热门试卷

解：（1）由以上分可知①是逆转录．构建A基因重组载体时，首先需用限制性核酸内切酶切割含有A基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶连接A基因和运载体形成A基因重组载体．

（2）在单克隆抗体的制备过程中，至少需要经过两次筛选，一次是用用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；另一次是用专一抗体检测方法筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．

（3）分析图解可知，该过程中首先利用基因工程技术获得A蛋白，然后利用动物细胞融合技术获得重组细胞X，在利用动物细胞培养技术对X细胞进行培养．

（4）由于在二次免疫过程可以增加小鼠体内的效应B细胞数，因此在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次．

（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗．对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原-抗体杂交法，即用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测．

故答案为：

（1）逆转录      限制酶和DNA连接酶

（2）选择性培养基筛选     用专一抗体检测

（3）转基因技术   动物细胞融合技术   动物细胞培养技术

（4）通过二次免疫，增加小鼠体内的效应B细胞数 

（5）A蛋白     抗A蛋白的单克隆抗体

解：（l）质粒是小型环状DNA分子．

（2）根据图示限制酶M和N的识别序列可知，它们切割产生的黏性末端是GATC（CTAG）．DNA连接酶能将具有相同黏性末端的DNA片段连接形成重组DNA分子．

（3）将目的基因导入受体细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态．

（4）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花．

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，假设目的基因扩增了n次，则需要引物的对数为2n-1，已知其中一种引物共用了31个，则2n-1=31，n=5．

（6）①实验设计要遵循对照原则和单一变量原则，本实验的目的是探究转基因菊花对菊天牛2龄幼虫的作用，可见自变量为是否加入转基因菊花嫩茎及叶片，因此对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物．

②据表分析，实验组与对照组死亡率差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．

故答案为：

（1）小型环状DNA

（2）GATC （CTAG）    DNA连接酶    

（3）Ca2+（或CaCl2）

（4）卡那霉素    

（5）5

（6）①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物    ②实验组与对照组死亡率

解：（1）人的基因与大肠杆菌的DNA分子都具有双螺旋结构，都是由四种脱氧核苷酸组成，用相同的限制酶切割形成的黏性末端也相同，所以人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组．

（2）目的基因的获取途径有：从基因文库中获取；利用PCR技术扩增；人工合成（反转录法和化学合成法）．从图中可以明显地看出，过程①是通过反转录法获取目的基因的．

（3）过程③表示借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径将目的基因导入受体细胞．受体细胞是微生物时，一般用Cacl2（Ca2+）处理，以增大细胞壁的通透性，使细胞成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，易于含有目的基因的重组质粒进入受体细胞．

（4）由图可知，质粒上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素的抗性基因．构建基因表达载体时，破环了质粒上的四环素抗性基因，但没有破环氨苄青霉素的抗性基因，所以导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，都能在含有氨苄青霉素的培养基上生长．

（5）由第四小题分析可知，把已经导入了普通质粒或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，导入普通质粒的大肠杆菌能生长，导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能．

故答案为：

（1）人的基因与大肠杆菌DNA的组成成分相同，结构相同，并且具有相同的黏性末端

（2）逆转录

（3）侵染  Cacl2（Ca2+）     细胞壁

（4）普通质粒A和重组质粒

（5）普通质粒A   重组质粒    目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能

解：（1）限制性内切酶（或限制酶）是“分子手术刀”．

（2）DNA连接酶是“分子缝合针”．

（3）基因进入受体细胞的载体是“分子运输车”．

（4）操作步骤：从人的基因组文库获取目的基因；目的基因与载体结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入启动子和终止子．然后把基因表达载体导入牛的受精卵，通过发育形成的牛体细胞含人的血清蛋白基因，成熟的牛产的奶中含有人的血清蛋白，证明基因操作成功．

（5）人的基因在牛体内能表达，说明人和牛共用一套密码子．把重组质粒导入植物细胞主要方法农杆菌转化，导入动物细胞方法显微注射技术，导入微生物方法Ca2+处理法．

故答案为：

（1）限制性内切酶（或限制酶） 

（2）DNA连接酶

（3）基因进入受体细胞的载体 

（4）基因组文库          载体          启动子       受精卵      血清蛋白基因      人的血清蛋白

（5）共用一套密码子        农杆菌转化法          显微注射技术        Ca2+处理法

解：（1）由以上分可知①是逆转录．

（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，即首先需用限制性核酸内切酶切割含有A基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶连接A基因和运载体形成A基因重组载体．

（3）动物细胞培养时，必须满足无菌无毒、营养、温度和pH、气体环境等条件，才能使细胞大量增殖；若受体细胞是受精卵，则需将其在体外培养到桑椹胚或囊胚时期，将其移入到母体子宫，培育成转基因动物．转基因动物可以作为生物反应器，生产A蛋白．

（4）③是动物细胞融合过程，需采用细胞融合技术；诱导动物细胞融合的方法有物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇）和生物法（灭活的病毒）；小鼠骨髓瘤细胞和效应B细胞融合形成的X是杂交瘤细胞．

故答案为：

（1）逆转录     

（2）基因表达载体的构建     限制性核酸内切酶      DNA 连接酶

（3）温度和pH      桑椹胚或囊胚     生物反应器     

（4）细胞融合技术  灭活的病毒      杂交瘤细胞

解：（1）质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团．

（2）DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以磷酸基团和五碳糖相连．由题目可知，SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C．

（3）用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是目的基因与抗性基因被破坏．

（4）将游离末端重新结合形成DNA使用的是连接酶，获得的环状DNA可能有：原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状；目的基因与切割质粒形成重组质粒．

（5）如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRⅠ酶切割的优点是：避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化．

（6）导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素的培养基培养．

故答案：

（1）两

（2）磷酸基团    五碳糖   G    C

（3）目的基因与抗性基因被破坏

（4）连接酶        原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状；目的基因与切割质粒形成重组质粒

（5）避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化

（6）抗生素

解：（1）给草鱼接种疫苗的目的是使草鱼产生主动免疫力．草鱼病毒性出血病是由草鱼呼肠弧病毒（GCRV）引起的，而GCRV的外壳蛋白是引起草鱼患病毒性出血病的抗原物质．

（2）GCRV的遗传物质是双链RNA，因此需要设计一对引物，在逆转录酶的作用下，通过PCR技术获得大量的PV7基因．

（3）由图可知，启动子P10能启动PV71基因的转录，启动子PH能启动PV72基因的转录，因此为了防止连接的位置有误，应使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，也需要不同的限制酶先后两次切割质粒，再将两个PV7基因先后连接到质粒上．

（4）基因控制蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程，因此PV7将通过转录和翻译过程产生GCRV外壳蛋白（抗原），受到抗原刺激后，草鱼体内产生抗体和记忆B细胞．然后还要给各组草鱼注射等量的相同浓度的GCRV，观察统计草鱼的免疫保护率．

（5）组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%，但是与组别5比较鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是导入草鱼体内的普通质粒能提高草鱼的非特异性免疫能力．

故答案为：

（1）使草鱼产生主动免疫力   CD

（2）逆转录  PCR

（3）ADE

（4）转录和翻译     记忆B细胞    等量的相同浓度的GCRV

（5）导入草鱼体内的普通质粒能提高草鱼的非特异性免疫能力

解：（1）过程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入缓冲液、原料、逆转录酶和ATP和引物等，过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是使RNA链和DNA链分开．

（2）过程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．图中显示利用了两种限制酶切割目的基因和载体，从而获得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化．

（3）目的基因上游的启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有复制原点、终止子等结构．

（4）过程⑥中，要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态的细胞．

（5）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是检测ETA基因能否表达及表达量．

故答案为：

（1）逆转录酶和ATP　   使RNA链和DNA链分开

（2）磷酸二酯 使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化

（3）RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录       复制原点、终止子

（4）感受态

（5）检测ETA基因能否表达及表达量

解：（1）图中步骤①所代表的过程是逆转录；一般受体细胞为原核生物时，可用Ca2+处理受体细胞，由于Ca2+能使细胞壁的通透性增加，能够使受体细胞处于感受态细胞；检验S基因是否翻译成S蛋白的方法是抗原一抗体杂交技术．

（2）①用该流感病毒对小鼠进行注射，从产生免疫反应小鼠的脾脏中得到相应的B淋巴细胞；

②设法将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择性培养基进行筛选，得到迅速大量繁殖，产生专一的抗体的杂交瘤细胞；

③对上述杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞；

④将杂交瘤细胞在体内或体外培养，就可以从中提取出大量的能抗该流感病毒的单克隆抗体了．

故答案为：

（1）逆转录   Ca2+感受态细胞   抗原一抗体杂交实验

（2）②骨髓瘤细胞    迅速大量繁殖，产生专一的抗体   ③克隆化培养   ④体外