热门试卷

解：（1）步骤①中，用于PCR性别鉴定的CHD基因在W和Z两条染色体上都有引物，但长度不同，分别用CHD-W和CHD-Z表示鸡胚基因组DNA．根据两个基因的碱基序列设计特定的，用做模板．每个PCR循环可分为三步变性（解链）、复性（退火）和延伸．将PCR产物电泳后，出现一条条带的为雄性．

（2）步骤②中，要用相同的限制性内切酶切割质粒和含有S基因的DNA片段，以构建含有S基因的表达载体．将其导入受体细胞时常用的方法显微注射法．

（3）根据图示分析，丙组和丁组比较说明视黄酸能促进内源S基因的表达；乙组和丁组比较说明外源导导入的S基因过（大）量表达．与乙、丙、丁三组相比，甲组的结果说明视黄酸和外源S基因两种因素能共同促进ESC分化成生殖细胞．

（4）精子是由睾丸中精原细胞经减数分裂发育而来的．对该过程起调节作用的激素是由睾丸分泌的雄激素，若正常雄性动物体内该激素浓度偏高会抑制促性腺激素释放激素和促性腺激素的释放，该调节方式称为反馈调节．

故答案为：

（1）引物      鸡胚基因组DNA        变性（解链）、复性（退火）和延伸     一条

（2）相同的限制性内切酶         表达载体      显微注射法

（3）视黄酸能促进内源S基因的表达        外源导导入的S基因过（大）量表达

视黄酸和外源S基因两种因素能共同促进ESC分化成生殖细胞（视黄酸和外源S基因两种因素共同促进ESC的减数分裂）

（4）精原      雄激素     促性腺激素释放激素      促性腺激素     反馈调节

解：（1）图示过程运用了DNA拼接技术、动物细胞融合技术、动物细胞培养技术等．

（2）图中①过程箭头从RNA指向DNA，为逆转录过程，需要逆转录酶的催化．过程③将重组DNA导入动物细胞，常用显微注射法．

（3）细胞Ⅱ应具有的特点是既能无限增殖，又能产生特异性抗体，与杂交瘤细胞的特点相同．

（4）体外培养细胞Ⅱ，首先应保证其处于的无菌无毒环境，可以加入抗生素以达到杀菌的目的．

（5）对于转基因成功的细胞I还要进行培养和抗原-抗体杂交检测，经多次筛选从而得到细胞Ⅱ．

（6）图示过程生产的单抗是免疫活性物质，能与病毒特异性结合，所以可对禽流感进行治疗．

故答案为：

（1）动物细胞培养

（2）逆转录酶  显微注射法

（3）能产生特异性抗体的杂交瘤细胞

（4）无菌、无毒   抗生素

（5）抗原-抗体杂交

（6）治疗

解：（1）为给供体母牛注射促性腺激素可促使其超数排卵，这样可以获得更多的卵母细胞．采集的卵母细胞都需要进行体外培养，其目的是使卵母细胞成熟；从良种公牛采集的精子需获能后才能进行受精作用．

（2）显微注射法是将目的基因导入动物细胞最有效的方法．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法，其中基因枪法是将目的基因导入单子叶植物细胞常采用的方法．

（3）①表示动物细胞培养过程，该过程所用的培养基为液体培养基．②表示胚胎移植过程，该过程应该选择发育到桑椹胚或囊胚阶段的胚胎，因此①过程应保证发育到桑椹胚或囊胚阶段；进行②胚胎移植过程操作前需要对供、受体母牛进行选择，并用激素进行同期发情处理，保证胚胎移植入相同的生理环境．

（4）获得转基因牛需要采用基因工程技术，而基因工程的核心步骤是构建基因表达载体．

故答案为：

（1）促性腺激素    使卵细胞成熟     获能

（2）显微注射   基因枪

（3）液体培养基    桑椹胚或囊胚    同期发情

（4）构建基因表达载体

解：（1）对良种母畜注射促性腺激素可促其超数排卵；精子获能后才能参与受精，因此体外受精前，需对精子进行获能处理．

（2）C表示基因表达载体的构建过程，该过程中首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组DNA．为让hALB基因在牛的乳腺细胞中表达，需将hALB基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起．在分子水平上检测目的基因是否成功表达的方法是抗原-抗体杂交法．

（3）图中D表示早期胚胎培养过程；进行性别鉴定时，可取囊胚的①滋养层细胞做DNA分析．

（4）E表示胚胎移植过程，在胚胎移植时，要对供受体进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此通过胚胎分割移植技术可获得更多的转基因牛．

故答案为：

（1）促性腺激素    获能

（2）限制酶和DNA连接酶     乳腺蛋白基因的启动子    抗原-抗体杂交

（3）早期胚胎培养     ①滋养层

（4）同期发情    胚胎分割

解：（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是GATTC--．过程③表示切割后的目的基因和质粒发生重组，该过程需要DNA连接酶．

（2）目的基因的扩增可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键，设计引物对的依据绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列．

（3）①根据题意可知，绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp）．图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），说明5300bp的DNA条带是原质粒中切去部分片段的质粒；而目的基因也用这两种酶进行切割，因此形成的重组质粒上仍然存在这两种酶的识别位点．则重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为5300bp（质粒）和720bp（目的基因）的片段条带．

②质粒有5369个碱基对，质粒经BamHI单酶切后碱基长度不变．而重组质粒的长度=5300+720=6020kb，用BamHI单酶切割长度也不变．由于电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关，因此电泳后重组质粒在图2中质粒之上．

（4）由于该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，而导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长，因此用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞不能成功．

故答案为：

（1）GATTC--DNA连接酶  

（2）绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列

（3）①5300bp    720bp  

 ②如右图

（4）不能成功，导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长

解：（1）据图分析：2表示质粒，4表示目的基因（或胰岛素基因），6表示重组质粒，7表示受体细胞（或大肠杆菌）．

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，在细胞外进行，使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用．

（3）重组质粒的获得必须用同一种限制酶切割质粒和目的基因，使它们产生相同的黏性末端，再加入适量的DNA连接酶，才可形成．

故答案为：

（1）质粒、目的基因、重组质粒、受体细胞

（2）构建基因表达载体

（3）同一种限制酶    黏性末端     DNA连接

解：（l）将目的基因导入植物细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态．

（2）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．

（3）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花．

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据目的基因（抗虫基因）的核苷酸序列设计特异引物，以含目的基因的菊花DNA为模板进行第一轮扩增．

（5）①实验设计要遵循对照原则和单一变量原则，本实验的目的是探究转基因菊花对菊天牛2龄幼虫的作用，可见自变量为是否加入转基因菊花嫩茎及叶片，因此对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物．

②据表分析，实验组与对照组死亡率差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．

故答案为：

（1）Ca2+（或CaCl2）

（2）感染菊花（或“植物”）细胞，并将T-DNA转移至受体细胞    染色体DNA    

（3）卡那霉素    

（5）抗虫基因（目的基因）    转基因菊花的DNA（或“含目的基因的菊花DNA”）

（6）①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物    ②实验组与对照组死亡率

解：（1）PCR扩增技术是在模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物存在下，依赖于热稳定DNA聚合酶（Taq酶）促合成反应．

（2）将目的基因与质粒结合形成重组质粒的过程中，需要同一种限制酶切割目的基因和质粒，使他们露出相同的末端，在用DNA连接酶连接形成重组质粒．

（3）通过抗性基因可以检测目的基因是否导入．据图可知，重组质粒时抗氨苄青霉素基因被破坏，而抗四环素基因没有被破坏．因此可在培养细菌B的培养基中加入四环素，若在培养基上观察到大量的细菌B的菌落，表明目的基因已成功导入细菌B．所用的培养基属于筛选用的．

（4）通过显微镜直接统计菌落的数目，通过统计菌落的数目来推测活菌数目比实际的数目要少．当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落，不是很精确，所以要设计对照实验来确定统计数目的准确．

故答案为：

（1）耐高温的DNA聚合酶

（2）限制性核酸内切酶、DNA连接酶

（3）四环素    选择

（4）显微镜直接计数　　少         当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落       对照组

解：（1）基因工程中，运载工具包括质粒、噬菌体及动植物病毒等，其中质粒是主要运载工具；①表示基因表达载体的构建过程，首先需要限制酶切割含有目的基因的DNA和运载体DNA，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组质粒．

（2）胰蛋白酶可将组织块分散成单个细胞；动物细胞培养过程中需要一定的气体环境（95%氧气和5%二氧化碳），其中5%CO2的作用是维持培养基的pH．

（3）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素对动物进行超数排卵处理；成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核．

（4）在胚胎移植时，可通过胚胎分割技术获得更多的胚胎，实施该技术的最佳时期是桑椹胚或囊胚时期．

（5）判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术进行检测是否已转录出mRNA．

故答案为：

（1）质粒   限制酶和DNA连接酶

（2）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶 ） 维持培养基的pH

（3）促性腺激素    去核

（4）胚胎分割   桑椹胚或囊胚  

（5）分子杂交

解：（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因．

（2）图2中的目的基因是指乙肝病毒结构中的蛋白质或包膜或衣壳或酶基因，其作用是作为抗原，刺激机体发生免疫反应，产生记忆B、T淋巴细胞．

（3）根据图1可知IL-2、IFN-γ是免疫分子，因此利用IL-2、IFN-γ联合基因构建重组质粒-2的目的是表达IL-2、IFN-γ等免疫分子，注射给慢性乙肝患者，弥补患者体内IL-2、IFN-γ分子不足，促进T细胞分裂分化，形成更多致敏T细胞，提高细胞免疫功能．

（4）由图可知，含有目的基因的外源DNA分子上含有限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ、BglⅡ、AluⅠ的切割位点，若用AvrⅡ切割会破坏目的基因，若用AluⅠ切割会破坏质粒上的启动子，因此要构成能有效表达的重组质粒1，并提高重组效率，选择的限制酶是SnaBⅠ和BglⅡ；含有目的基因的外源DNA分子上含有2个BglⅡ切割位点，含有1个SnaBⅠ切割位点，因此用这两种限制酶作用后，含目的基因1的乙肝病毒DNA区段将分解成4个大小不一的片段．

（5）若用限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ、BglⅡ联合酶切pCDNA质粒，获得的DNA片段的长度分别是6、4、48KB；用限制酶SnaBⅠ、BaMⅠ、BglⅡ联合酶切pCDNA质粒，得到的DNA片段的长度分别是7.5、2.5、24、24KB．因此，在pCDNA质粒中有2个限制酶BaMI的位点，分别作用于距SnaBⅠ酶切位点右侧1.5或2.5KB处，以及左侧24KB处，如图

或．

（6）抗原主要有效成分是蛋白质，若口服，蛋白质易被消化道蛋白酶水解成不具抗原功能的氨基酸，不能起到抗原的作用，因此通过吃番茄的方式接种疫苗的效果很不理想．

（7）A、图中①是DNA的复制过程，需要解旋酶；②是DNA双链解旋的过程，也需要DNA解旋酶，A正确；

B、图中②是解旋过程，③是转录过程，④是逆转录过程，B错误；

C．过程③是转录，发生在肝细胞的细胞核中，C错误；

D．能发生A、U配对的过程有④逆转录过程和⑥翻译过程，D正确．

故选：AD．

故答案为：

（1）PCR（体外扩增）

（2）蛋白质或包膜或衣壳或酶  作为抗原，刺激机体发生免疫反应，产生记忆B、T淋巴细胞．

（3）表达IL-2、IFN-γ等免疫分子，注射给慢性乙肝患者，弥补患者体内IL-2、IFN-γ分子不足，促进T细胞分裂分化，形成更多致敏T细胞，提高细胞免疫功能．

（4）SnaBⅠ和BglⅡ4

（5）作用位点2个，分别作用于距SnaBⅠ酶切位点右侧1.5或2.5KB处，以及左侧24KB处．

    或

（6）抗原主要有效成分是蛋白质，若口服，蛋白质易被消化道蛋白酶水解成不具抗原功能的氨基酸，不能起到抗原的作用

（7）AD

解：（1）图中a过程表示目的基因的获取，该过程要用到限制酶．而目的基因在与载体重组过程中需要DNA连接酶的参与，并依据碱基互补配对原则进行重组．载体的化学本质是 环状DNA．图中b过程里科学家要构建杀虫晶体蛋白质基因的表达载体，则该基因表达载体的组成有目的基因、启动子、终止子、复制原点、标记基因．

（2）将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法，其中花粉管通道法是我国科学家独创的十分简便经济的方法，农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．

（3）为确定抗虫棉是否培育成功，既要用放射性同位素标记的目的基因（或Bt基因）作探针进行分子杂交测试，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是让害虫吞食抗虫棉叶子，观察害虫的存活状态．

（4）蛋白酶可以将蛋白质水解成多肽，因此活化的毒性物质应是一种多肽分子．

故答案为：

（1）限制酶

（2）花粉管通道法     农杆菌转化法     显微注射

（3）目的基因（或Bt基因）      让害虫吞食抗虫棉叶子，观察害虫的存活状态

（4）多肽

解：（1）运载体的化学本质的DNA，常用的极影工具酶是限制酶和DNA连接酶．

（2）确诊糖尿病常用的方法是检测尿液中是否含有葡萄糖，鉴定时常用斐林试剂，看是否出现砖红色沉淀．

（3）由于在细胞分化过程中，基因是选择性表达的，所以人的口腔上皮细胞中不转录出胰岛素mRNA，因而不能利用口腔上皮细胞来完成①过程．

（4）质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端如图所示：

．

（5）限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，因此目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端为：．

（6）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能够连接起来．

故答案为：（1）DNA  限制酶和DNA连接酶

（2）检测尿液中是否含有葡萄糖

（3）基因是选择性表达

（4）

（5）

（6）上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的

解：（1）由以上分析可知，图中②表示花药离体培养获得单倍体的过程；⑦表示获取目的基因的过程，常用鸟枪法；④表示采用酶解法去除植物细胞壁的过程，该过程利用了酶的专一性．

（2）方法一是单倍体育种，其原理是染色体变异和植物细胞的全能性；方法三是采用基因工程技术育种，其原理是基因重组；三种方法中②⑥⑨过程都采用了植物组织培养技术．

（3）植物丙的细胞核中已含有一个抗除草剂基因，其产生配子有可能含有一个抗虫剂基因，让植物丙自交（或培育另一除草剂植物与植物丙杂交）在后代中就可能选育出纯合的抗除草剂植物．因此，通过常规的杂交方法能获得纯合的抗除草剂植物．

故答案为：

（1）花药离体培养法   鸟枪法  专一   

（2）植物细胞的全能性         基因重组   ②⑥⑨植物组织培养   

（3）能 由图可知：植物丙的细胞核中已含有一个抗除草剂基因，其产生配子有可能含有一个抗虫剂基因，让植物丙自交（或培育另一除草剂植物与植物丙杂交）在后代中就可能选育出纯合的抗除草剂植物

解：（1）图中a表示转录过程，b表示逆转录，因此可以看出图中a、b所示表示通过逆转录法获得目的基因．基因工程操作四步曲中的核心步骤是基因表达载体的构建．

（2）据图分析，目的基因的两侧有-GGATCC-、-GATC-两种序列，由于酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一酶II的识别序列和切点是一↓GATC-，因此只能选择限制酶Ⅱ获取目的基因．图中可以看出目的基因插入到基因Ⅱ中，因此检验重组载体导入能否成功，需要利用基因I作为标记基因．

（3）过程e将水稻细胞培养成完整植株运用了细胞工程中的植物组织培养技术，在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成植株．

（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过蛋白质工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计．

故答案为：

（1）反转录法（逆转录合成）  基因表达载体的构建  

（2）限制酶Ⅱ基因I

（3）植物组织培养     脱分化和再分化

（4）蛋白质