热门试卷

62．GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图21所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的           限制酶进行酶切。

羊绒素有“软黄金”之称，内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊是我国的两大产绒品种。我国生物学家运用现代生物技术培育出了转基因绒山羊，其过程如下图所示：

（1）在辽宁绒山羊细胞中获取的IGFI基因在导入胚胎干细胞之前须                   ，这是基因工程操作的核心步骤，若该过程使用的质粒是双链闭合环状的DNA分子，用两种识别序列不同的限制酶M和N切割（识别序列和切割位点如下右图），通过凝胶电泳分离分析得下表。

则：①在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有            个。

②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：                  ；连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割：                。

（2） 胚胎干细胞(ES)可由囊胚的          分离培养获得，转基因胚胎干细胞培养过程中，须保持培养箱中含有5%的CO2的目的是         。所配制的培养液除了含有各种营养成分，满足适宜的温度和酸碱性外，还应注意调节培养液的             ，否则将影响细胞的正常生命活动。

（3）干细胞经扩大培养诱导分化为早期胚胎，随后即可植入经           处理的代孕母羊体内。

科学家将人的生长激素基因与pBR322质粒进行重组，得到的重组质粒导入牛的受精卵，使其发育为转基因牛，再通过细胞工程培育为转基因克隆牛。pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点(如图2)。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题。

(1)图1中显示的人的生长激素基因是通过人工合成的，图中①过程需要的酶是________。该过程所依据的碱基互补配对原则是________________(用字母和箭头表示)。

(2)图1中的mRNA是从人体的哪些细胞中获取的？________________________。

(3)重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示：

①如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的________，即目的基因插入了________中。

②如果受体菌在培养基A上不能生长、繁殖形成菌落，而在培养基B上能生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的________，即目的基因插入了________中。

③如果受体菌在培养基A和培养基B上都能生长、繁殖形成菌落，则使用限图2中的制酶a的切点是________。

普通番茄细胞中含多聚半乳糖醛酸酶基因（用A表示），控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄易软化，不耐储藏。抗多聚半乳糖醛酸酶基因可以使番茄不再产生多聚半乳糖醛酸酶，从而使番茄长时间抗软化，容易储存和运输。下图是通过基因工程培育抗软化耐储藏番茄的过程及原理。请分析回答下列问题：

（1）普通番茄（AA）也可以通过__________育种的方法，最终获得基因型为aa（不能合成多聚半乳糖醛酸酶）的抗软化、耐储存的番茄。

（2）利用基因工程将目的基因导入植物细胞，目前采用最多的方法是__________，该方法中用到的目的基因载体是__________，目的基因需插入到该基因载体的__________上。

（3）图1中获得导入抗多聚半乳糖醛酸酶基因的番茄细胞，需要经过__________技术获得转基因番茄，细胞先经脱分化形成__________，再形成丛芽和根。

（4）根据图2分析抗多聚半乳糖醛酸酶基因能使番茄抗软化的原理是两个基因分别转录出的mRNA__________，从而阻断了__________过程。