚等有机溶剂的挥发，在萃取加热时需安装冷凝回流装置．
（3）果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，也是果汁变得澄清，所以在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的果胶酶使果汁变得澄清．
（4）培养基中常用的凝固剂是琼脂．培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值低时，有利于芽的分化；高时，有利于根的分化．对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌．
（5）由于抗生素能抑制对抗生素敏感的微生物，因此将含有A，B两种抗生素的滤纸片均匀置于接种微生物平板上的不同位置，培养一段时间后，如果含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；如果含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感．
故答案为：
（1）酵母菌 醋酸菌 涂布器 稀释涂布平板法
（2）防止有机溶剂（石油醚）的挥发
（3）果胶酶
（4）琼脂 低 高压蒸汽灭菌
（5）敏感 不敏感
解析
解：（1）果酒、果醋加工需要的发酵菌种分别是酵母菌和醋酸菌．分离纯化这两种微生物的常用方法是：稀释涂布平板法，即将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平．
（2）提取桔皮的胡萝卜素过程中，为防止石油醚等有机溶剂的挥发，在萃取加热时需安装冷凝回流装置．
（3）果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，也是果汁变得澄清，所以在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的果胶酶使果汁变得澄清．
（4）培养基中常用的凝固剂是琼脂．培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值低时，有利于芽的分化；高时，有利于根的分化．对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌．
（5）由于抗生素能抑制对抗生素敏感的微生物，因此将含有A，B两种抗生素的滤纸片均匀置于接种微生物平板上的不同位置，培养一段时间后，如果含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；如果含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感．
故答案为：
（1）酵母菌 醋酸菌 涂布器 稀释涂布平板法
（2）防止有机溶剂（石油醚）的挥发
（3）果胶酶
（4）琼脂 低 高压蒸汽灭菌
（5）敏感 不敏感
下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是（ ）
正确答案
解析
解：A、硝化细菌能利用氮源，且能利用氧化NH3释放的化学能进行化能合成作用合成有机物，属于自养需要型生物，A正确；
B、乳酸菌是异养厌氧型生物，不能直接利用氮气，且能量来源为糖类，B错误；
C、根瘤菌进行生命活动所需要的能量来自糖类等有机物的氧化分解，属于异养需氧型生物，C错误；
D、衣藻是低等植物，能利用光能进行光合作用制造有机物，属于自养需氧型生物，D正确．
故选：AD．
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