热门试卷

解：（1）黄曲霉毒素AFB1是一种化学物质，属于化学类致癌因子．

（2）引起癌变的基因有原癌基因和抑癌基因，抑癌基因主要是阻止细胞不正常的增殖，所以p53基因属于抑癌基因．肝癌细胞容易分散和转移的原因是细胞表面的糖蛋白等物质减少，细胞不能识别而导致的．

（3）①甲菌液细胞含解毒酶，说明完成了基因的表达，所以甲菌液含有合成AFB1解毒酶的mRNA模板，因此应选择甲菌液的细胞提取总RNA．   

②过程Ⅱ为PCR技术，该过程中需两种引物（引物1、引物2），若过程Ⅱ循环5次，将产生25=32个子代DNA分子中，只有亲代DNA分子中不需要引物，因此需31个引物1．

③检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采用抗原-抗体杂交方法．

（4）①本实验的两个自变量，分别为AFB1的有无和AFB1解毒酶的含量．

②本实验中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是B组．

③经测定，某污染饲料中AFB1含量为100μg/kg，则每千克饲料应添加5克AFB1解毒酶．解毒效果最好．同时节的了成本．

（5）肿瘤组织在培养之前，必须先用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使之分散成单个细胞，制成细胞悬液．

故答案为：

（1）化学   

（2）抑癌     糖蛋白

（3）①甲   甲菌液细胞的AFB1解毒酶基因已转录生成了mRNA，而在乙菌液细胞中该基因未转录

②31   ③抗原-抗体杂交

（4）①AFB1的有无和AFB1解毒酶的含量   ②B组     ③5

（5）胰蛋白酶

解：（1）以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录，所以若已获取PG的mRNA，可通过逆转录法获取PG基因．

（2）基因工程中改造过程需要用到的工具有限制酶、DNA连接酶和质粒，若得到的目的基因两侧需人工合成BamHⅠ黏性末端，根据BamHⅠ的识别序列，可知目的基因两侧的黏性末端为：

（3）基因转录的产物是mRNA，在转录时需要RNA聚合酶．在该基因上游加结构A可确保基因的反义转录，结构A上应具有RNA聚合酶结合位点，在该番茄新品种的培育过程中，常用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞．

（4）由图可知，重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏，因此用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有卡那霉素的培养基进行筛选．之后还需将其置于质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生质壁分离现象来鉴别细胞壁是否再生．

（5）将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用植物组织培养技术，该技术操作过程中除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素即生长素和细胞分裂素．

（6）若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄成功．

故答案为：

（1）逆转录（或cDNA文库）

（2）限制酶、DNA连接酶和质粒

（3）RNA聚合      农杆菌转化法

（4）卡那霉素        是否发生质壁分离

（5）植物组织培养    植物激素      

（6）长

解：（1）步骤①核移植中所选的卵母细胞应处于减数第二次分裂中期．

（2）胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）．故步骤②中，ES细胞在形态上表现为细胞体积小，细胞核大，核仁明显的特点，ES细胞比体细胞全能性高．

（3）利用PCR 技术扩增目的基因技术和构建cDNA文库都需要需要模板的．

（4）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的基因表达载体（重组质粒），是核心环节．

（5）基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交．

故答案为：

（1）减数第二次分裂中（MⅡ中）   

（2）高　　　

（3）BC

（4）基因表达载体（重组质粒）    

（5）抗原-抗体杂交

解：（1）由以上分可知①是逆转录．构建A基因重组载体时，首先需用限制性核酸内切酶切割含有A基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶连接A基因和运载体形成A基因重组载体．

（2）在单克隆抗体的制备过程中，至少需要经过两次筛选，一次是用用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；另一次是用专一抗体检测方法筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．

（3）分析图解可知，该过程中首先利用基因工程技术获得A蛋白，然后利用动物细胞融合技术获得重组细胞X，在利用动物细胞培养技术对X细胞进行培养．

（4）由于在二次免疫过程可以增加小鼠体内的效应B细胞数，因此在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次．

（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗．对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原-抗体杂交法，即用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测．

故答案为：

（1）逆转录      限制酶和DNA连接酶

（2）选择性培养基筛选     用专一抗体检测

（3）转基因技术   动物细胞融合技术   动物细胞培养技术

（4）通过二次免疫，增加小鼠体内的效应B细胞数 

（5）A蛋白     抗A蛋白的单克隆抗体

解：（1）水稻细胞属于真核细胞，苏云金杆菌细胞属于原核细胞，真核基因结构和原核基因结构有所不同，原核基因的编码区是间隔、不连续的．

（2）获取目的基因的方法一般可以从基因文库中直接获取，或者利用人工合成的方法．

（3）目的基因和运载体重组时必须具有相同的粘性末端，然后用DNA连接酶进行连接．

（4）图中C表示脱分化过程．培养基中除了含有必要营养物质，琼脂和激素外，还必须加入除草剂．该培养基从用途上看属于选择培养基．

（5）抗虫基因在水稻细胞中表达过程为：抗虫基因 mRNA伴孢晶体蛋白．

（6）叶绿体遗传表现为母系遗传，目的基因不会通过叶绿体传递给近缘物种，因此如果把目的基因导入叶绿体DNA 中，就可以避免“基因污染”．

故答案为：

（1）基因编码区是间隔、不连续的

（2）从基因文库中获取或人工合成基因

（3）

（4）脱分化   除草剂    选择培养基

（5）抗虫基因 mRNA伴孢晶体蛋白

（6）叶绿体遗传表现为母系遗传，目的基因不会通过叶绿体传递给近缘物种

解：（1）基因工程中，在体外扩增目的基因常利用PCR技术．

（2）要利用奶牛乳汁生产组织型纤溶酶原激活剂（tPA），在构建的基因表达载体中，应将tPA基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件结合，使目的基因在乳腺组织中特异性表达．将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法．

（3）在培育转基因奶牛的过程中，奶牛必须是雌性的，应取囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定，选用雌性胚胎，通过胚胎移植技术，将早期胚胎移入代孕母牛的子宫内．从个体水平上看，若转基因牛的乳汁中产生组织型纤溶酶原激活剂，则可确定转基因牛培育成功．

（4）若从囊胚的内细胞团可分离出ES细胞，培养ES细胞时，培养液中加入分化诱导因子，可以分化为不同类型的细胞．

故答案为：

（1）PCR

（2）乳腺蛋白    显微注射法

（3）性别    胚胎移植    转基因牛的乳汁中产生组织型纤溶酶原激活剂

（4）分化诱导因子

解：（1）引物Ⅰ和Ⅲ延伸的方向向左，引物Ⅱ引物延伸的方向向右，引物组合只能是Ⅰ和Ⅱ，或Ⅱ和Ⅲ．扩增T-DNA插入位置，应该是扩增包括T-DNA和两侧A基因片段．故选引物Ⅱ和Ⅲ．

（2）两组引物（只标记了部分碱基序列）都不合理的原因：

①第1组：引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效．

②第2组：引物I′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效．

（3）利用生物反应器培养动物细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制．通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以扩大细胞贴壁生长的附着面积，增加培养细胞的数量，也有利于空气交换．

（4）胚胎干细胞来自原始性腺和早期胚胎（如囊胚的内细胞细胞），因此要获取单个胚胎干细胞可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理囊胚的内细胞，也可以从胎儿的原始生殖腺中分离；胚胎干细胞在饲养层细胞上（或紫外线照射后的成纤维细胞）或加入抑制因子时可实现只增殖而不分化，用于治疗人类的组织损伤和某些顽症，也可用于器官移植．

（5）一般来说，生态工程的主要任务是对已被破坏的生态环境（或受损的生态系统）进行修复，对造成环境污染和破坏的生产方式进行改善，并提高生态系统的生产力．生态工程所遵循的基本原理有整体性、协调与平衡、系统学和工程学、物质循环再生和物种多样性原理等．

故答案为：

（1）Ⅱ和Ⅲ

（2）①引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效

②引物I′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效

（3）扩大细胞贴壁生长的附着面积

（4）蛋白酶/胶原蛋白酶        饲养层

（5）已被破坏的生态环境（或受损的生态系统）    物种多样性

解：（1）由于在细胞分化过程中，基因是选择性表达的，所以人的皮肤细胞中不转录出胰岛素mRNA，因而不能利用人的皮肤细胞来完成①过程．

（2）过程②以RNA为模板进行逆转录，所以必须的酶是逆转录酶．过程③是将DNA双链解开，形成两条单链，所以必须的酶是解旋酶．过程⑦是构建基因表达载体，其过程中将A、B连接时必须的酶是DNA连接酶．

（3）图中C为基因表达载体，其组成包括目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点．

（4）为使过程⑧更易进行可用CaCl2药剂处理D，使其成为感受态细菌．

故答案为：

（1）不能 基因是选择性表达的，人的皮肤细胞中不转录出胰岛素mRNA

（2）逆转录酶 解旋酶  DNA连接酶 

（3）目的基因   标记基因  启动子  终止子

（4）CaCl2

解：（1）“织女”牛⑦进入泌乳期后，可通过分泌乳汁来生产人类所需的赖氨酸，因而称为动物细胞培养乳腺（房）生物反应器．

（2）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是纤维注射法．

（3）检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是采用分子杂交技术检测目的基因是否转录出了mRNA．

（4）由于卵细胞体积大、易操作，且含有促进细胞核全能性表达的物质和营养条件，因此获得重组细胞④时，需以去核卵细胞为受体细胞．

故答案为：

（1）动物细胞培养乳腺（房）生物反应器

（2）基因表达载体的构建显微注射技术

（3）检测目的基因是否转录出了mRNA

（4）卵细胞体积大、易操作，含有促进细胞核全能性表达的物质和营养条件

解：（1）获得safp基因后，为了保障实验需求，通常利用PCR技术获得大量safp基因的拷贝．PCR技术的原理是DNA复制，需要的材料与条件有：模板DNA、热稳定DNA聚合酶、引物、原料等．

（2）构建重组质粒后，要先将其导入农杆菌，需要用钙离子处理农杆菌，使之成为感受态．完成转化后再通过农杆菌转化法导入棉花细胞．

（3）将重组质粒导入棉花细胞时，需要将转化后的农杆菌与棉花愈伤组织混合培养，再通过DNA分子杂交技术检测、筛选导入safp基因的棉花细胞；并进一步用抗原-抗体杂交技术检测、筛选safp基因表达成功的棉花细胞；最后还要通过个体水平鉴定，才能确认改造成功．

（4）如果safp基因成功整合到棉花细胞中的某个染色体上，得到的抗寒棉花植株相当于杂合体，则其自交后代中抗寒：非抗寒=3：1．

（5）从获得afp基因到得到抗寒棉花植株，该过程应用的工程技术有基因工程、植物组织培养等．

故答案为：

（1）PCR（DNA扩增）

（2）钙离子    农杆菌转化

（3）DNA分子杂交技术   抗原-抗体杂交技术

（4）3：1

（5）基因工程、植物组织培养

解：（l）质粒是小型环状DNA分子．

（2）根据图示限制酶M和N的识别序列可知，它们切割产生的黏性末端是GATC（CTAG）．DNA连接酶能将具有相同黏性末端的DNA片段连接形成重组DNA分子．

（3）将目的基因导入受体细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态．

（4）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花．

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，假设目的基因扩增了n次，则需要引物的对数为2n-1，已知其中一种引物共用了31个，则2n-1=31，n=5．

（6）①实验设计要遵循对照原则和单一变量原则，本实验的目的是探究转基因菊花对菊天牛2龄幼虫的作用，可见自变量为是否加入转基因菊花嫩茎及叶片，因此对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物．

②据表分析，实验组与对照组死亡率差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．

故答案为：

（1）小型环状DNA

（2）GATC （CTAG）    DNA连接酶    

（3）Ca2+（或CaCl2）

（4）卡那霉素    

（5）5

（6）①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物    ②实验组与对照组死亡率

解：（1）人的基因与大肠杆菌的DNA分子都具有双螺旋结构，都是由四种脱氧核苷酸组成，用相同的限制酶切割形成的黏性末端也相同，所以人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组．

（2）目的基因的获取途径有：从基因文库中获取；利用PCR技术扩增；人工合成（反转录法和化学合成法）．从图中可以明显地看出，过程①是通过反转录法获取目的基因的．

（3）过程③表示借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径将目的基因导入受体细胞．受体细胞是微生物时，一般用Cacl2（Ca2+）处理，以增大细胞壁的通透性，使细胞成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，易于含有目的基因的重组质粒进入受体细胞．

（4）由图可知，质粒上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素的抗性基因．构建基因表达载体时，破环了质粒上的四环素抗性基因，但没有破环氨苄青霉素的抗性基因，所以导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，都能在含有氨苄青霉素的培养基上生长．

（5）由第四小题分析可知，把已经导入了普通质粒或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，导入普通质粒的大肠杆菌能生长，导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能．

故答案为：

（1）人的基因与大肠杆菌DNA的组成成分相同，结构相同，并且具有相同的黏性末端

（2）逆转录

（3）侵染  Cacl2（Ca2+）     细胞壁

（4）普通质粒A和重组质粒

（5）普通质粒A   重组质粒    目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能

解：（1）限制性内切酶（或限制酶）是“分子手术刀”．

（2）DNA连接酶是“分子缝合针”．

（3）基因进入受体细胞的载体是“分子运输车”．

（4）操作步骤：从人的基因组文库获取目的基因；目的基因与载体结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入启动子和终止子．然后把基因表达载体导入牛的受精卵，通过发育形成的牛体细胞含人的血清蛋白基因，成熟的牛产的奶中含有人的血清蛋白，证明基因操作成功．

（5）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛共用一套密码子．把重组质粒导入植物细胞主要方法农杆菌转化，导入动物细胞方法显微注射技术，导入微生物方法Ca2+处理法．

故答案为：

（1）限制性内切酶（或限制酶） 

（2）DNA连接酶

（3）基因进入受体细胞的载体 

（4）基因组文库          载体          启动子       受精卵      血清蛋白基因      人的血清蛋白

（5）共用一套密码子        农杆菌转化法          显微注射技术        Ca2+处理法

解：（1）由以上分可知①是逆转录．

（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，即首先需用限制性核酸内切酶切割含有A基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶连接A基因和运载体形成A基因重组载体．

（3）动物细胞培养时，必须满足无菌无毒、营养、温度和pH、气体环境等条件，才能使细胞大量增殖；若受体细胞是受精卵，则需将其在体外培养到桑椹胚或囊胚时期，将其移入到母体子宫，培育成转基因动物．转基因动物可以作为生物反应器，生产A蛋白．

（4）③是动物细胞融合过程，需采用细胞融合技术；诱导动物细胞融合的方法有物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇）和生物法（灭活的病毒）；小鼠骨髓瘤细胞和效应B细胞融合形成的X是杂交瘤细胞．

故答案为：

（1）逆转录     

（2）基因表达载体的构建     限制性核酸内切酶      DNA 连接酶

（3）温度和pH      桑椹胚或囊胚     生物反应器     

（4）细胞融合技术  灭活的病毒      杂交瘤细胞