热门试卷

解：（1）动物细胞核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组形成一个重组细胞，因此图中①为细胞核．核移植时，选择减数第二次分裂中期的卵母细胞去核后作为受体细胞构违重组细胞A．②表示囊胚中的内细胞团细胞．

（2）基因工程中，将目的基因（健康胰岛B细胞基因）导入②受体细胞之前，先构建基因表达载体，这是基因工程的核心；基因治疗包括体外基因治疗和体内基因治疗，体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内；体内基因治疗：用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因的方法．由此可见，图中基因治疗所属类型为体外基因治疗．

（3）重组细胞B在一定的分化诱导因子作用下，定向分化形成具有正常胰岛B细胞功能的胰岛样细胞．细胞分化的根本原因是基因的选择性表达．

故答案为：

（1）细胞核Ⅱ期（或减数第二次分裂中期）  内细胞团细胞（或胚胎干细胞）

（2）基因表达载体   体外基因治疗

（3）分化诱导因子    基因的选择性表达

解：（1）分析图解可以看出，图一中的供体细胞是人的某种体细胞．

（2）图一中第②步表示逆转录过程，该过程需要逆转录酶，基因表达载体的构建过程中需要限制酶和DNA连接酶，第④步常用钙离子处理大肠杆菌细胞，使其处于容易吸收周围DNA的感受态．

（3）只有存在基因C的表达产物时Tetr基因才能表达，因此若图一所示过程中以Tetr为标记基因，则第③步中应选用SmaⅠ和PstⅠ对供体DNA和质粒进行切割，这样可以保证C基因的正常表达；标记基因是四环素抗性基因，所以在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌．

（4）检验目的基因在烟草细胞中是否成功表达的方法是抗原-抗体杂交．

故答案为：

（1）人的某种体细胞       

（2）反转录酶（逆转录酶）  限制酶和DNA连接酶   感受

（3）SmaⅠ和PstⅠ四环素     

（4）抗原-抗体杂交法

解：（1）DNA一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间是通过磷酸二酯键连接的，它是DNA复制时由DNA聚合酶催化形成的．

（2）图1中至少含有2个限制酶MboⅠ的识别序列（↓GATC），因此用限制酶MboⅠ完全切割图1中DNA片段，产物中至少有3种不同的DNA片段；若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，基因D就突变为基因d，那么基因d上只有一个限制酶SmaⅠ切割位点，被限制酶SmaⅠ切割的产物长度为534+796-3=1327kb、658+3=661bp．

（3）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，所以为了提髙实验成功率，需要获取大量目的基因D，可通过PCR技术对图1中的DNA分子进行扩增．

（4）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割．若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，先用钙离子处理大肠杆菌，使之转变成感受态细胞．用限制酶BamHⅠ切割质粒后，破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因．因此，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般先用添加含有抗生素B的培养基进行培养．

故答案为：

（1）磷酸二酯键     DNA聚合酶

（2）3    1327bp、661bp

（3）PCR （多聚酶链式反应）

（4）BamHⅠ钙离子（Ca2+）   B

解：（1）在基因工程技术中，S基因属于目的基因．

（2）在基因表达载体构建的过程中，要用同一种限制酶处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合．由于目的基因和运载体均具有相同黏性末端，因此这里的DNA片段两两结合的产物有目的基因自身连接、运载体自身连接和重组质粒3种．除了S基因，构建好的表达载体还应具有启动子、终止子、标记基因等结构．

（3）在对工程细胞进行动物细胞过程中，培养基中通常需要加入动物血清等天然成分．细胞在生长过程中有贴壁生长和接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．

故答案为：

（1）目的基因

（2）同一种限制酶 DNA连接酶 3   启动子、终止子、标记基因

（3）动物血清 贴壁生长和接触抑制 胰蛋白酶或胶原蛋白酶

解：（1）htPA基因与载体需要用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力．

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，以选择母羊的胚胎进行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性．胚胎分割选用的胚胎最好处于桑椹胚或者囊胚时期，因为全能性较高．

（4）胚胎分割是无性生殖，这种技术的优势是能短时间内获得相同优良性状的个体．

故答案为：

（1）同种限制性核酸内切酶     DNA分子杂交

（2）超数排卵  获能处理

（3）显微注射法   性别鉴定    全能性    桑椹胚或者囊

（4）无性   能短时间内获得相同优良性状的个体

解：（1）农杆菌的Ti质粒是拟核外环状DNA分子，分布在细菌细胞的细胞质，图中A表示Ti质粒的T-DNA；切割A需要使用限制性内切酶．

（2）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即常用Ca2+处理微生物细胞，使其成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．

（3）培养E需要添加营养物质和植物激素，其目的是诱导细胞通过脱分化和再分化过程发育为完整植株；培养要求无菌操作的原因是杂菌的生长一方面会与目标培养物竞争营养，从而使其失去营养；另一方面会产生大量对目标培养物有害的物质，导致其不能正常生长甚至死亡．

（4）判断愈伤组织是否产生，依据是：看是否产生了排列疏松而无规则、高度液泡化的呈无定形状态的细胞．由愈伤组织再分化过程中需要光照，原因是叶肉细胞中的叶绿素的合成需要光照．

故答案为：

（1）T-DNA   限制酶

（2）Ca2+   能吸收周围环境中DNA分子的

（3）脱分化和再分化   杂菌的生长一方面会与目标培养物竞争营养，从而使其失去营养；另一方面会产生大量对目标培养物有害的物质，导致其不能正常生长甚至死亡

（4）排列疏松，呈不定形状态、高度液泡化的薄壁    叶肉细胞中的叶绿素的合成需要光照