热门试卷

解：（1）基因表达载体的构建过程：首先用同一种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒．

（2）将目的基因导入微生物细胞常采用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．

（3）C过程为诱导选择，既要诱导出愈伤组织还要进行筛选，筛选出被含重组质粒的农杆菌侵染的叶片细胞，淘汰掉普通细胞，故应添加卡那霉素．C过程的名称是脱分化，形成愈伤组织．

（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，发现植株中具有抗虫基因，这说明抗虫基因已经成功导入受体细胞，但不能看出抗虫基因是否表达，因此不能说转基因抗虫植株培育获得成功．

（5）整个过程应用的主要生物技术是基因工程、植物组织培养．

故答案为：

（1）限制性内切酶        DNA连接酶        

（2）CaCl2

（3）卡那霉素    脱分化    

（4）不可以   要看抗虫基因在植株中是否表达

（5）基因工程、植物组织培养

解：：（1）这一问主要考察疫苗的本质，即灭活的抗原．乙肝病毒结构包括核酸和蛋白质外壳，在作为疫苗时能与相应抗体特异性结合的是其产生的蛋白质外壳，即蛋白质外壳是激发免疫的抗原；

（1）根据图中④目的基因最终产生乙肝病毒外壳进行接种，说明该目的基因具体功能是指导合成乙肝病毒蛋白；

（2）本题较为简单但学生却容易忽略而出错，记不清楚PCR全称为多聚酶链式反应；而重组质粒时需要切割质粒和链接目的基因与质粒，所以需要限制酶和DNA连接酶；

（3）本题主要考察灭活特点，灭活主要是破坏核酸结构，使其不具有活性．血源性“乙型肝炎疫苗”是取用乙肝病毒感染者的血液，用高速离心提纯血液中的乙肝病毒，之后再灭活，在灭活核酸的时候可能有些乙肝病毒还具有活性，会导致乙肝病毒在接种者体内繁殖患病．

（4）本题主要考察遗传密码的特性，所有生物共用一套遗传密码子，共有64个密码子，所以目的基因在人细胞和大肠杆菌中才能产生相同抗原；

（5）本题主要考察限制酶切割后形成黏性末端的特点，这是疑难点，BamHⅠ在获取目的基因和切割质粒时使目的基因和质粒两端产生相同的黏性末端，而在连接酶作用会出现自身环化、目的基因自身与自身连接、质粒自身与自身连接、目的基因与质粒连接多种情况，需要筛选；用两种限制酶切割，质粒和目的基因两端不会形成相同黏性末端，在连接酶作用下不会发生环化还可以防止反向连接，最终在连接酶作用下只会出现目的基因与质粒成功重组和没有进行重组的质粒．

（6）本题考查在获得重组质粒时不会切割四环素抗性基因，由图二知BamHⅠ可切割破坏四环素抗性基因，所以第五题出现能保持四环素抗性基因完整的应该是用HindⅢ和EcoRⅠ进行切割质粒，所以最终会出现成功重组的质粒和没有进行重组的质粒保持四环素抗性基因完整，根据题干要成功转入目的基因，则只能是重组质粒，为一种．

（7）本题主要考察筛选含目的基因受体细胞方法，依据原理是根据重组质粒上的抗性基因做抗性接种试验，观察受体细胞是否能够存活，存活的则含有重组质粒，即含有目的基因．

故答案为：

（1）蛋白质外壳；

（1）指导合成乙肝病毒外壳；

（2）多聚酶链式反应技术       DNA连接酶；

（3）血源性疫苗需灭活破坏其核酸结构，灭活不成功则会导致接种者患乙肝，而基因工程不需；

（4）所有生物共用一套遗传密码；

（5）BamHⅠ或HindⅢ和EcoRⅠ原因：第二组限制酶效率高，第一组只用一种限制酶会导致目的基因和质粒两端产生的黏性末端相同，在进行重组质粒时会出现质粒与质粒相连、质粒与目的基因相连、目的基因与目的基因相连，目的基因自身环化，质粒自身环化五种结果，需要筛选而比较麻烦；用两种酶切割两端产生的黏性末端不一致，可避免第一组出现的情况；

（6）1；

（7）将大肠杆菌转移到含有卡那霉素培养基中进行培养，能够生存的则是含目的基因的大肠杆菌

解：（1）cDNA文库是利用mRNA反转录获得的，除去了基因结构中内含子的干扰，实验容易成功．PCR技术可在体外大量扩增目的基因，PCR技术是在较高温度环境中进行的，因此需要热稳定DNA聚合酶．

（2）构建基因表达载体时，首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；为让目的基因在羊的乳汁中表达，应在目的基因前加上羊的乳腺蛋白基因的启动子，构建成表达载体；启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点；构建完成的基因表达载体需通过显微注射技术导人羊的受精卵，获得重组细胞．

（3）表达载体已进入细胞，但乳汁中没有检测到蛛丝蛋白，可能是蛛丝蛋白基因没有整合到染色体上，也可能是蛛丝蛋白没有表达，因此可先采用DNA分子杂交技术检测蛛丝蛋白基因是否整合到了染色体上，若已确认此步成功，则应该继续采用分子杂交技术检测蛛丝蛋白基因是否转录形成mRNA，以找出原因．

故答案为：

（1）cDNA        热稳定DNA聚合（Taq）

（2）羊的乳腺蛋白     RNA聚合酶   受精卵

（3）DNA分子杂交    蛛丝蛋白基因（目的基因）    转录出了蛛丝蛋白的mRNA

解：（1）质粒是小型的环状DNA分子．由图可知，在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞常用了农杆菌转化法．

（2）从图1中可见，mRNAl和mRNA2的结合直接导致了多聚半乳糖醛酸酶无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状．

（3）普通番茄细胞导入目的基因后，经③脱分化过程形成愈伤组织，然后通过再分化诱导出试管苗，进一步培养成正常植株．

（4）限制性内切酶的作用位点是磷酸二酯键，即图2中的a处；DNA连接酶的作用是连接两个DNA片段之间的磷酸二酯键，即图2中的a处．

（5）图3表示转录过程，3处为核糖核苷酸，而4处为脱氧核糖核苷酸，因此3和4的核苷酸不同．

故答案为：

（1）环状DNA   农杆菌转化法

（2）多聚半乳糖醛酸酶

（3）脱分化   愈伤组织

（4）a   a  

（5）不同，3是核糖核苷酸，4是脱氧核糖核苷酸

解：（1）构建表达载体时，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒；表达载体包含目的基因（绿色荧光蛋白基因Gfp）、标记基因、启动子、终止子和复制原点等．

（2）步骤③所用的G418是一种抗生素，其作用是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞．

（3）胚胎干细胞来自于早期胚胎或原始性腺．

（4）囊胚包括滋养层细胞和内细胞团细胞，其中滋养层细胞将发育成胎盘和胎膜，而内细胞团细胞将发育成各种组织，因此图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团位置；图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是同期发情处理．

（5）从分子水平上检测小鼠是否存在绿色荧光蛋白，可采用抗原-抗体杂交法．

故答案为：

（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶      标记基因      启动子

（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）内细胞团       同期发情处理

（5）抗原-抗体杂交

解：（1）由于加拿大科学家通过转基因山羊已经生产出重组的人类丁酰胆碱酯酶，该酶可用于对抗生化武器，所以目的基因是丁酰胆碱酯酶基因，将该基因导入受体细胞常用的方法是显微注射法．

（2）胚胎工程是指对动物的早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术．图中过程⑦所涉及的胚胎工程技术是胚胎移植．

（3）从雌性山羊卵巢内获取的卵母细胞需要培养到减数第二次分裂中期才能完成受精作用，此时细胞中不含同源染色体，着丝点没有分裂，所以只含1个染色体组数．为了获得更多的卵母细胞，往往需要向雌性山羊体内注入促性腺激素．受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵细胞膜反应．

故答案为：

（1）丁酰胆碱酯酶   显微注射

（2）配子     胚胎移植

（3）减数第二次分裂中     1     促性腺    卵细胞膜反应

解：（1）图示为PCR技术，根据已知的核苷酸序列合成引物，当引物与DNA母链通过碱基互补配对方式结合，该过程需要TaqDNA聚合酶，其最大特点是耐高温．

（2）可以通过人工合成方法获得干扰素基因的步骤：由干扰素中氨基酸顺序推导出　　　　 mRNA　　中核糖核苷酸顺序，再进一步推导出基因中脱氧核苷酸顺序．

（3）重组DNA一般通过显微注射方法导入哺乳动物的受精卵细胞中，再将该细胞送入母体内，使其生长发育成为转基因动物，干扰素基因在转基因动物的乳腺细胞中表达．

故答案为：

（1）PCR  碱基互补配对   耐高温

（2）氨基酸　　　　 mRNA　　脱氧核苷酸

（3）显微注射   受精卵     乳腺

解：（1）A表示目的基因，在基因表达载体的构建过程中，该过程需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，还需DNA连接酶将运载体和目的基因连接形成重组DNA分子．

（2）在如图基因工程的操作过程中，②表示基因表达载体的构建过程，④表示目的基因的扩增和筛选，这两个过程都遵循碱基互补配对原则．

（3）不同种生物之间的基因移植成功的主要原因是不同生物DNA分子具有相同的双螺旋结构，也说明了不同生物共用一套遗传密码．

（4）①X表示以mRNA为模板逆转录形成cDNA的过程．

②PCR技术获取目的基因的前提是已知Bcl-2基因或者Bcl-2mRNA的核苷酸，以便合成引物；条件包括模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶，根据题中流程图，第一轮循环的模板式Bcl-2cDNA．PCR技术在高温下解开双螺旋，而DNA复制在解旋酶的作用下解开双螺旋．

（5）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；在培育转基因植物时常用农杆菌转化法，其中农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体细胞中．

（6）将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米体内获得新品种的方法是基因工程育种，原理是基因重组．

故答案为：

（1）目的基因（外源基因）     限制性核酸内切酶和DNA连接

（2）②④

（3）不同生物DNA分子具有相同的双螺旋结构   遗传密码

（4）①反转录 ②引物 Bcl-2cDNA    高温   解旋酶

（5）显微注射  农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体细胞中

（6）基因重组

解：（1）PCR扩增与体内DNA复制过程中，解旋的方法不同，前者通过高温解开双链，后者通过解旋酶解开双链．

（2）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式，即黏性末端和平末端．当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端．

（3）基因文库包含部分基因文库和基因组文库

（4）基因诊④基因诊断的主要原理是DNA分子杂交．

故答案为：

（1）高温    解旋酶     

（2）黏性末端

（3）部分基因文库     基因组文库

（4）DNA分子杂交