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目前，精子载体法逐渐成为最具有活力的制备转基因动物的方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体使精子携带外源基因进入卵细胞受精．如图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程．请据图回答：

（1）获取外源基因用到的工具酶是______，为了提高实验成功率，通常利用______技术获得大量标记的外源基因．

（2）外源基因能够整合到精子的______上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的______才能进入卵细胞中．

（3）过程②采用的是______技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行______处理．自然受精中防止多精入卵的两道屏障依次是______反应和______反应．

（4）由于目前人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养液中加入______．

（5）一般来说，胚胎发育到______阶段或______阶段时适宜用作胚胎移植．

番茄果实成熟过程中，某种酶（PG）开始合成并显著增加，促使果实变红变软，但不利于长途运输和长期保鲜．科学家利用反义RNA技术（见图解），可有效解决此问题．该技术的核心是：从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板，人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株；新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA（靶mRNA）互补形成双链RNA，阻止靶mRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的．请结合图解回答：

（1）反义基因像一般基因一样是一段双链的DNA分子，合成该分子的第一条链时，使用的模板是细胞质中的信使RNA，原料是四种______，所用的酶是______．

（2）开始合成的反义基因第一条链是与模板RNA连在一起的杂交双链，通过加热去除RNA，然后再以反义基因第一条链为模板合成第二条链，这样一个完整的反义基因被合成．若要以完整双链反义基因苋隆成百上千的反义基因，所用复制方式为______．

（3）如果指导番茄合成PG的信使RNA的减基序列是一A-U-C-C-A-G-G-U-C-，那么，PG反义基因的这段碱基对序列是______

（4）将人工合成的反义基因导入番茄叶肉细胞原生质体的运输工具是______；该目的基因与运输工具相结合需要使用的酶有______；在受体细胞中该基因指导合成的最终产物是______．

应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品．请据图回答下列问题：

（1）①过程是指______，被称为基因工程的核心步骤．

（2）在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是______．③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用______技术，培育出多头相同的转基因牛．

（3）转生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在重组质粒中，人生长激素基因的首端必须含有______，它是识别并结合______的部位．

（4）PCR能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞所分泌的物质具有______的特点．

（5）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞通常采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是______，⑤过程采用的技术是______．

水稻种子中70%的磷以植酸形式存在．植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白质结合排出体外，是多种动物的抗营养因子；同时，排出的大量磷进入水体易引起水华．为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种，如图是获取植酸酶基因的流程．

据图回答：

（1）图中基因组文库______（小于/等于/大于）cDNA文库．

（2）A、C过程中______（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株．

（3）目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中______和______为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是______．

[生物──选修3现代生物科技专题]

人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）．

（1）体外受精时，人工采集的动物精子必须经过______处理才能完成图示中的①过程；图中的高血压相关基因作为______，完成②过程常采用的方法是______．

（2）④过程中，为维持培养液pH的相对稳定，必须将培养瓶放置在______中进行培养，培养过程用______（酶）处理才能获得单个细胞．

（3）图示中甲为______（时期）的去核卵母细胞，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和______．⑤过程操作技术叫做______．

（4）在上述转基因鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术有______、早期胚胎的培养和______．

（5）子代大鼠如果检测到______和______出现，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型．转基因鼠只携带一个B基因，常采用的方法来培育基因型为BB的个体．

慢性病人常出现白蛋白值偏低的状况（比如慢性肝病、慢性肾病、肿瘤等）．缺乏白蛋白，人就容易出现浮肿．人体的白蛋白正常值在每100mL血液中含有3.8～4.8克，如果比正常值低很多时就需要注射入血白蛋白，所以临床上对白蛋白需求量很大．如图是利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图：

（1）通过①采集的卵子，都需要进行体外培养，其目的是______：通过②采集的精子需______后才能进行受精作用．

（2）要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、乳腺蛋白基因的启动子和终止子、______等部分．

（3）过程④需将重组质粒用______方法注入受精卵的雄原核内，在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是______．正常生理状况下防止多精入卵的两道屏障分别是______、______．

（4）对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的______细胞进行鉴定，一般采用SRY-PCR方法，选择出现阴性反应的______（雌性/雄性）胚胎进行移植．

（5）为了使胚胎移植能成功，需要对代孕奶山羊C进行______处理，使之与供体的生理状况保持相同．

目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示．

（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于______．

（2）pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割．若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端．

（3）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复______ 键，成功的获得了重组质粒．

（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）．与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是______，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是______．

如图为培育转基因小鼠基本过程的示意图．请回答下列问题：

（1）如A为重组质粒溶液，将其导入原核期受精卵的方法是______；如A为重组反转录病毒，还可采取______方法．

（2）小鼠出生后从其尾巴中提取______分子，通过______的方法，可检测出携带目的基因的小鼠．

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

（1）htPA基因与载体用______切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用______技术．

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其______．采集的精子需要经过______才具备受精能力．

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是______．为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行______．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，该过程的生殖方式是______．

（4）若检测到转ht-PA基因母羊______，说明目的基因成功表达．