- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
（l）该生态工程体现了______、______等生态工程的基本原理〔选答两项〕．
（2）通过现代生物技术可提高传统生态工程的效益，要通过基因工程培育抗病甘蔗，需要的工具酶是______，可通过______技术将导入了目的基因的甘蔗细胞培养成植株．若要检测转基因甘蔗细胞染色体上是否插入了日的基因，可采用______技术．若要检测目的基因是否表达相应的蛋白质则可以用______技术进行检测，其依据的原理是______．
（3）为大量繁殖良种猪，可采用胚胎移植技术．该技术，首先要对母猪注射______，做超数排卵处理，以获得更多的良种猪卵毋细胞，然后培养到______期，与经过______处理的良种猪精子进行体外受精．将早期胚胎培养到______时期，再将胚胎移植到本地母猪体内发育成小猪．受体对移入子宫的外来胚胎基本上不会发生______反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能．
正确答案
解：（1）桑基鱼塘利用了物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理等．
（2）基因工程的工具酶是限制酶和DNA连接酶；将受体细胞培育成完整植株利用的技术是植物组织培养技术；若要检测转基因甘蔗细胞染色体上是否插入了目的基因，可采用DNA分子杂交技术；若要检测目的基因是否表达出相应的蛋白质则可以用抗原抗体杂交技术，原理是抗体与抗原可以发生特异性结合．
（3）在胚胎移植中，需要对供体和受体进行同期发情，同时给供体母畜注射促性腺激素，使其超数排卵；卵母细胞需要培养到减数第二次分裂中期才具备受精能力；精子需要获能后才具备受精能力；早期胚胎一般要培养到桑椹胚或囊胚期进行胚胎移植；胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能．
故答案为：
（1）物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理
（2）限制性核酸内切酶、DNA连接酶植物组织培养技术 DNA杂交技术或基因探针技术抗原抗体杂交技术抗原抗体特异性结合（3）促性腺激素、减数第二次分裂中期、获能、桑椹胚或囊胚、免疫排斥
解析
解：（1）桑基鱼塘利用了物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理等．
（2）基因工程的工具酶是限制酶和DNA连接酶；将受体细胞培育成完整植株利用的技术是植物组织培养技术；若要检测转基因甘蔗细胞染色体上是否插入了目的基因，可采用DNA分子杂交技术；若要检测目的基因是否表达出相应的蛋白质则可以用抗原抗体杂交技术，原理是抗体与抗原可以发生特异性结合．
（3）在胚胎移植中，需要对供体和受体进行同期发情，同时给供体母畜注射促性腺激素，使其超数排卵；卵母细胞需要培养到减数第二次分裂中期才具备受精能力；精子需要获能后才具备受精能力；早期胚胎一般要培养到桑椹胚或囊胚期进行胚胎移植；胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能．
故答案为：
（1）物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理
（2）限制性核酸内切酶、DNA连接酶植物组织培养技术 DNA杂交技术或基因探针技术抗原抗体杂交技术抗原抗体特异性结合（3）促性腺激素、减数第二次分裂中期、获能、桑椹胚或囊胚、免疫排斥
生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白．
（1）基因工程主要技术手段是______和______等技术．
（2）操作步骤：从人的______获取目的基因；目的基因与______结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入______和终止子．然后把基因表达载体导入牛的______，通过发育形成的牛体细胞含人的______，成熟的牛产的奶中含有______，证明基因操作成功．
（3）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛______．
正确答案
解：（1）基因工程主要技术手段是体外DNA重组和转基因．
（2）通过基因工程培育出能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白的基本操作步骤是：从人的基因组文库获取目的基因；目的基因与载体结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入启动子和终止子；然后把基因表达载体导入牛的受精卵，通过发育形成的牛体细胞都含人的血清蛋白基因，成熟的牛产的奶中含有人的血清蛋白，证明基因操作成功．
（3）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛共用一套密码子．
故答案为：
（1）体外DNA重组 转基因
（2）基因组文库（人的DNA、人的mRNA逆转录、人的cDNA文库） 载体 启动子 受精卵 血清蛋白基因 人的血清蛋白
（3）共用一套密码子
解析
解：（1）基因工程主要技术手段是体外DNA重组和转基因．
（2）通过基因工程培育出能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白的基本操作步骤是：从人的基因组文库获取目的基因；目的基因与载体结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入启动子和终止子；然后把基因表达载体导入牛的受精卵，通过发育形成的牛体细胞都含人的血清蛋白基因，成熟的牛产的奶中含有人的血清蛋白，证明基因操作成功．
（3）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛共用一套密码子．
故答案为：
（1）体外DNA重组 转基因
（2）基因组文库（人的DNA、人的mRNA逆转录、人的cDNA文库） 载体 启动子 受精卵 血清蛋白基因 人的血清蛋白
（3）共用一套密码子
如图为利用基因工程培育花卉的过程（字母代表相应的物质或结构，数字代表过程或方法）．请回答：
（1）花卉基因工程可细分为花色基因工程、花形基因工程、香味基因工程等，不同的基因工程所需要获取的______不同，①过程需要的酶有______．
（2）基因工程中最常用的运载体是______，另外还有______、动植物病毒等．整合了目的基因的重组质粒，在组成上还含有启动子、终止子和______．
（3）②过程常用的方法是______，检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，需要采用______技术．
（4）外植体一般从受体植物的形成层处获取，原因是这部分细胞容易______．由外植体培养为转基因植株的③、④过程为______，该过程的理论基础是______．
（5）人工种子就是以形成b之后得到的______、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子．
正确答案
解：（1）花卉基因工程可细分为花色基因工程、花形基因工程、香味基因工程等，不同的基因工程所需要获取的目的基因是不同，①过程是基因表达载体构建过程，此过程需要用同一种限制酶切割目的基因和运载体，是它们露出相同的末端，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体．
（2）常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．
（3）②是转化目的基因过程，受体细胞是植物细胞，常用农杆菌转化法．转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，可用基因探针进行DNA分子杂交
技术检测．
（4）外植体一般从受体植物的形成层处获取，原因是这部分细胞全能性较高，容易形成愈伤组织．③是脱分化，④是再分化，是植物组织培养技术的过程，利用植物细胞具有全能性，培养完整植株．
（5）人工种子是指通过植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子．
故答案为：
（1）目的基因（或a） 限制酶和DNA连接酶
（2）质粒 λ噬菌体的衍生物 标记基因
（3）农杆菌转化法 DNA分子杂交
（4）诱导形成愈伤组织 脱分化和再分化 植物细胞的全能性
（5）胚状体
解析
解：（1）花卉基因工程可细分为花色基因工程、花形基因工程、香味基因工程等，不同的基因工程所需要获取的目的基因是不同，①过程是基因表达载体构建过程，此过程需要用同一种限制酶切割目的基因和运载体，是它们露出相同的末端，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体．
（2）常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．
（3）②是转化目的基因过程，受体细胞是植物细胞，常用农杆菌转化法．转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，可用基因探针进行DNA分子杂交
技术检测．
（4）外植体一般从受体植物的形成层处获取，原因是这部分细胞全能性较高，容易形成愈伤组织．③是脱分化，④是再分化，是植物组织培养技术的过程，利用植物细胞具有全能性，培养完整植株．
（5）人工种子是指通过植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子．
故答案为：
（1）目的基因（或a） 限制酶和DNA连接酶
（2）质粒 λ噬菌体的衍生物 标记基因
（3）农杆菌转化法 DNA分子杂交
（4）诱导形成愈伤组织 脱分化和再分化 植物细胞的全能性
（5）胚状体
基因工程又叫基因拼接技术．
（1）在该技术中，切割DNA的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的______断开．限制酶切割产生的DNA片段末端有两种形式，分别是______、______．
（2）基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为______、______ 两类，其中前者只可以连接______，后者既可以连接______也可以连接______．
正确答案
解：（1）在该技术中，切割DNA的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．限制酶切割产生的DNA片段末端有两种形式，分别是黏性末端、平末端．
（2）基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为E•coli连接酶、T4DNA连接酶两类，其中前者只可以连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端，也可以连接平末端．
故答案为：
（1）磷酸二酯键 黏性末端 平末端
（2）E•coli连接酶 T4DNA连接酶 黏性末端 黏性末端 平末端
解析
解：（1）在该技术中，切割DNA的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．限制酶切割产生的DNA片段末端有两种形式，分别是黏性末端、平末端．
（2）基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为E•coli连接酶、T4DNA连接酶两类，其中前者只可以连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端，也可以连接平末端．
故答案为：
（1）磷酸二酯键 黏性末端 平末端
（2）E•coli连接酶 T4DNA连接酶 黏性末端 黏性末端 平末端
我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，如图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图．图中质粒表示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因．根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：
（1）过程②必需的酶是______，这种获取目的基因的方式是______，除此之外目的基因的获取方法还有______，______．过程④必需的酶是______．⑤过程中为提高成功率，常用______溶液处理大肠杆菌．基因工程中载体除了质粒还有______、______．
（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共______种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是______．
（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Ampr、Tetr抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．接种到甲培养基上的目的是筛选______的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是______，______．
正确答案
解：（1）过程②中人生长激素信使RNA形成cDNA，表示逆转录，需要逆转录酶，除了这种人工合成目的基因的方法外，还有从基因文库中获取、PCR扩增技术等；过程④质粒和基因连接形成重组质粒．需要DNA连接酶发挥作用；⑤过程为转化，需要CaCl2使大肠杆菌处于易于吸收外界DNA的感受态．基因工程中载体有质粒、动植物病毒、噬菌体．
（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1，2，3表示，一种酶酶切时，一共可以得到3种不同长片段；两种酶酶切时，可得到1-2，2-1，2-3，3-2，1-3，3-1六种片段；三种酶酶切，可得到1-2，2-3，3-1三种片段，与前面重复，因此一种可形成9种片段，其中含有完整四环素抗性的有3种，单独用1酶切，单独用2酶切，1和2同时酶切得到的片段，占总数的
（3）在甲中能生长的是具有四环素抗性的细菌，含有四环素抗性基因；与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒，而且目的基因插入质粒后，破坏了青霉素抗性基因，使含有目的基因的大肠杆菌不能在含有青霉素的乙培养基上生长，但四环素基因是完好的，则含有目的基因的大肠杆菌能在含有四环素的丙培养基上生长．
故答案为：
（1）逆转录酶 人工合成 从基因文库中获取 PCR扩增 DNA连接酶 CaCl2 动植物病毒、噬菌体
（2）9
（3）含四环素抗性基因 死亡 存活
解析
解：（1）过程②中人生长激素信使RNA形成cDNA，表示逆转录，需要逆转录酶，除了这种人工合成目的基因的方法外，还有从基因文库中获取、PCR扩增技术等；过程④质粒和基因连接形成重组质粒．需要DNA连接酶发挥作用；⑤过程为转化，需要CaCl2使大肠杆菌处于易于吸收外界DNA的感受态．基因工程中载体有质粒、动植物病毒、噬菌体．
（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1，2，3表示，一种酶酶切时，一共可以得到3种不同长片段；两种酶酶切时，可得到1-2，2-1，2-3，3-2，1-3，3-1六种片段；三种酶酶切，可得到1-2，2-3，3-1三种片段，与前面重复，因此一种可形成9种片段，其中含有完整四环素抗性的有3种，单独用1酶切，单独用2酶切，1和2同时酶切得到的片段，占总数的
（3）在甲中能生长的是具有四环素抗性的细菌，含有四环素抗性基因；与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒，而且目的基因插入质粒后，破坏了青霉素抗性基因，使含有目的基因的大肠杆菌不能在含有青霉素的乙培养基上生长，但四环素基因是完好的，则含有目的基因的大肠杆菌能在含有四环素的丙培养基上生长．
故答案为：
（1）逆转录酶 人工合成 从基因文库中获取 PCR扩增 DNA连接酶 CaCl2 动植物病毒、噬菌体
（2）9
（3）含四环素抗性基因 死亡 存活
人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，通常从人血中提取．如果应用现代生物科学技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就会安全、高效地满足人类需求．如图是利用牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据如图回答：
（1）下列现代生物技术手段中哪些是上述过程没有涉及的______
A．基因工程 B．动物细胞培养 C．体外受精D．核移植技术E．体外早期胚胎培养 F．胚胎分割G．胚胎移植H．动物细胞融合
（2）荷斯坦奶牛组织应来自______ （雌性或雄性）个体，②分散成单个细胞一般需使用______处理，细胞在培养过程中往往需要的适宜的气体环境是______，培养液中还需加入抗生素，其目的是______
（3）获取①需要用到的工具酶是______，若在体外大量扩增①可采用______技术；若要检测③中是否存在①可采用______技术．
（4）③至④过程中去核的卵细胞一般来自于屠宰场收集的牛卵巢，需在体外培养至______（填时期）再去除细胞核．
（5）⑤发育至______ 期移植到⑦最为适宜．
正确答案
解：（1）由以上分析可知，在此过程中涉及的技术有基因工程、动物体细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养技术、胚胎分割、胚胎移植．故选：ABDEFG．
（2）荷斯坦奶牛组织应来自雌性个体；将动物组织分散成单个细胞一般需要采用胰蛋白酶处理；动物细在培养过程中往往需要的适宜的气体环境，即95%空气和5%的CO2；培养液中还需加入抗生素，其目的是防止杂菌污染．
（3）获取①目的基因需要用到限制酶；在体外大量扩增①目的基因可采用PCR技术；检测目的基因是否插入到受体基因组DNA中常用DNA分子杂交技术，即用放射性同位素等标记的目的基因作探针，使探针与受体基因组DNA进行分子杂交，若显示出杂交带，则表明插入成功．
（4）③至④过程中去核的卵细胞一般来自于屠宰场收集的牛卵巢，需在体外培养至减数第二次分裂中期再去除细胞核．
（5）胚胎移植时一般选择发育至桑椹胚或囊胚期的胚胎．
故答案为：
（1）ABDEFG
（2）雌性 胰蛋白酶 95%空气和5%的CO2 防止杂菌污染
（3）限制酶 PCR DNA分子杂交
（4）减数第二次分裂中期
（5）桑椹胚或囊胚
解析
解：（1）由以上分析可知，在此过程中涉及的技术有基因工程、动物体细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养技术、胚胎分割、胚胎移植．故选：ABDEFG．
（2）荷斯坦奶牛组织应来自雌性个体；将动物组织分散成单个细胞一般需要采用胰蛋白酶处理；动物细在培养过程中往往需要的适宜的气体环境，即95%空气和5%的CO2；培养液中还需加入抗生素，其目的是防止杂菌污染．
（3）获取①目的基因需要用到限制酶；在体外大量扩增①目的基因可采用PCR技术；检测目的基因是否插入到受体基因组DNA中常用DNA分子杂交技术，即用放射性同位素等标记的目的基因作探针，使探针与受体基因组DNA进行分子杂交，若显示出杂交带，则表明插入成功．
（4）③至④过程中去核的卵细胞一般来自于屠宰场收集的牛卵巢，需在体外培养至减数第二次分裂中期再去除细胞核．
（5）胚胎移植时一般选择发育至桑椹胚或囊胚期的胚胎．
故答案为：
（1）ABDEFG
（2）雌性 胰蛋白酶 95%空气和5%的CO2 防止杂菌污染
（3）限制酶 PCR DNA分子杂交
（4）减数第二次分裂中期
（5）桑椹胚或囊胚
“今又生”（Gendicine）是世界上首个被批准上市的基因治疗药物，其本质是利用腺病毒和人p53基因拼装得到的重组病毒．人的P53蛋白可对高危癌前病变的DNA损伤进行修复；对DNA损伤无法修复的细胞，P53蛋白则诱导其进入冬眠状态或细胞凋亡．“今又生”的载体采用毒性极弱的腺病毒，其基因不能整合到宿主细胞基因组中，也不能复制，无遗传毒性；载体经基因工程改造后．只需对细胞实施一次感染就可达到治疗的目的．请回答下列问题：
（1）在“今又生”的生产中，为了获得更高的安全性能，科学家选择性地放弃了一般的载体都应该具有的
______结构．构建表达载体时利用M酶与N酶进行酶切，酶切序列如图1所示．则M酶与N酶切出的末端能在______ 酶的作用下相互连接．
（2）P53功能蛋白是由4条肽链组装而成，每条肽链均由393个氨基酸缩合而成．若考虑到翻译过程起始密码子和终止密码子的存在，则控制每条肽链合成的DNA至少应该含有______个核苷酸，在脱水缩合形成P53蛋白时，需要脱去______个水分子
（3）在正常人体中试举出一种不含p53基因的细胞：______．
（4）已知P53蛋白微量高效，只需极微量就可以完成功能．p53基因位于常染色体上．已知图2中1号个体的一条染色体上的p53基因突变为无功能的假基因．2号无家族病史，4号为“易患癌症者”．据图推测5号个体为
“易患癌症者”的概率为______．
（5）图2中4号个体为了治病，接受了“今又生”的基因治疗．在她接受注射后两个月，从她血液中提取了相关蛋白做了电泳分析，以便和治疗前进行对比．但是患者慌乱中把治疗前后的底片搞混淆了，两张底片分别如图3所示，请据图判断她的治疗______（“有”或“没有”）效果，治疗后的电泳图是______（“左”或“右”）图．
正确答案
解：（1）根据题干信息“载体经基因工程改造后，只对细胞实施一次感染，不能复制”可知，在“今又生”的生产中，为了获得更高的安全性能，科学家选择性地放弃了具有复制原点的载体．构建表达载体时利用M酶与N酶进行酶切，酶切序列如图1所示．则M酶与N酶切出的末端能在DNA连接酶的作用下相互连接．
（2）P53功能蛋白是由4条完全相同的肽链组装而成，每条肽链由393个氨基酸缩合而成．若考虑到翻译过程起始密码和终止密码的存在，则控制每条肽链合成的p53基因至少应该含有（393+1）×6=2364个核苷酸．在形成P53蛋白时，脱去的水分子数=氨基酸数-肽链数=393×4-4=1568个．
（3）人体成熟的红细胞不含细胞核和各种细胞器，因此不含p53基因．
（4）已知如图1中1号个体的一条染色体上的p53基因突变为无功能的假基因，假设其基因型为Aa，则2号的基因型为AA，3号的基因型及概率为
（5）由图可知，接受治疗后出现相应的p53蛋白质，说明她的治疗是有效的，左边那幅图是治疗后的电泳分析图．
故答案为：
（1）复制起点（复制原点） DNA连接
（2）2364 1568
（3）成熟红细胞（血小板亦可）
（4）
（5）是 左
解析
解：（1）根据题干信息“载体经基因工程改造后，只对细胞实施一次感染，不能复制”可知，在“今又生”的生产中，为了获得更高的安全性能，科学家选择性地放弃了具有复制原点的载体．构建表达载体时利用M酶与N酶进行酶切，酶切序列如图1所示．则M酶与N酶切出的末端能在DNA连接酶的作用下相互连接．
（2）P53功能蛋白是由4条完全相同的肽链组装而成，每条肽链由393个氨基酸缩合而成．若考虑到翻译过程起始密码和终止密码的存在，则控制每条肽链合成的p53基因至少应该含有（393+1）×6=2364个核苷酸．在形成P53蛋白时，脱去的水分子数=氨基酸数-肽链数=393×4-4=1568个．
（3）人体成熟的红细胞不含细胞核和各种细胞器，因此不含p53基因．
（4）已知如图1中1号个体的一条染色体上的p53基因突变为无功能的假基因，假设其基因型为Aa，则2号的基因型为AA，3号的基因型及概率为
（5）由图可知，接受治疗后出现相应的p53蛋白质，说明她的治疗是有效的，左边那幅图是治疗后的电泳分析图．
故答案为：
（1）复制起点（复制原点） DNA连接
（2）2364 1568
（3）成熟红细胞（血小板亦可）
（4）
（5）是 左
转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至⑥代表过程，A至E代表结构或细胞）：
（1）通过图中①过程得到的B叫做______，②过程常用______处理农杆菌，有利于B转化到农杆菌中．
（2）图中③过程叫做______，⑥过程叫做______，此过程用植物的组织培养技术将叶盘培养成草莓幼苗．
（3）在分子水平上，可采用______的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的疫苗．
正确答案
解：（1）图中①是基因表达载体的构建过程，该过程得到的B为基因表达载体（重组质粒）；②表示将目的基因导入农杆菌细胞，将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用CaCl2溶液（或Ca2+）处理农杆菌，使之处于易于吸收周围环境中DNA的感受态，从而有利于B转化到农杆菌中．
（2）将转基因植物细胞培育成转基因植株还需要采用植物组织培养技术，而植物组织培养包括脱分化和再分化两个过程，因此图中③为脱分化过程，⑥为再分化过程．
（3）在分子水平上检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质，可采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）基因表达载体（重组质粒） CaCl2溶液（或Ca2+）
（2）脱分化 再分化
（3）抗原-抗体杂交
解析
解：（1）图中①是基因表达载体的构建过程，该过程得到的B为基因表达载体（重组质粒）；②表示将目的基因导入农杆菌细胞，将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用CaCl2溶液（或Ca2+）处理农杆菌，使之处于易于吸收周围环境中DNA的感受态，从而有利于B转化到农杆菌中．
（2）将转基因植物细胞培育成转基因植株还需要采用植物组织培养技术，而植物组织培养包括脱分化和再分化两个过程，因此图中③为脱分化过程，⑥为再分化过程．
（3）在分子水平上检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质，可采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）基因表达载体（重组质粒） CaCl2溶液（或Ca2+）
（2）脱分化 再分化
（3）抗原-抗体杂交
荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用．
（1）荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将______筛选出来．
（2）表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，如图1为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点．若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是______．
（3）迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是______．经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的______或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物．
（4）荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光．生物学研究中常利用“荧光素-荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量．某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究．
[实验材料]1×10-8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液（过量）、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液．
[实验结果]见图2．
[实验分析与结论]
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组______作为对照．除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有______（至少写出一个）．
②实验结果：由图可知，______点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度．
正确答案
解：（1）标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来．
（2）要获得目的基因必须在目的基因的两侧相应的酶切位点进行切割，图1中可以看出，BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，故不可取；SmaⅠ的酶切位点只有一个，故不可取；根据表格可以看出，MboⅠ的识别序列中含有MspⅠ的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割．
（3）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物．
（4）①探究实验应遵循对照原则和单一变量原则，因此为使结果更加科学准确，应增设一组浓度为0mg/L的荧光素酶溶液作为空白对照．实验的无关变量还有温度、反应的时间等．
②图2可以看出，酶浓度达到40mg/L时，发光强度不再增加，因此d点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度．
故答案为：
（1）含有目的基因的细胞
（2）Msp1
（3）显微注射技术 输卵管
（4）①0mg/L荧光素酶溶液 温度（反应时间） ②d
解析
解：（1）标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来．
（2）要获得目的基因必须在目的基因的两侧相应的酶切位点进行切割，图1中可以看出，BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，故不可取；SmaⅠ的酶切位点只有一个，故不可取；根据表格可以看出，MboⅠ的识别序列中含有MspⅠ的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割．
（3）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物．
（4）①探究实验应遵循对照原则和单一变量原则，因此为使结果更加科学准确，应增设一组浓度为0mg/L的荧光素酶溶液作为空白对照．实验的无关变量还有温度、反应的时间等．
②图2可以看出，酶浓度达到40mg/L时，发光强度不再增加，因此d点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度．
故答案为：
（1）含有目的基因的细胞
（2）Msp1
（3）显微注射技术 输卵管
（4）①0mg/L荧光素酶溶液 温度（反应时间） ②d
利用转基因动物生产一些特殊药品的技术，因成本低、污染小，深受科研单位和制 药公司的重视．我国科学家培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊，根据所学知识回答下列有关问题：
（1）培育可产生乳铁蛋白的转基因山羊时，首先用到了基因工程技术．基因工程用到的工具酶是______．该技术常用的动物受体细胞是______．
（2）为基因工程的核心是______．
（3）将含有产乳铁蛋白基因的受体细胞进行______，获得如图中最左侧的结构，图中结构A、C分别是______、______．图中①、②过程分别指的是______．
正确答案
解：（1）基因工程用到的工具酶包括限制酶、DNA连接酶．该技术培育可产生乳铁蛋白的转基因山羊，动物基因工程中常用的动物受体细胞是受精卵．
（2）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（3）将含有产乳铁蛋白基因的受体细胞进行早期胚胎培养，获得如图中最左侧的结构（囊胚），图中结构A表示透明带，C表示内细胞团．图中①表示做DNA分析性别鉴定，②表示胚胎移植．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶 受精卵
（2）基因表达载体的构建
（3）早期胚胎培养 透明带 内细胞团 做DNA分析性别鉴定、胚胎移植
解析
解：（1）基因工程用到的工具酶包括限制酶、DNA连接酶．该技术培育可产生乳铁蛋白的转基因山羊，动物基因工程中常用的动物受体细胞是受精卵．
（2）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（3）将含有产乳铁蛋白基因的受体细胞进行早期胚胎培养，获得如图中最左侧的结构（囊胚），图中结构A表示透明带，C表示内细胞团．图中①表示做DNA分析性别鉴定，②表示胚胎移植．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶 受精卵
（2）基因表达载体的构建
（3）早期胚胎培养 透明带 内细胞团 做DNA分析性别鉴定、胚胎移植
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