- 土壤中微生物的分离与计数
- 共916题
下列有关微生物培养实验的叙述正确的是（ ）
A高压蒸汽灭菌时，锅内压力一般为10kPa
B倒平板时，培养基高度约为培养皿高度的
C实验结束后带菌培养基应灭菌后再倒掉
D接种固体培养基时应将菌种接入培养基内部
正确答案
解析
解：A、高压蒸汽灭菌时，锅内压力一般为100kPa，A错误；
B、倒平板时，培养基高度约为培养皿高度的
C、实验结束后带菌培养基应灭菌后再倒掉，C正确；
D、接种固体培养基时应将菌种接入培养基表面，D错误．
故选：C．
回答下列关于微生物的问题．
阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能降解阿拉伯胶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程．
（1）筛选所用的选择培养基只能以______作为唯一碳源，其原因是______．
（2）SM01的菌落为粉白色，菌落初期呈突起絮状，在显微镜下观察到其菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约lμm，初步推测为真菌．下列属于SM01肯定具有的结构和特征是______（多选）．
A细胞膜 B核糖体 C拟核 D荚膜 E芽孢 F菌盖 G细胞核 H分生孢子
（3）在分离纯化菌株时，通常使用的划线工具是______．如图1示某种划线法操作后菌落生长状况，数字表示划线顺序．某同学以同样方法对某个平板划线后，经一段时间培养，发现第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落．造成划线无菌落可能的操作失误可能是______．
（4）为探究阿拉伯胶的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做如图2所示实验．该实验的假设是______．为什么说该实验设计不合理？______．
（5）请根据（4）小题的分析完善其实验设计．______
（6）在阿拉伯胶降解酶运用到工业生产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定．图3中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比．将酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，即图3的曲线②．据图判断下列叙述错误的是______．
A．该酶只能在最佳温度范围内测出活性
B．曲线②35℃数据点是在80℃时测得的
C．曲线①表明80℃是该酶活性最高的温度
D．曲线②表明该酶的热稳定性在70℃之后急剧下降．
正确答案
解：（1）筛选能降解阿拉伯胶的菌株SM01需要使用以阿拉伯胶为唯一碳源的选择培养基，因为只有能降解阿拉伯胶的微生物能正常生长和繁殖．
（2）菌株SM01为真菌，其结构和特征有具备细胞膜、核糖体、细胞核和产生分生孢子，而没有拟核、荚膜、芽孢、菌盖．
（3）在分离纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环，接种环在使用前和每一次划线后要进行灼烧灭菌，造成划线无菌落可能的操作失误可能是：接种环灼烧后未冷却而烫死菌种或划线未从第一区域末端开始．
（4）根据题意，该实验的假设为目的菌株（菌株SM01）能分泌降解阿拉伯胶的蛋白质；由于还实验设计缺少空白对照，所以设计不合理．
（5）实验设计应完善为：另设置两组一样装置的对照组，其中第一组只用上清液，不添加蛋白酶，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率，第二组不用上清液，只用含蛋白酶的溶液，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率．
（6）结合题干和题图3分析（6）中的各选项，
A、该酶的活性可在最佳温度范围内测出，也可在酶活性范围内测出，A错误；
B、由曲线①可知此酶的最适温度是80℃，而曲线②是在酶活性最高的温度下测得的，B正确；
C、由曲线①可知此酶的最适温度是80℃，C正确；
D、由以上分析知，在70℃后曲线②急剧下降，D正确．
故答案为：
（1）阿拉伯胶 只有能降解阿拉伯胶的微生物能正常生长和繁殖
（2）ABGH
（3）接种环 接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始
（4）目的菌株（菌株SM01）能分泌降解阿拉伯胶的蛋白质 缺少空白对照
（5）另设置两组一样装置的对照组，其中第一组只用上清液，不添加蛋白酶，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率，第二组不用上清液，只用含蛋白酶的溶液，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率
（6）A
解析
解：（1）筛选能降解阿拉伯胶的菌株SM01需要使用以阿拉伯胶为唯一碳源的选择培养基，因为只有能降解阿拉伯胶的微生物能正常生长和繁殖．
（2）菌株SM01为真菌，其结构和特征有具备细胞膜、核糖体、细胞核和产生分生孢子，而没有拟核、荚膜、芽孢、菌盖．
（3）在分离纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环，接种环在使用前和每一次划线后要进行灼烧灭菌，造成划线无菌落可能的操作失误可能是：接种环灼烧后未冷却而烫死菌种或划线未从第一区域末端开始．
（4）根据题意，该实验的假设为目的菌株（菌株SM01）能分泌降解阿拉伯胶的蛋白质；由于还实验设计缺少空白对照，所以设计不合理．
（5）实验设计应完善为：另设置两组一样装置的对照组，其中第一组只用上清液，不添加蛋白酶，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率，第二组不用上清液，只用含蛋白酶的溶液，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率．
（6）结合题干和题图3分析（6）中的各选项，
A、该酶的活性可在最佳温度范围内测出，也可在酶活性范围内测出，A错误；
B、由曲线①可知此酶的最适温度是80℃，而曲线②是在酶活性最高的温度下测得的，B正确；
C、由曲线①可知此酶的最适温度是80℃，C正确；
D、由以上分析知，在70℃后曲线②急剧下降，D正确．
故答案为：
（1）阿拉伯胶 只有能降解阿拉伯胶的微生物能正常生长和繁殖
（2）ABGH
（3）接种环 接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始
（4）目的菌株（菌株SM01）能分泌降解阿拉伯胶的蛋白质 缺少空白对照
（5）另设置两组一样装置的对照组，其中第一组只用上清液，不添加蛋白酶，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率，第二组不用上清液，只用含蛋白酶的溶液，取出10ml加入阿拉伯胶溶液，测定阿拉伯胶的降解率
（6）A
下面是生物研究小组对4 种不同品牌腐乳产蛋白酶菌株进行筛选的方案，请协助完成方案，并回答有关问题：
【实验原理】在固体培养基中加入溶解性差、但可被微生物利用的酪蛋白可以形成浑浊、不透明的培养基背景．当培养基中的酪蛋白被微生物分泌的蛋白酶分解后，在菌落（沉淀圈）的周围就会形成透明圈（如图1）．透明圈的大小反映了菌落利用蛋白质的能力．
【材料与试剂】4种品牌的豆腐乳（编号品牌1、2、3、4）
【主要仪器与设备】恒温水浴锅、培养箱、高压灭菌锅等
【实验方法】
Ⅰ、制备固体平板培养基：计算→称量→溶化→调pH→______→______．
Ⅱ、运用稀释涂布平板法分离纯化菌株：分别梯度稀释制备4种腐乳的菌悬液，吸取少量的菌悬液，注入培养基平板中，涂布均匀．然后置于温度28℃的恒温箱中，培养36h．
Ⅲ、初筛菌种：从上一步培养基平板上挑选单细胞菌落，分别接种于筛选培养基中，在28℃下培养48h．挑选透明圈大而沉淀圈小的菌株，作为初筛菌株．
回答下列问题：
（1）补全“制备微生物固体培养基”的主要操作步骤①______，②______．
（2）“菌落”在生态学上属于______层次的生命系统，“稀释涂布平板法”纯化菌种的原理是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成______，从而能够在培养基表面形成单个的菌落．在进行菌种纯化时，还可以采用______法进行．
（3）初筛菌株的菌落周围“透明圈大”说明沉淀圈中的微生物分泌的蛋白酶活性______．
（4）研究人员将初筛菌株接种于发酵液中，在适宜条件下培养，并每隔一定时间取样检测发酵液中蛋白酶的活性，结果如图2：
根据曲线可知，在培养的早期，各品牌菌种发酵液中蛋白酶活性都迅速升高，这可能与______有关，研究中最好选择哪一品牌的菌种作为高产蛋白酶的菌株______．
正确答案
解：（1）制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
（2）“一个菌落”是同种细菌的群体，在生态学中属于一个种群．稀释涂布平板法依据的原理是在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的菌种分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落．在进行菌种纯化时，还可以采用平板划线法进行．
（3）淀粉分解菌可以产生淀粉酶，在鉴别培养基上，淀粉分解菌的菌落周围形成透明圈，一定范围内淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，对菌株生存越有利．
（4）图中四个品牌，随着时间的推移，活性迅速增加，最终品牌1稳定在较高的水平上．
故答案为：
（1）灭菌 倒平板
（2）种群 单个细胞 平板划线
（3）越高
（4）时间 品牌1
解析
解：（1）制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
（2）“一个菌落”是同种细菌的群体，在生态学中属于一个种群．稀释涂布平板法依据的原理是在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的菌种分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落．在进行菌种纯化时，还可以采用平板划线法进行．
（3）淀粉分解菌可以产生淀粉酶，在鉴别培养基上，淀粉分解菌的菌落周围形成透明圈，一定范围内淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，对菌株生存越有利．
（4）图中四个品牌，随着时间的推移，活性迅速增加，最终品牌1稳定在较高的水平上．
故答案为：
（1）灭菌 倒平板
（2）种群 单个细胞 平板划线
（3）越高
（4）时间 品牌1
正确答案
解析
解：A、筛选与分离工程菌需要用涂布法将受体菌群接种在培养基表面，A正确；
B、根据题干可知，目的菌能够在含有氨苄青霉素和X-gal的培养基上生存，所以筛选与分离时的培养基应含有氨苄青霉素和X-gal，B正确；
C、接种时接种环应该使用灼烧灭菌，C正确；
D、根据题干可知，受体菌不含LacZ基因和氨苄青霉素抗性基因，不能使大肠杆菌菌落呈蓝色，D错误．
故选：D．
尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并初步筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示．请分析回答问题：
（1）此培养基能否用于植物组织培养？______，理由是______．
（2）培养基中加入尿素的目的是______，这种培养基属于______培养基．
（3）在培养“目的菌”的实验过程中需要振荡培养，原因是______．
（4）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有______、______和______．
（5）将土壤样品经过梯度稀释后，涂布在培养基平板上，若培养基中存在有分解尿素的细菌，细菌合成的脲酶将尿素分解为______使pH增高，使其菌落周围会出现红色环带．细菌因没有______系统，其分泌酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同．
正确答案
解：（1）分析题图中培养基的配方可知，此培养基中缺乏植物组织培养所必需的植物激素，所以此培养基不能用于植物组织培养．
（2）分析题图培养基配方可知，此培养基是以尿素为唯一氮源的培养基，这样只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源而无法生长，起到了筛选能分解尿素的菌的作用．
（3）分析培养基可知，目的菌生长所需的氮源来自尿素，目的菌生长所需的碳源来自葡萄糖；由于目的菌是需氧菌，培养时需要震荡培养以便为微生物生长提供足够的氧气．
（4）常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌．
（5）将土壤样品经过梯度稀释后，涂布在培养基平板上，若培养基中存在有分解尿素的细菌，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨使pH增高，使其菌落周围会出现红色环带．细菌属于原核生物，没有生物膜系统，其分泌酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同．
故答案为：
（1）不能 缺少植物激素（或缺少植物需要的各种营养）
（2）筛选目的菌 选择
（3）为目的菌提供氧气
（4）高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌
（5）氨 生物膜
解析
解：（1）分析题图中培养基的配方可知，此培养基中缺乏植物组织培养所必需的植物激素，所以此培养基不能用于植物组织培养．
（2）分析题图培养基配方可知，此培养基是以尿素为唯一氮源的培养基，这样只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源而无法生长，起到了筛选能分解尿素的菌的作用．
（3）分析培养基可知，目的菌生长所需的氮源来自尿素，目的菌生长所需的碳源来自葡萄糖；由于目的菌是需氧菌，培养时需要震荡培养以便为微生物生长提供足够的氧气．
（4）常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌．
（5）将土壤样品经过梯度稀释后，涂布在培养基平板上，若培养基中存在有分解尿素的细菌，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨使pH增高，使其菌落周围会出现红色环带．细菌属于原核生物，没有生物膜系统，其分泌酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同．
故答案为：
（1）不能 缺少植物激素（或缺少植物需要的各种营养）
（2）筛选目的菌 选择
（3）为目的菌提供氧气
（4）高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌
（5）氨 生物膜
某课题小组欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌．下列操作正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、阅读题干可知实验目的是筛选出能分解石油的细菌，培养基的配方应以石油为唯一碳源，不能用牛肉膏蛋白胨培养基进行培养，A错误；
B、分离菌种常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板对微生物法，但对活菌进行计数常用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，B错误；
C、对微生物进行分离，应该用稀释涂布平板法分离菌种，C正确；
D、接种后放在适宜温度的培养箱中培养，不需要光照，D错误．
故选：C．
外科手术器械和罐头食品的灭菌处理，标准是要能够杀死（ ）
正确答案
解析
解：因食物腐败变质是由于微生物的生长和大量繁殖而引起的．根据食物腐败变质的原因，食品保存就要尽量的杀死或抑制微生物的生长和大量繁殖．外科手术器械和罐头食品的消毒，都要求无菌．要杀灭一切生物，包括芽孢．而芽孢是最难杀灭的，因为芽孢是细菌度过不良环境的一种休眠体，对干旱、低温、高温等恶劣环境都有很强的抵抗力，故而杀死了芽孢，细菌就都被杀死了．所以，外科手术器械消毒的标准是能够杀死细菌休眠体芽孢为标准．
故选：D．
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为______；
（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过______灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是______；
（3）如示意图A和B中，______表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果；
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另-部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的______的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高______的利用率．
正确答案
解：（1）微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由由题意知1ml水样中的菌落数是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×104个，每升水样中的活菌数为3.8×104×103=3.8×107．
（2）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是；将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落．
（3）分析题图可知，A培养皿采用的接种方法是平板划线法，B培养皿采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（4）由题意可知，振荡培养比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需要菌，由于振荡培养提高l培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，细菌生长速度加快．
故答案为：
（1）检测培养基平板灭菌是否合格 3.8xl07
（2）灼烧，将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧（氧气） 营养物质
解析
解：（1）微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由由题意知1ml水样中的菌落数是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×104个，每升水样中的活菌数为3.8×104×103=3.8×107．
（2）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是；将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落．
（3）分析题图可知，A培养皿采用的接种方法是平板划线法，B培养皿采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（4）由题意可知，振荡培养比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需要菌，由于振荡培养提高l培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，细菌生长速度加快．
故答案为：
（1）检测培养基平板灭菌是否合格 3.8xl07
（2）灼烧，将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧（氧气） 营养物质
高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性．研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示．
（1）进行①过程的目的是______；②过程所使用的接种方法是______法．
（2）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于______培养基，仅以淀粉作为______源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时应加入______作为凝固剂．
（3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是______；一般对配制的培养基采用______法灭菌．
（4）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放______分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈______（大或小）的菌落，接种到Ⅱ号培养基．
正确答案
稀释
稀释涂布平板
选择
（唯一）碳
琼脂
先调节pH，后灭菌
高压蒸汽灭菌
淀粉酶
大
解析
解：（1）分析题图可知，①过程是梯度稀释，目的是对样品进行稀释；②过程是用稀释涂布平板法进行接种．
（2）本题实验的目的是筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，从用途上来说，Ⅰ号培养基属于选择培养基；本培养基以淀粉为唯一碳源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时应加入琼脂作为凝固剂．
（3）培养基配制和灭菌时应先调节PH值，然后再进行灭菌，如果先灭菌在调节PH．在调节PH时又会污染培养基；一般对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．
（4）能分解淀粉的嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，透明圈阅读淀粉酶的活性越强，所以要从中挑出透明圈
大的菌落，接种到Ⅱ号培养基上．
故答案应为：
（1）稀释 稀释涂布平板
（2）选择 （唯一）碳 琼脂
（3）先调节pH，后灭菌 高压蒸汽灭菌
（4）淀粉酶 大
下列有关细菌培养的叙述，正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；
B、青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以青霉素培养基抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；
C、破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；
D、在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动，D正确．
故选：D．
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