热门试卷

解：（1）植物组织培养的原理是植物细胞的全能性；秋水仙素能诱导染色体数目加倍，其作用机理是抑制纺锤体形成，从而引起细胞内染色体数目加倍．

（2）蛋白酶抑制剂基因表达的蛋白酶抑制剂能阻断或降低蛋白酶的活性，使昆虫不能正常消化食物中的蛋白质，还会引起害虫的厌食反应；而生长素诱导基因表达的产物对害虫无作用．所以要获得抗虫草莓可选择蛋白酶抑制剂基因作为目的基因．要鉴定转基因草莓中是否含有目的基因，从分子水平上可采用DNA分子杂交技术进行检测．

（3）Ⅱ过程常规方法采用杂交育种，还可先用花药离体培养获得2n和4n的草莓，再用植物体细胞杂交技术获得同时具凤梨风味和抗虫特性的草莓，但在诱导细胞融合之前，需用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体．

故答案为：

（1）全能       抑制纺锤体形成（从而引起细胞内染色体数目加倍）

（2）蛋白酶抑制剂基因       DNA分子杂交

（3）单倍体     植物体细胞杂交    纤维素酶和果胶酶

解：（1）①过程为构建基因表达载体，需要对质粒进行切割和与目的基因相连接，所以要用限制酶和DNA连接酶；据图分析可知，限制酶可选EcoRV  Sal1．

（2）①为构建基因表达载体，会出现将目的基因与质粒成功重组和重组失败的结果，所以ρBR322会出现两种结果，即：重组质粒和未重组的质粒；

（3）经过导入过程，B（受体细菌）细菌有4类情况：含有不是重组的质粒、含有重组质粒的、不含有质粒的、同时含有重组和不重组的质粒．

（4）细菌有三类：含有质粒（不是重组的）、含有重组质粒的、不含有质粒的．Tet抗性基因上有目的基因的插入位点，所以重组质粒上没有Tet抗性基因，成功导入重组质粒的细菌和没有导入的细菌均不含Tet抗性基因，即都不抗四环素，细胞可以在含四环素培养基上存活但不生长，而环丝氨酸会使生长的细胞致死，对不生长的细胞无影响，但会使含有抗四环素的细菌致死，所以C中成活的细菌有导入不成功的细菌和导入重组质粒的细菌．

（5）经过C后，现需要含重组质粒的细菌，含重组质粒的细菌含有Amp抗性基因，可在氨卡青霉素培养基中生长，而导入不成功的细菌会在其中死亡，所以可将经过C存活的细菌转入含氨卡青霉素的培养基中培养．

故答案为：

（1）EcoR V  Sal 1

（1）重组质粒    没有发生重组的质粒

（3）A B C D

（4）导入不成功的细菌和导入了重组质粒的细菌

（5）将存活的细菌转移到含氨苄青霉素的培养基上培养

解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割质粒．重组质粒时，还需要DNA连接酶连接目的基因和质粒切口．基因表达载体包括目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点．（2）卵母细胞的采集主要方法是：用促性腺激素处理，使其超数排卵．采集的卵母细胞，需要培养到减数第二次分裂中期后，才能与获能的精子受精．

（3）动物细胞培养的过程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→培养时，悬液中的细胞会很快贴附在瓶壁上，细胞表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养．

（4）图乙中a过程利用DNA拼接技术（基因工程）获取含有目的基因的胚胎成纤维细胞，b过程是通过动物细胞核移植技术培养克隆动物．

故答案为：

（1）PstI；EcoRI（位置可颠倒）；DNA连接酶；启动子；

（2）促性腺激素；减数第二次分裂中期；

（3）接触抑制；贴壁生长（两者顺序可颠倒）；胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）；传代；

（4）DNA拼接技术（基因工程）；动物细胞核移植技术．

解：（1）将组织细胞分散成单个细胞用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理．

（2）基因表达载体的构建用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶，将目的基因导入动物受精中用显微注射法．

（3）核移植过程用的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期；将细胞核和去核卵细胞组装成重组细胞的技术称为体细胞核移植技术；在诱导细胞整合过程可用电刺激、钙离子载体等处理．

（4）将发育成转基因牛的各种组织的是内细胞团，由于血清蛋白是从乳汁中获取，所以牛性别是雌性．

（5）转基因奶牛培育过程中运用到的生物技术有基因工程、克隆技术和胚胎工程等．

故答案为：

（1）胰蛋白

（2）限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶  显微注射法

（3）减数第二次分裂中（MⅡ）体细胞核移植技术  电刺激

（4）内细胞团   雌性

（5）基因工程、克隆技术和胚胎工程

解：（1）土壤农杆菌是一种细菌，属于原核生物；土壤农杆菌中的质粒是一种能进行自我复制的环状DNA分子．

（2）根据题干信息“只有T-DNA片段才转入植物细胞的基因组”可知，应将抗旱基因转移至Ti质粒的T-DNA中．由图可知，在一定条件下，需将外植体放在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养，这样被修饰的T-DNA就可转入植物细胞并整合到植物基因组中．

（3）愈伤组织是由高度液泡化，无定形状态的薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织．

（4）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在表型（蛋白质）水平对转基因植物与非转基因植物进行比较；通过转基因技术获得的个体为杂合子，为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行严格的自交，直到后代不出现性状分离为止．

故答案为：

（1）原核        复制

（2）T-DNA      土壤农杆菌

（3）相对没有分化的活的薄壁细胞团

（4）表型（蛋白质）    自交

解：（1）构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．

（2）DNA连接酶的作用是在DNA片段之间形成磷酸二酯键．

（3）基因表达载体的本质是DNA，其基本组成单位是脱氧核苷酸；基因表达载体中的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过转录合成mRNA．

（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．

甲、该Ti质粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位点，且用这两种酶切割可将目的基因插入T-DNA中，甲正确；

乙、该Ti质粒中不含限制酶SacI的切割位点，乙错误；

丙、该Ti质粒中含有限制酶XbaI和SacI的切割位点，但用这两种酶切割不会将目的基因插入T-DNA中，丙错误；

丁、该Ti质粒中不含限制酶XbaI的切割位点，丁错误．

故选：甲．

（5）将受体细胞培养成植株需要应用植物组织培养技术，该技术的理论依据是植物细胞的全能性．

故答案为：

（1）稳定存在

（2）磷酸二酯

（3）脱氧核苷酸    RNA聚合酶    转录

（4）甲

（5）植物组织培养     植物细胞的全能性

解：（1）基因表达载体的组成包括标记基因（如抗性基因）、复制原点、启动子、终止子和目的基因等，其中启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，可以驱动目的基因转录．

（2）PCR过程是在较高环境中进行的，需要热稳定DNA聚合酶（taq酶）；在PCR过程中通过加热（90-95℃）达到的结果，和体内DNA复制时所需解旋酶的作用相同．

（3）将目的基因导入植物细胞常用感受态细胞法；将目的基因导入微生物细胞，常用感受体细胞法，即先用Ca2+处理，将其转化为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞．将人胰岛素基因导入大肠杆菌内且成功表达后，提取的产物还需进行体外加工和改良，因为大肠杆菌是原核生物，其细胞中缺乏内质网、高尔基体，无法加工形成胰岛素．

（4）DNA连接酶的作用是恢复磷酸二酯键；经限制酶BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理后得到的目的基因可以形成重组质粒，说明限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切产物具有相同末端．

（5）图二中的菌落能抗氨苄青霉素，将灭菌绒布按到图二中培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到图三含四环素的培养基上培养，仍能生长的也能抗四环素，空圈为只能抗氨苄青霉素而不能抗四环素的．因此，图三结果显示，多数大肠杆菌既能抗氨苄青霉素，又能抗四环素，说明导入的是pBR322质粒，而不是重组质粒（重组质粒的四环素抗性基因被切断，不能表达，因此含重组质粒的大肠杆菌抗氨苄青霉素）．

故答案为：

（1）启动子     

（2）热稳定     解旋酶

（3）农杆菌     感受态        内质网、高尔基体

（4）磷酸二酯       相同末端

（5）抗氨苄青霉素不抗四环素（或只抗氨苄青霉素）     pBR322

解：（1）不同生物的DNA结构基本形式相同，因此不同种生物之间的基因能移植成功；同时一种生物的基因能在另一种生物体内表达，也说明了生物共用一套密码子，且从进化的角度看，这些生物具有共同的祖先．

（2）图中A是运载体．在DNA连接酶的作用下，具有相同黏性末端的DNA可以连接起来，因此能与连接的目的基因分子末端是．

（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；T-DNA的特点是：可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上．目的基因是否插入了转基因生物染色体DNA上是目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键；检测目的基因是否导入受体细胞常用DNA分子杂交技术．该棉花是采用基因工程技术培育形成的，而基因工程的原理是基因重组．

（4）基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为转化．

（5）基因工程的操作过程中，可以遵循碱基互补配对原则的步骤有①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；④目的基因的检测与表达．

（6）生物体在产生配子时，细胞质基因随机分配，因此如果把该基因导入叶绿体DNA中，将来产生的配子中不一定含有抗病基因．

故答案为：

（1）不同生物的DNA结构基本形式相同　密码子共同的祖先

（2）运载体  A

（3）农杆菌转化法可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上  目的基因是否插入了转基因生物染色体DNA上    DNA分子杂交技术基因重组

（4）转化

（5）124    

（6）不一定

解：（1）培养基中添加的生长素和细胞分裂素的作用是启动细胞进行有丝分裂，诱导离体的组织或细胞经过脱分化形成愈伤组织，再经过再分化形成幼苗；检测脱毒苗质量，从基因角度采用DNA分子杂交技术检测，也可从蛋白质分子角度采用抗原-抗体杂交技术．

（2）由图可知，茎尖越小，脱毒率越高，成苗率越低，在茎尖外植体的大小为0.27mm时，脱毒率和成苗率均较高，因此马铃薯脱毒培养中茎尖外植体的适宜大小为0.27mm．

（3）植物转基因技术常用方法是农杆菌转化法，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达．从而构建出基因表达载体，最后将重组细胞通过植物组织培养技术培养成完整植株． 

故答案为：

（1）有丝分裂   脱分化和再分化    核酸分子杂交    抗原-抗体杂交

（2）脱毒率越高，成苗率越低   0.27mm  因为此大小时，脱毒率高，成苗率也高

（3）农杆菌   T-DNA   基因表达载体    植物组织培养