热门试卷

解：（1）图中①表示采用反转录法（人工合成法）获取目的基因；由图可知，质粒上的两个标记基因中均有限制酶Ⅰ（-↓GATC-）的识别序列和切点，若用该酶切割会将两个标记基因均破坏，因此只能用限制酶Ⅱ切割质粒，但切割含有抗虫基因的外源DNA分子时可以只用限制酶Ⅰ，也可以同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ．

（2）由于人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同，因此人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组．目的基因在细菌中表达的过程：．

（3）用限制酶Ⅱ切割质粒后会破四环素抗性基因，不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此能在含氨苄青霉素的培养基上生存的大肠杆菌已经成功导入普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入．

（4）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，其中农杆菌的作用是感染植物，将目的基因转移到受体细胞中．

故答案为：

（1）反转录法（人工合成法）ⅠⅡ碱基互补配对

（2）人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同

（3）普通质粒或重组质粒

（4）农杆菌可感染植物，将目的基因转移到受体细胞中

解：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．

（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜．

（4）进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．用抗原-抗体杂交法在分子水平上可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

故答案为：

（1）PCR    ClaⅠDNA连接    A   D

（2）基因表达载体      四环素

（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞  

（4）植物组织培养      抗原-抗体杂交

解：（1）图中A表示提取目的基因，C表示将目的基因导入受体细胞．

（2）由图中可以看出所用的运载体B是环状的质粒．

（3）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，其切割后的黏性末端是；限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，其切割后的黏性末端是．LTP1基因和质粒的黏性末端相同，因此在DNA连接酶的作用下能黏合．

（4）检测LTP1基因在啤酒酵母菌中的表达的方法是检测转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白．

故答案为：

（1）提取目的基因    将目的基因导入受体细胞

（2）质粒

（3）    能     DNA连接酶

（4）检测转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白

解：（1）获得目的基因最简单的方式是用限制酶对DNA进行切割获得目的基因．将获得的DNA片段与载体结合重组DNA，再用Ca2+处理大肠杆菌使其成为感受态细胞，并将重组DNA转入大肠杆菌进行扩增等．

（2）家蚕是ZW性别决定，含有Z、W两条性染色体，所以在对家蚕基因组进行分析时应分析27条常染色体和核2条性染色体（Z、W染色体），即29个双链DNA分子的核苷酸序列．

（3）真核生物的基因分为编码区和非编码区，编码区又有内含子和外显子之分，其中外显子能编码氨基酸，由此可知丝心蛋白H链的基因编码区有16000个碱基对，其中有1000个碱基对的序列不编码蛋白质，能编码氨基酸的个数为（16000-1000）÷3=5000个．

故答案为：

（1）限制酶     运载体（质粒）     Ca2+感受态

（2）29    

（3）5000

解：（1）PCR技术可以在体外大量扩增目的基因；PCR过程需要较高的温度，因此需要热稳定DNA聚合酶．引物是一小段单链DNA，作为DNA复制的起始点，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上．

（2）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．图示将目的基因导入植物受体细胞的方法是农杆菌转化法．重组质粒上的标记基因是卡那霉素抗性基因，因此C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入卡那霉素，以淘汰不含重组质粒的细胞．

（3）将离体棉花叶片组织培育成转基因抗虫植株，需采用植物组织培养技术，该技术的原理是植物细胞全能性．

（4）检测目的基因是否转录出mRNA常采用分子杂交技术，即使用标记的目的基因（探针）与提取出的mRNA分子做分子杂交．

（5）人工种子是指通过植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子．因此将植物细胞培养到胚状体，再包上人工种皮，就可制成神奇的人工种子．

故答案为：

（1）利用PCR技术扩增目的基因 Taq酶（耐高温的DNA聚合酶）   在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上

（2）限制酶、DNA连接酶 农杆菌转化法 卡那霉素

（3）植物组织培养 植物细胞全能性

（4）目的基因 mRNA分

（5）胚状体（或不定芽、顶芽、腋芽也可）

解：（1）由图中信息可知，载体上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，目的基因上也有它们的酶切位点，应用此2种酶切．当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tetR基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行．

（2）能让目的基因开始表达的是启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．

（3）将目的基因导入到动物中常用显微注射法．

（4）对早期胚胎进行切割，经过程胚胎移植过程可获得多个新个体都发育成了个体，这体现了细胞全能性，属于无性繁殖．

（5）一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法．

故答案为：

（1）BamHI和HindIII 含氨苄青霉素

（2）A

（3）显微注射法

（4）无性

（5）抗原-抗体杂交

解：（1）要想目的基因只在乳腺组织中表达，在构建基因表达载体时，需要将人的血清白蛋白基因和乳腺组织特异性表达的启动子等调控组建重组在一起，过程①获得的A为含目的基因的表达载体．A常用显微注射法导入受体细胞．

（2）在核移植之前，必须先去掉受体卵细胞的核，目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞，核移植的受体应选用处于MⅡ中期的卵母细胞．

（3）进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能．胚胎移植时，一般选择发育良好的桑椹胚或囊胚．

（3）因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养，采用胎儿成纤维进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊．

（5）由重组细胞到转基因绵羊的培养成功，体现了动物细胞核的全能性．

故答案为：

（1）含目的基因的表达载体   显微注射

（2）保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞      MⅡ

（3）免疫排斥反应   桑椹胚或囊胚

（4）整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养

（5）动物细胞核的全能性

解：（1）题图中的高血压相关基因作为目的基因，质粒作为载体，二者需用同种限制性核酸内切酶切割后才能连接成重组载体，该过程与质粒上有限制酶切割位点有关．

（2）当受体细胞为动物细胞时，一般选择受精卵，利用显微注射法将目的基因导入受体细胞．

（3）若在子代大鼠的体内检测出与高血压相关的蛋白质，则从分子水平上说明高血压相关基因已成功表达；若子代大鼠的血压升高，则从当个体水平上说明高血压相关基因已成功表达．

故答案为：

（1）目的基因　运载体 同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）

（2）显微注射法     受精卵

（3）检测到体内有相关蛋白　    表现出高血压症状

解：（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，合成合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的脱氧核苷酸序列，再通过人工合成（化学）方法合成所需基因．

（2）利用PCR技术扩增DNA时所需的条件：引物、模板DNA、原料（4种脱氧核糖核苷酸）和耐热性的DNA聚合酶等．

（3）由A和载体B拼接形成的C称为基因表达载体．

（4）将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca2+处理，使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子，这样可以提高受体细胞的转化率．

故答案为：

（1）逆转录酶   DNA聚合酶    氨基酸    脱氧核苷酸

（2）引物   模板（目的基因或A基因）

（3）基因表达载体 

（4）使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子