- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
2009年10月,我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书.如图表示该抗虫水稻主要培育流程,据图回答:
(1)杀虫基因(crylA)是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构,设计并人工合成的,这属于______工程技术范畴.除了上述方法,有些目的基因可以从基因文库中获取.基因文库包含______和______等类型,其中前者的基因中含有启动子.
(2)图中③过程中,能促进农杆菌移向植物细胞的物质是______类化合物.Ti质粒是农杆菌中的一种质粒,其上有T-DNA,把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA______的特点.
(3)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外,还可采取的方法是______(任举一例).
(4)对目的基因转录和翻译产物的检测分别采用______、______技术.
(5)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造.如图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(示部分基因及部分限制酶作用位点),据图分析:
①人工改造时,要使抗虫基因表达,在上图所示基因表达载体中还应添加______.
②人工改造时用限制酶Ⅱ处理,其目的之一是除去或破坏质粒上的______(填相应基因的简写字母),保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长.若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端为,则该酶识别的核苷酸序列是______.
正确答案
解:(1)生产出自然界没有的蛋白质属于蛋白质工程.基因文库包含基因组文库和部分基因文库(或cDNA文库)
等类型,其中基因组文库中基因含有启动子.
(2)图中③过程中,酚类化合物能促进农杆菌移向植物细胞.Ti质粒上含有T-DNA,把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA可转移至受体细胞 (并且整合到受体细胞染色体的DNA上)的特点.
(3)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法:农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法.
(4)目的基因是否转录形成信使RNA,一般采用分子杂交法;目的基因是否翻译形成蛋白质,采用抗原-抗体杂交技术检测.
(5)①作为基因工程载体的质粒应该包含:复制原点、限制酶的切割位点、标记基因、启动子和终止子.图中的Ti质粒缺少启动子,所以要使抗虫基因表达,还应插入启动子.
②图中看出,tms基因能够编码生长素,tmr基因能够编码细胞分裂素,这两种激素能够促进植物的生长.因此人工改造时用限制酶Ⅰ处理,其目的之一是除去或破坏质粒上的tmr、tms,保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;另外只有一个插入位点,也有利于目的基因(或外源DNA)准确插入.若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端为,则该酶识别的核苷酸序列是GACGTC.
故答案为:
(1)蛋白质 基因组文库 部分基因文库(或cDNA文库)
(2)酚 可转移至受体细胞 (并且整合到受体细胞染色体的DNA上)
(3)基因枪法、花粉管通道法(答任一种给分)
(4)分子杂交 抗原-抗体杂交
(5)①启动子 ②tmr、tms CTGCAG(或GACGTC)
解析
解:(1)生产出自然界没有的蛋白质属于蛋白质工程.基因文库包含基因组文库和部分基因文库(或cDNA文库)
等类型,其中基因组文库中基因含有启动子.
(2)图中③过程中,酚类化合物能促进农杆菌移向植物细胞.Ti质粒上含有T-DNA,把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA可转移至受体细胞 (并且整合到受体细胞染色体的DNA上)的特点.
(3)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法:农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法.
(4)目的基因是否转录形成信使RNA,一般采用分子杂交法;目的基因是否翻译形成蛋白质,采用抗原-抗体杂交技术检测.
(5)①作为基因工程载体的质粒应该包含:复制原点、限制酶的切割位点、标记基因、启动子和终止子.图中的Ti质粒缺少启动子,所以要使抗虫基因表达,还应插入启动子.
②图中看出,tms基因能够编码生长素,tmr基因能够编码细胞分裂素,这两种激素能够促进植物的生长.因此人工改造时用限制酶Ⅰ处理,其目的之一是除去或破坏质粒上的tmr、tms,保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;另外只有一个插入位点,也有利于目的基因(或外源DNA)准确插入.若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端为,则该酶识别的核苷酸序列是GACGTC.
故答案为:
(1)蛋白质 基因组文库 部分基因文库(或cDNA文库)
(2)酚 可转移至受体细胞 (并且整合到受体细胞染色体的DNA上)
(3)基因枪法、花粉管通道法(答任一种给分)
(4)分子杂交 抗原-抗体杂交
(5)①启动子 ②tmr、tms CTGCAG(或GACGTC)
玉米的光合效率较水稻的高,这与玉米中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)有很大的关系.如何将玉米的这一种酶转移到水稻等植物上一直是植物生物学家的研究课题之一.但实践证明,常规杂交育种手段很难如愿以偿.最近,有人利用土壤农杆菌介导法,将完整的玉米PEPC基因导入到了水稻的基因组中,为快速改良水稻的光合作用效率,提高粮食作物产量开辟了新途径.
(1)玉米和水稻很难利用常规杂交手段杂交是因为______.
(2)获得PEPC基因后,将其导入土壤农杆菌的质粒中,获得重组质粒需要的工具是______,请在框中补充某DNA片段并画出切割形成黏性末端的过程示意图.
(3)导入完成后得到的土壤农杆菌,实际上只有少数导入了重组质粒,可根据质粒中含有的______筛选出成功导入了重组质粒的土壤农杆菌.
(4)用含有重组质粒的土壤农杆菌感染水稻细胞,即使感染成功,PEPC基因通过一定途径整合到水稻的基因组中,但不一定会表达,原因最可能是______.
A.玉米和水稻不共用一套密码子
B.水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸
C.PEPC基因受到水稻基因组中相邻基因的影响
D.整合到水稻基因组中的PEPC基因被水稻的某种酶破坏了
(5)PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是______.如目的基因完成了表达,则其表达过程可表示为______.
(6)得到PEPC基因成功表达的水稻细胞后,科研人员常采用______方法获得转基因水稻植株.
正确答案
解:(1)玉米和水稻是不同的物种,存在生殖隔离,随意不能杂交.
(2)基因工程中使用到的酶为限制性核酸内切酶、DNA连接酶,根据碱基互补配对原则补充DNA片段,再根据限制酶的特点画出粘性末端.(具体见答案)
(3)标记基因存在的作用便于筛选含目的基因的受体细胞.
(4)凡是影响转录或翻译的因素都可能会影响PEPC基因的表达.影响其表达的原因有:水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸、PEPC基因受到水稻基因组中相邻基因的影响、整合到水稻基因组中的PEPC基因被水稻的某种酶破坏了.所有生物都共用一套密码子,排除A;参与蛋白质合成的氨基酸大约有20种,缺乏合成PEPC的氨基酸可能性有但比较小,排除B;PEPC基因在水稻细胞中以前没有,所以水稻细胞中存在破坏它的酶可能有,但可能性也不大,排除D;可能性最大的就是受到水稻基因组中相邻基因的影响,故选C.
(5)PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是在水稻细胞中合成PEPC(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶).如目的基因完成了表达,则其表达过程可表示为PEPC基因mRNA
PEPC.
(6)由细胞得到完整植株,要利用植物细胞的全能性,所以应该用组织培养的方法.
故答案为:
(1)玉米和水稻存在生殖隔离
(2)限制性核酸内切酶、DNA连接酶
(3)标记基因
(4)C
(5)在水稻细胞中合成PEPC PEPC基因mRNA
PEPC
(6)组织培养
解析
解:(1)玉米和水稻是不同的物种,存在生殖隔离,随意不能杂交.
(2)基因工程中使用到的酶为限制性核酸内切酶、DNA连接酶,根据碱基互补配对原则补充DNA片段,再根据限制酶的特点画出粘性末端.(具体见答案)
(3)标记基因存在的作用便于筛选含目的基因的受体细胞.
(4)凡是影响转录或翻译的因素都可能会影响PEPC基因的表达.影响其表达的原因有:水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸、PEPC基因受到水稻基因组中相邻基因的影响、整合到水稻基因组中的PEPC基因被水稻的某种酶破坏了.所有生物都共用一套密码子,排除A;参与蛋白质合成的氨基酸大约有20种,缺乏合成PEPC的氨基酸可能性有但比较小,排除B;PEPC基因在水稻细胞中以前没有,所以水稻细胞中存在破坏它的酶可能有,但可能性也不大,排除D;可能性最大的就是受到水稻基因组中相邻基因的影响,故选C.
(5)PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是在水稻细胞中合成PEPC(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶).如目的基因完成了表达,则其表达过程可表示为PEPC基因mRNA
PEPC.
(6)由细胞得到完整植株,要利用植物细胞的全能性,所以应该用组织培养的方法.
故答案为:
(1)玉米和水稻存在生殖隔离
(2)限制性核酸内切酶、DNA连接酶
(3)标记基因
(4)C
(5)在水稻细胞中合成PEPC PEPC基因mRNA
PEPC
(6)组织培养
生物学家通过转基因体细胞克隆技术获得转基因牛,以便通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白.请回答下列问题:
(1)请完善主要步骤:从人的______获得目的基因;构建含目的基因的表达载体;然后把基因表达载体导入牛的受精卵,目前最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是______.
(2)目的基因的检测与鉴定分三个层次.若要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因及目的基因是否转录出了mRNA,检测方法是______,若要检测目的基因是否翻译成蛋白质,检测方法是______.
正确答案
解:(1)基因工程的操作步骤:从人的基因组文库中获取目的基因;目的基因与载体结合构建基因表达载体,基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子、终止子;然后通过显微注射技术,把基因表达载体导入牛的受精卵.
(2)目的基因的检测与鉴定分三个层次.若要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因及目的基因是否转录出了mRNA,检测方法是DNA分子杂交,若要检测目的基因是否翻译成蛋白质,检测方法是抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)基因组文库 显微注射技术
(2)DNA分子杂交 抗原-抗体杂交
解析
解:(1)基因工程的操作步骤:从人的基因组文库中获取目的基因;目的基因与载体结合构建基因表达载体,基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子、终止子;然后通过显微注射技术,把基因表达载体导入牛的受精卵.
(2)目的基因的检测与鉴定分三个层次.若要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因及目的基因是否转录出了mRNA,检测方法是DNA分子杂交,若要检测目的基因是否翻译成蛋白质,检测方法是抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)基因组文库 显微注射技术
(2)DNA分子杂交 抗原-抗体杂交
回答下列问题:
(1)牛乳腺生物反应器生产过程中的核心操作是______.科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草时,常用的运载体是______.
(2)从某海洋动物中获得一基因,其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1.目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肤药物的过程属于______工程范畴.首先依据P1的氨基酸序列设计多条模拟肽,然后通过直接改造______,来生产该药物.
(3)为培养某种新型药用植物,可取甲乙两植株的叶片,先用______去除细胞壁,获得具有活力的原生质体,诱导融合后形成杂种细胞再进行培养,经过______形成完整的杂种植株.
(4)软骨发育不全为常染色体显性遗传病,基因型为HH的个体早期死亡.一对夫妻均为该病患者,希望通过胚胎工程技术辅助生育一个健康的孩子.首先要对妻子进行______处理后进行体外受精,然后将胚胎培养至囊胚期时分离______细胞来基因检测,筛选出基因型为hh的胚胎再移植到子宫.这属于______技术.
正确答案
解:(1)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体.科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草时,常用的运载体是Ti质粒.
(2)根据题意可知,研发的新的多肽P1抗菌性增强,同时溶血性弱的多肤药物,该过程属于蛋白质工程范畴.首先依据P1的氨基酸序列设计多条模拟肽,然后通过直接改造基因,来生产该药物.
(3)植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶,因此在植物体细胞杂交过程中,首先利纤维素酶和果胶酶去除细胞壁,获得具有活力的原生质体,诱导融合后形成杂种细胞再进行培养,经过脱分化和再分化形成完整的杂种植株.
(4)首先要对妻子进行超数排卵处理后进行体外受精,然后将胚胎培养至囊胚期时分离滋养层细胞来基因检测,筛选出基因型为hh的胚胎再移植到子宫.这属于设计试管婴儿技术.
故答案为:
(1)构建基因表达载体 Ti质粒
(2)蛋白质 基因
(3)纤维素酶和果胶酶 脱分化和再分化
(4)超数排卵 滋养层 设计试管婴儿
解析
解:(1)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体.科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草时,常用的运载体是Ti质粒.
(2)根据题意可知,研发的新的多肽P1抗菌性增强,同时溶血性弱的多肤药物,该过程属于蛋白质工程范畴.首先依据P1的氨基酸序列设计多条模拟肽,然后通过直接改造基因,来生产该药物.
(3)植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶,因此在植物体细胞杂交过程中,首先利纤维素酶和果胶酶去除细胞壁,获得具有活力的原生质体,诱导融合后形成杂种细胞再进行培养,经过脱分化和再分化形成完整的杂种植株.
(4)首先要对妻子进行超数排卵处理后进行体外受精,然后将胚胎培养至囊胚期时分离滋养层细胞来基因检测,筛选出基因型为hh的胚胎再移植到子宫.这属于设计试管婴儿技术.
故答案为:
(1)构建基因表达载体 Ti质粒
(2)蛋白质 基因
(3)纤维素酶和果胶酶 脱分化和再分化
(4)超数排卵 滋养层 设计试管婴儿
农业科技工作者在烟草中找到一种抗病基因,现拟采用基因工程技术将该基因转入棉细胞中,培育抗病棉品系.请回答下列问题.
(1)要获得该抗病基因,可采用从基因文库中获取、______等方法.将抗病基因转入棉细胞时,最常用的运载体是______.
(2)若运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示,则能与该运载体连接的抗病基因分子末端是______
A. B.
C.
D.
(3)切割完成后,需用______酶将运载体与该抗病基因连接,得到______分子.
(4)将抗病基因转入棉细胞时,可先将重组DNA分子导入农杆菌______的T-DNA上,再用该农杆菌去侵染棉细胞,从组织培养得到的植株中筛选获得抗病棉.
正确答案
解:(1)抗病基因属于目的基因,获取目的基因的方法:从细胞中直接分离获得、化学方法人工合成等.将目的基因导入植物细胞常采用农杆菌转化法,即借助农杆菌中的Ti质粒作为运载体.
(2)含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA连接酶的作用下连接起来,若载体被切割后,得到的分子末端序列为,则能与该载体连接的抗病基因分子末端是
.
(3)切割完成后,需采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接形成重组DNA分子.
(4)再采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞,即将连接得到的DNA分子导入农杆菌 Ti质粒的T-DNA上,然后用该农杆菌去感染棉花细胞,进而将目的基因导入受体细胞;根据植物细胞全能性原理,采用植物组织培养技术将受体细胞培养成转基因植株,最后筛选出抗病的棉花.
故答案为:
(1)化学方法人工合成(或PCR扩增) 质粒
(2)A
(3)DNA连接 重组DNA
(4)Ti质粒
解析
解:(1)抗病基因属于目的基因,获取目的基因的方法:从细胞中直接分离获得、化学方法人工合成等.将目的基因导入植物细胞常采用农杆菌转化法,即借助农杆菌中的Ti质粒作为运载体.
(2)含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA连接酶的作用下连接起来,若载体被切割后,得到的分子末端序列为,则能与该载体连接的抗病基因分子末端是
.
(3)切割完成后,需采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接形成重组DNA分子.
(4)再采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞,即将连接得到的DNA分子导入农杆菌 Ti质粒的T-DNA上,然后用该农杆菌去感染棉花细胞,进而将目的基因导入受体细胞;根据植物细胞全能性原理,采用植物组织培养技术将受体细胞培养成转基因植株,最后筛选出抗病的棉花.
故答案为:
(1)化学方法人工合成(或PCR扩增) 质粒
(2)A
(3)DNA连接 重组DNA
(4)Ti质粒
加拿大科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶,该酶可用于对抗生化武器.如图是转基因山羊的培育过程示意图,请据图回答问题(山羊为二倍体):
(1)在上述操作中,目的基因是______基因,将该基因导入受体细胞常用的方法是______法.
(2)胚胎工程是指对动物的早期胚胎或______所进行的多种显微操作和处理技术.图中过程⑦所涉及的胚胎工程技术是______.
(3)从雌性山羊卵巢内获取的卵母细胞需要培养到______期才能完成受精作用,此时细胞中的染色体组数是______.为了获得更多的卵母细胞,往往需要向雌性山羊体内注入______激素.受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和______.
(4)要同时获得多只与此转基因山羊遗传物质相同的小羊,可对囊胚进行______.
(5)下列不属于生物武器特点的是______(单选).
A.致病力强,传染性大 B.污染面积大,危害时间长 C.有潜伏期,传染途径多 D.造价高,技术难度大.
正确答案
解:(1)由于加拿大科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶,该酶可用于对抗生化武器,所以目的基因是丁酰胆碱酯酶基因,将该基因导入受体细胞常用的方法是显微注射法.
(2)胚胎工程是指对动物的早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术.图中过程⑦所涉及的胚胎工程技术是胚胎移植.
(3)从雌性山羊卵巢内获取的卵母细胞需要培养到减数第二次分裂中期才能完成受精作用,此时细胞中不含同源染色体,着丝点没有分裂,所以只含1个染色体组数.为了获得更多的卵母细胞,往往需要向雌性山羊体内注入促性腺激素.受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应.
(4)要同时获得多只与此转基因山羊遗传物质相同的小羊,可对囊胚进行胚胎分割.
(5)生物武器种类:包括致病菌、病毒、生化毒剂,以及经过基因重组的致病菌等.把这些病原体直接或者通过食物、生活必需品等散布到敌方,可以对军队和平民造成大规模杀伤后果.生物武器的特点:①单位面积效应大;②有特定的伤害对象;③致病力强,具有传染性;④危害时间久;⑤不易被发现和鉴定;⑥使用者本身易受伤害;⑦生物武器造价低,技术难度不大,隐秘性强,可以在任何地方研制和生产.故选:D.
故答案为:
(1)丁酰胆碱酯酶 显微注射
(2)配子 胚胎移植
(3)减数第二次分裂中 1 促性腺 卵细胞膜反应
(4)胚胎分割
(5)D
解析
解:(1)由于加拿大科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶,该酶可用于对抗生化武器,所以目的基因是丁酰胆碱酯酶基因,将该基因导入受体细胞常用的方法是显微注射法.
(2)胚胎工程是指对动物的早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术.图中过程⑦所涉及的胚胎工程技术是胚胎移植.
(3)从雌性山羊卵巢内获取的卵母细胞需要培养到减数第二次分裂中期才能完成受精作用,此时细胞中不含同源染色体,着丝点没有分裂,所以只含1个染色体组数.为了获得更多的卵母细胞,往往需要向雌性山羊体内注入促性腺激素.受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应.
(4)要同时获得多只与此转基因山羊遗传物质相同的小羊,可对囊胚进行胚胎分割.
(5)生物武器种类:包括致病菌、病毒、生化毒剂,以及经过基因重组的致病菌等.把这些病原体直接或者通过食物、生活必需品等散布到敌方,可以对军队和平民造成大规模杀伤后果.生物武器的特点:①单位面积效应大;②有特定的伤害对象;③致病力强,具有传染性;④危害时间久;⑤不易被发现和鉴定;⑥使用者本身易受伤害;⑦生物武器造价低,技术难度不大,隐秘性强,可以在任何地方研制和生产.故选:D.
故答案为:
(1)丁酰胆碱酯酶 显微注射
(2)配子 胚胎移植
(3)减数第二次分裂中 1 促性腺 卵细胞膜反应
(4)胚胎分割
(5)D
回答下列有关基因表达和基因工程问题
人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因奶牛的乳汁中获得.图1表示利用奶牛乳汁生产人组织纤溶酶原激活物的培育过程:
(1)在形成图中③的过程中,获取②的途径主要有______,②进入③需要______的协助.
(2)为了在该奶牛乳汁中获得htPA必须将htPA基因连接在______
A.乳腺蛋白基因的转录起始位点之后 B.乳腺蛋白基因的转录起始位点之前
C.起始密码子编码序列之后 D.乳腺蛋白基因的转录终止位点之后
(3)培养从③到④的过程中一般用未受精的去核卵细胞为受体,不用普通的体细胞的原因是______.
(4)⑦与⑥的遗传性状不一样的理由是______.
(5)图2为质粒限制酶酶切图谱.htPA基因不含图中限制酶识别序列.为使PCR扩增的htPA基因重组进该质粒,扩增的htPA基因两端可分别引入______和不同限制酶的识别序列.
正确答案
解:(1)在形成图中③的过程中,获取②的途径主要有从体细胞中分离和化学方法人工合成,②进入③需要运载体的协助.
(2)为了在该奶牛乳汁中获得htPA必须将htPA基因连接在A乳腺蛋白基因的转录起始位点之后.
(3)培养从③到④的过程中一般用未受精的去核卵细胞为受体,不用普通的体细胞的原因是卵细胞大容易操作,表达全能性高.
(4))⑦与⑥的遗传性状不一样的理由是因为个体⑦的遗传信息几乎全部来自供体的细胞核.
(5)根据启动子和终止子的生理作用可知,目的基因应导入启动子和终止子之间.图中看出,两者之间存在于三种限制酶切点,但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点,因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒,扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列.
故答案为:
(1)从体细胞中分离和化学方法人工合成运载体
(2)A
(3)卵细胞大容易操作,表达全能性高
(4)因为个体⑦的遗传信息几乎全部来自供体的细胞核
(5)NdeⅠBamHⅠ
解析
解:(1)在形成图中③的过程中,获取②的途径主要有从体细胞中分离和化学方法人工合成,②进入③需要运载体的协助.
(2)为了在该奶牛乳汁中获得htPA必须将htPA基因连接在A乳腺蛋白基因的转录起始位点之后.
(3)培养从③到④的过程中一般用未受精的去核卵细胞为受体,不用普通的体细胞的原因是卵细胞大容易操作,表达全能性高.
(4))⑦与⑥的遗传性状不一样的理由是因为个体⑦的遗传信息几乎全部来自供体的细胞核.
(5)根据启动子和终止子的生理作用可知,目的基因应导入启动子和终止子之间.图中看出,两者之间存在于三种限制酶切点,但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点,因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒,扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列.
故答案为:
(1)从体细胞中分离和化学方法人工合成运载体
(2)A
(3)卵细胞大容易操作,表达全能性高
(4)因为个体⑦的遗传信息几乎全部来自供体的细胞核
(5)NdeⅠBamHⅠ
干扰素α-1b是我国第一个批准生产的基因工程药物,该药物利用大肠杆菌作为受体获得,具有抗病毒、抑制肿瘤细胞增生、调节人体免疫功能的作用,广泛用于病毒性疾病和多种肿瘤的治疗,是当前国际公认的病毒性疾病治疗的首选药物和肿瘤生物治疗的主要药物.
(1)原核生物经常作为受体细胞是由于其具有其他生物没有的特点:______、______、______等.
(2)______是基因工程的核心,其目的是使目的基因在______中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够______和发挥作用.
(3)为使干扰素基因在大肠杆菌细胞内表达,需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的______和______之间.
(4)采用______技术可检测干扰素基因是否成功导入大肠杆菌的DNA上.
正确答案
解:(1)原核生物具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点,因此常作为基因工程中的受体细胞.
(2)成功构建基因表达载体,才能使目的基因在受体细胞内存在和表达.
(3)基因表达载体的组成包括:目的基因、标记基因、启动子、终止子.来自cDNA文库的基因是通过逆转录得到的,无启动子和终止子等,将其插入在表达载体的启动子和终止子之间才能构成完整的基因并在受体细胞内表达.
(4)采用DNA分子杂交技术可检测干扰素基因是否成功导入大肠杆菌的DNA上.
故答案为:
(1)繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少
(2)基因表达载体的构建 受体细胞 表达
(3)启动子 终止子
(4)DNA分子杂交
解析
解:(1)原核生物具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点,因此常作为基因工程中的受体细胞.
(2)成功构建基因表达载体,才能使目的基因在受体细胞内存在和表达.
(3)基因表达载体的组成包括:目的基因、标记基因、启动子、终止子.来自cDNA文库的基因是通过逆转录得到的,无启动子和终止子等,将其插入在表达载体的启动子和终止子之间才能构成完整的基因并在受体细胞内表达.
(4)采用DNA分子杂交技术可检测干扰素基因是否成功导入大肠杆菌的DNA上.
故答案为:
(1)繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少
(2)基因表达载体的构建 受体细胞 表达
(3)启动子 终止子
(4)DNA分子杂交
请回答有关下图的问题:
(1)图1中①~⑤所示的生物工程称为蛋白质工程.该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过对______的修饰或合成,对现有蛋白质进行改造,或制造出一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求.
(2)图1中④所示过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是______ (请将模板链上的碱基写在前面).
(3)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产,则构建基因表达载体时,图2中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的______;且在图1中⑨过程之前,要对精子进行筛选,保留含性染色体______的精子.
(4)图中[3]______的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.
(5)为获得较多的受精卵进行研究,图1中⑥过程一般需要对供体用______激素处理,使其超数排卵;为提高培育成功率,进行⑩过程之前,要对供、受体动物做______处理.
(6)对早期胚胎进行______技术,可获得同卵双胎或多胎.
正确答案
解:(1)蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过对基因的修饰或合成,对现有的蛋白质进行改造,或制造出一种新的蛋白质,以满足人类生产生活的需求.
(2)图2中④表示反转录过程,该过程遵循的碱基互补原则为U-A、A-T、C-G、G-C,而翻译过程中遵循的碱基互补原则为U-A、A-U、C-G、G-C,前者不同于翻译过程的是A-T.
(3)基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子.图中3是标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.
(4)制备乳腺生物反应器过程中,在构建基因表达载体时,需在目的基因前加上乳腺蛋白基因的启动子;因为只有雌性个体能分泌乳汁,所以在图甲中⑨过程之前,要对精子进行筛选、保留含性染色体X的精子.
(5)为获得较多的受精卵进行研究,图甲中⑥过程一般用促性腺激素对供体做超数排卵处理;为提高培育成功率,进行胚胎移植过程之前,要对供、受体动物做同期发情处理.
(6)对早期胚胎进行胚胎分割移植技术,可获得同卵双胎或多胎.
故答案为:
(1)基因
(2)A-T
(3)标记基因
(4)启动子 X
(5)促性腺 同期发情
(6)胚胎分割移植
解析
解:(1)蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过对基因的修饰或合成,对现有的蛋白质进行改造,或制造出一种新的蛋白质,以满足人类生产生活的需求.
(2)图2中④表示反转录过程,该过程遵循的碱基互补原则为U-A、A-T、C-G、G-C,而翻译过程中遵循的碱基互补原则为U-A、A-U、C-G、G-C,前者不同于翻译过程的是A-T.
(3)基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子.图中3是标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.
(4)制备乳腺生物反应器过程中,在构建基因表达载体时,需在目的基因前加上乳腺蛋白基因的启动子;因为只有雌性个体能分泌乳汁,所以在图甲中⑨过程之前,要对精子进行筛选、保留含性染色体X的精子.
(5)为获得较多的受精卵进行研究,图甲中⑥过程一般用促性腺激素对供体做超数排卵处理;为提高培育成功率,进行胚胎移植过程之前,要对供、受体动物做同期发情处理.
(6)对早期胚胎进行胚胎分割移植技术,可获得同卵双胎或多胎.
故答案为:
(1)基因
(2)A-T
(3)标记基因
(4)启动子 X
(5)促性腺 同期发情
(6)胚胎分割移植
融合蛋白是通过DNA重组技术将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制合成的蛋白质.人的表皮生长因子受体(EGFR)是影响癌症发生发展的重要因素,它在肺癌、脑肿瘤等实体瘤中均有大量表达.天花粉蛋白(TCS)是重要天花粉的有效成分,具有抗肿瘤作用.下图是通过基因工程方法将人表皮生长因子基因(EGF)和TCS基因连接起来,利用大肠杆菌生成人表皮生长因子-天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图.请回答:
(1)为了建立含有EGF的cDNA文库,应从健康人体的______细胞中提取总mRNA,通过______法合成cDNA.从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF______.利用______技术可以大量扩增EGF,该技术所利用的原理是______.
(2)在①过程中,应使用的限制酶是______,在融合蛋白基因的首端还应
插入______,它是______识别和结合的位点.
(3)在②过程中,首先用______处理大肠杆菌,使其转变为______细胞.
(4)应用_______技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白.
(5)单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微,而人表皮生长因子--天花粉蛋白融合蛋白疗效显著,其原因是______.
(6)某同学为了筛选插入目的基因的表达载体,将处理过的载体分别置于含有氨苄青霉素和四环素的培养基上培养,观察其增殖和表达情况.此设计方案是否合理,______请说明理由______.
正确答案
解:(1)EGF基因只在表皮细胞中表达,即只有表皮细胞中含有相应的mRNA,因此要获得EGF基因,应从健康人体的表皮细胞中提取其mRNA,通过逆转录法合成.通过逆转录法合成的EGF基因不含内含子、启动子等结构,因此其长度比从基因组文库中获取的EGF基因短.利用PCR技术可以大量扩增EGF,该技术所利用的原理是DNA双链复制.
(2)EGF基因两侧的限制酶是BamHI和Sph I,因此在①过程中,应使用的限制酶是BamHI和SphI,而且在融合蛋白基因的首端还应插入启动子.
(3)在②过程中,首先用Ca2+处理大肠杆菌,使其转变为感受态细胞.
(4)应用抗原--抗体杂交_技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白.
(5)人表皮生长因子能与肿瘤细胞表面的受体特异性结合,从而使天花粉蛋白定向地作用于肿瘤细胞,因此单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微,而人表皮生长因子--天花粉蛋白融合蛋白疗效显著.
(6)由于表达载体不能在培养基上增殖和表达,只有导入大肠杆菌,才能增殖和表达,因此不能采用该方案.
故答案为:
(1)表皮 反(逆)转录 短 PCR DNA双链复制
(2)BamHⅠ和SphⅠ启动子 RNA聚合酶
(3)Ca2+ 感受态
(4)抗原--抗体杂交
(5)人表皮生长因子能与肿瘤细胞表面的受体(EGFR)特异性结合,从而使天花粉蛋白定向的作用于肿瘤细胞
(6)不合理 表达载体不能在培养基上增殖和表达,只有导入大肠杆菌,才能增殖和表达
解析
解:(1)EGF基因只在表皮细胞中表达,即只有表皮细胞中含有相应的mRNA,因此要获得EGF基因,应从健康人体的表皮细胞中提取其mRNA,通过逆转录法合成.通过逆转录法合成的EGF基因不含内含子、启动子等结构,因此其长度比从基因组文库中获取的EGF基因短.利用PCR技术可以大量扩增EGF,该技术所利用的原理是DNA双链复制.
(2)EGF基因两侧的限制酶是BamHI和Sph I,因此在①过程中,应使用的限制酶是BamHI和SphI,而且在融合蛋白基因的首端还应插入启动子.
(3)在②过程中,首先用Ca2+处理大肠杆菌,使其转变为感受态细胞.
(4)应用抗原--抗体杂交_技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白.
(5)人表皮生长因子能与肿瘤细胞表面的受体特异性结合,从而使天花粉蛋白定向地作用于肿瘤细胞,因此单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微,而人表皮生长因子--天花粉蛋白融合蛋白疗效显著.
(6)由于表达载体不能在培养基上增殖和表达,只有导入大肠杆菌,才能增殖和表达,因此不能采用该方案.
故答案为:
(1)表皮 反(逆)转录 短 PCR DNA双链复制
(2)BamHⅠ和SphⅠ启动子 RNA聚合酶
(3)Ca2+ 感受态
(4)抗原--抗体杂交
(5)人表皮生长因子能与肿瘤细胞表面的受体(EGFR)特异性结合,从而使天花粉蛋白定向的作用于肿瘤细胞
(6)不合理 表达载体不能在培养基上增殖和表达,只有导入大肠杆菌,才能增殖和表达
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