- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp如即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、BboI、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，酶切位点分别为cC↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：
（1）图1中目的基因D的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间是通过______键连接的，它是DNA复制时由______催化形成的．
（2）若用限制酶MboI完全切割图1中DNA片段，则产物中至少有______种不同DNA片段；若图1中虚线方框内的碱基对被碱基对被T-A碱基对替换，再用限制酶Sma I完全切割，其产物长度分别为______．
（3）为了提髙实验成功率，需要获取大量目的基因D，可通过______技术对图1中的DNA分子进行扩增．
（4）若用同种限制酶处理图1、图2中两种分子，以便构建重组质粒，最好选用的限制酶是______，若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，先用______处理大肠杆菌，使之转变成感受态细胞．为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般先用添加含有抗生素______的培养基进行培养．
正确答案
解：（1）DNA一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间是通过磷酸二酯键连接的，它是DNA复制时由DNA聚合酶催化形成的．
（2）图1中至少含有2个限制酶MboⅠ的识别序列（↓GATC），因此用限制酶MboⅠ完全切割图1中DNA片段，产物中至少有3种不同的DNA片段；若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，基因D就突变为基因d，那么基因d上只有一个限制酶SmaⅠ切割位点，被限制酶SmaⅠ切割的产物长度为534+796-3=1327kb、658+3=661bp．
（3）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，所以为了提髙实验成功率，需要获取大量目的基因D，可通过PCR技术对图1中的DNA分子进行扩增．
（4）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割．若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，先用钙离子处理大肠杆菌，使之转变成感受态细胞．用限制酶BamHⅠ切割质粒后，破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因．因此，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般先用添加含有抗生素B的培养基进行培养．
故答案为：
（1）磷酸二酯键 DNA聚合酶
（2）3 1327bp、661bp
（3）PCR （多聚酶链式反应）
（4）BamHⅠ钙离子（Ca2+） B
解析
解：（1）DNA一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间是通过磷酸二酯键连接的，它是DNA复制时由DNA聚合酶催化形成的．
（2）图1中至少含有2个限制酶MboⅠ的识别序列（↓GATC），因此用限制酶MboⅠ完全切割图1中DNA片段，产物中至少有3种不同的DNA片段；若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，基因D就突变为基因d，那么基因d上只有一个限制酶SmaⅠ切割位点，被限制酶SmaⅠ切割的产物长度为534+796-3=1327kb、658+3=661bp．
（3）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，所以为了提髙实验成功率，需要获取大量目的基因D，可通过PCR技术对图1中的DNA分子进行扩增．
（4）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割．若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，先用钙离子处理大肠杆菌，使之转变成感受态细胞．用限制酶BamHⅠ切割质粒后，破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因．因此，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般先用添加含有抗生素B的培养基进行培养．
故答案为：
（1）磷酸二酯键 DNA聚合酶
（2）3 1327bp、661bp
（3）PCR （多聚酶链式反应）
（4）BamHⅠ钙离子（Ca2+） B
我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白，对应的基因为S基因），请回答下列问题．
（1）在这项技术中，S基因属于______．
（2）用______处理S基因和运载体，并用______使之结合，这里的DNA片段两两结合的产物有______种，除了S基因，构建好的表达载体还应具有______等结构．
（3）将表达载体导入哺乳动物细胞，筛选得到工程细胞．使用合成培养基培养工程细胞时，通常需要加入______等天然成分．工程细胞在生长过程中有______现象，需要定期使用______酶处理，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．
正确答案
解：（1）在基因工程技术中，S基因属于目的基因．
（2）在基因表达载体构建的过程中，要用同一种限制酶处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合．由于目的基因和运载体均具有相同黏性末端，因此这里的DNA片段两两结合的产物有目的基因自身连接、运载体自身连接和重组质粒3种．除了S基因，构建好的表达载体还应具有启动子、终止子、标记基因等结构．
（3）在对工程细胞进行动物细胞过程中，培养基中通常需要加入动物血清等天然成分．细胞在生长过程中有贴壁生长和接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．
故答案为：
（1）目的基因
（2）同一种限制酶 DNA连接酶 3 启动子、终止子、标记基因
（3）动物血清 贴壁生长和接触抑制 胰蛋白酶或胶原蛋白酶
解析
解：（1）在基因工程技术中，S基因属于目的基因．
（2）在基因表达载体构建的过程中，要用同一种限制酶处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合．由于目的基因和运载体均具有相同黏性末端，因此这里的DNA片段两两结合的产物有目的基因自身连接、运载体自身连接和重组质粒3种．除了S基因，构建好的表达载体还应具有启动子、终止子、标记基因等结构．
（3）在对工程细胞进行动物细胞过程中，培养基中通常需要加入动物血清等天然成分．细胞在生长过程中有贴壁生长和接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．
故答案为：
（1）目的基因
（2）同一种限制酶 DNA连接酶 3 启动子、终止子、标记基因
（3）动物血清 贴壁生长和接触抑制 胰蛋白酶或胶原蛋白酶
（2015秋•天津期末）如图所示为培育农作物新品种的过程示意图．请回答问题：
（1）图示育种过程涉及的生物工程技术有______．（答出两项）
（2）图中①、②分别表示一个已插入外源DNA片段的重组Ti质粒载体的______、______，通常在外源DNA的首端要有启动子，它是______ 识别和结合的重要部位．
（3）图中从愈伤组织到形成完整的新品种植株的途径有两条，具体通过哪条途径主要取决于培养基中______（写激素名称）的浓度配比．用植物组织培养的方法制作的人工种子要用到图中的______（写结构名称）
（4）若要从大量培养的紫草愈伤组织中提取紫草素，则哪项条件是不需要的？
A．消毒灭菌 B．充足光照 C．适宜温度 D．适宜养料和激素
（5）请根据所学现代生物技术，回答下列问题：
①体外受精时，______的精子与卵子相遇识别，识别物质基础是______．当精子表面和卵细胞膜表面相互接触时，发生了______反应，这是防止多精入卵的屏障之一．
②为了确保得到所需性别的试管牛，往往需要对移植前的胚胎进行性别鉴定，请举出对早期胚胎进行性别鉴定的方法（只需写出名称或简要原理）______．
③动物“生物反应器”是转基因动物技术中最诱人的部分之一，已知该奶牛培育过程中所用受体细胞为一只雌性奶牛胎儿的成纤维细胞，导入目的基因常用的方法是______．人们还可以建立生产生长激素的乳房生物反应器，即：科学家将______重组在一起，使其生长发育成转基因动物．
正确答案
解：（1）由以上分析可知，图示育种过程涉及到的生物工程技术有基因工程、植物体细胞杂交技术．
（2）图中①表示Ti质粒上的T-DNA，其可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上；②表示Ti质粒上的标记基因，该基因便于筛选含有目的基因的受体细胞．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
（3）图中从愈伤组织到形成完整的新品种植株的途径有两条，具体通过哪条途径主要取决于培养基中的生长素和细胞分裂素的浓度配比．人工种子是指通过植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子．因此，用植物组织培养的方法制作的人工种子，其形成要用到图中的X胚状体．⑩是人工胚乳，其主要作用是提供胚状体发育所需的营养．
（4）愈伤组织不含叶绿体，不能进行光合作用，因此从大量培养的紫草愈伤组织中提取紫草素时，不需要充足的光照条件．
（5）①体外受精时，获能的精子与卵子相遇，需通过细胞膜上的糖蛋白识别．当精子表面和卵细胞膜表面相互接触时，精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠，
顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道屏障]；
②为了确保得到所需性别的试管牛，可以用DNA分子杂交技术（利用基因探针鉴定）、分析胚胎细胞的染色体组型的方法对移植前的胚胎进行性别鉴定．
③受体细胞是动物细胞，用显微注射法导入目的基因．科学家将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组重组在一起，使其生长发育成转基因动物．可以建立生产生长激素的乳房生物反应器．
故答案为：
（1）基因工程、植物体细胞杂交
（2）T-DNA、标记基因 RNA聚合酶
（3）生长素和细胞分裂素 X胚状体
（4）B
（5）获能 糖蛋白 透明带
DNA分子杂交技术（利用基因探针鉴定）、分析胚胎细胞的染色体组型．
显微注射法 生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件
解析
解：（1）由以上分析可知，图示育种过程涉及到的生物工程技术有基因工程、植物体细胞杂交技术．
（2）图中①表示Ti质粒上的T-DNA，其可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上；②表示Ti质粒上的标记基因，该基因便于筛选含有目的基因的受体细胞．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
（3）图中从愈伤组织到形成完整的新品种植株的途径有两条，具体通过哪条途径主要取决于培养基中的生长素和细胞分裂素的浓度配比．人工种子是指通过植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子．因此，用植物组织培养的方法制作的人工种子，其形成要用到图中的X胚状体．⑩是人工胚乳，其主要作用是提供胚状体发育所需的营养．
（4）愈伤组织不含叶绿体，不能进行光合作用，因此从大量培养的紫草愈伤组织中提取紫草素时，不需要充足的光照条件．
（5）①体外受精时，获能的精子与卵子相遇，需通过细胞膜上的糖蛋白识别．当精子表面和卵细胞膜表面相互接触时，精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠，
顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道屏障]；
②为了确保得到所需性别的试管牛，可以用DNA分子杂交技术（利用基因探针鉴定）、分析胚胎细胞的染色体组型的方法对移植前的胚胎进行性别鉴定．
③受体细胞是动物细胞，用显微注射法导入目的基因．科学家将生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组重组在一起，使其生长发育成转基因动物．可以建立生产生长激素的乳房生物反应器．
故答案为：
（1）基因工程、植物体细胞杂交
（2）T-DNA、标记基因 RNA聚合酶
（3）生长素和细胞分裂素 X胚状体
（4）B
（5）获能 糖蛋白 透明带
DNA分子杂交技术（利用基因探针鉴定）、分析胚胎细胞的染色体组型．
显微注射法 生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件
研究发现，人体2号染色体上的ALK基因和EML4基因会发生异常融合（如图所示），该变异与肺癌的发生关系密切，为探究A-E融合基因的作用，研究者以小鼠为材料进行了多想实验，请回答：
（1）将A-E融合基因的表达载体导入小鼠的______细胞，如果转基因成功可在小鼠体内检测到______、______和______．
（2）A-E融合基因的转基因在小鼠的肺泡上皮细胞表达．几周后发现这些小鼠的双肺长出了成百上千的癌结节，说明该融合基因表达产物有致癌作用，为使该结论更有说服力，还需用______的小鼠进行对照实验．该产物致癌的机理可能是什么？______．
（3）ALK抑制剂是治疗该种肺癌的特效药物，但是A-E融合基因的表达产物在1156号（半胱氨酸→甲流氨酸）和1196号（亮氨酸→甲流氨酸）发生改变时，该药物失效，说明该融合基因发生了由于______而引起的突变．目前发现A-E融合基因还可以发生9种以上的突变，这些突变都能导致肺部癌变，也使特效药失效，以上现象体现了基因突变的特点______．
正确答案
解答：（1）将A-E融合基因通过基因工程技术导入小老鼠的体内获得转基因老鼠，在获得转基因动物的过程中通常导入哺乳动物的受精卵中，转基因是否成功还需进行基因工程的第四步是目的基因的监测与鉴定（选修三P14），就本题而言如果转基因成功可在小鼠体内检测到：A-E融合基因、A-E融合基因的mRNA、A-E融合基因的蛋白质；
（2）A-E融合基因的转基因在小鼠的肺泡上皮细胞表达．几周后发现这些小鼠的双肺长出了成百上千的癌结节，说明该融合基因表达产物有致癌作用，为使该结论更有说服力，还需要设置对照实验，要排除载体和原有基因的影响，必须设置两组对照：导入空白载体和没有导入A-E融合基因，该产物致癌的机理可能是引起了促进原癌基因和抑癌基因发生突变；
（3）由于A-E融合基因的表达产物在1156号（半胱氨酸→甲流氨酸）和1196号（亮氨酸→甲流氨酸）发生了氨基酸种类的改变没有影响到氨基酸的数目的改变，所以可推测变异类型为：碱基对的替换；目前发现A-E融合基因还可以发生9种以上的突变，这些突变都能导致肺部癌变，也使特效药失效，以上现象体现了基因突变的特点：不定向性、多害少利；
故答案为：
（1）受精卵 A-E融合基因 A-E融合基因的mRNA A-E融合基因的蛋白质
（2）导入空白载体/没有导入A-E融合基因 促进原癌基因和抑癌基因发生突变
（3）碱基对的替换 不定向性、多害少利
解析
解答：（1）将A-E融合基因通过基因工程技术导入小老鼠的体内获得转基因老鼠，在获得转基因动物的过程中通常导入哺乳动物的受精卵中，转基因是否成功还需进行基因工程的第四步是目的基因的监测与鉴定（选修三P14），就本题而言如果转基因成功可在小鼠体内检测到：A-E融合基因、A-E融合基因的mRNA、A-E融合基因的蛋白质；
（2）A-E融合基因的转基因在小鼠的肺泡上皮细胞表达．几周后发现这些小鼠的双肺长出了成百上千的癌结节，说明该融合基因表达产物有致癌作用，为使该结论更有说服力，还需要设置对照实验，要排除载体和原有基因的影响，必须设置两组对照：导入空白载体和没有导入A-E融合基因，该产物致癌的机理可能是引起了促进原癌基因和抑癌基因发生突变；
（3）由于A-E融合基因的表达产物在1156号（半胱氨酸→甲流氨酸）和1196号（亮氨酸→甲流氨酸）发生了氨基酸种类的改变没有影响到氨基酸的数目的改变，所以可推测变异类型为：碱基对的替换；目前发现A-E融合基因还可以发生9种以上的突变，这些突变都能导致肺部癌变，也使特效药失效，以上现象体现了基因突变的特点：不定向性、多害少利；
故答案为：
（1）受精卵 A-E融合基因 A-E融合基因的mRNA A-E融合基因的蛋白质
（2）导入空白载体/没有导入A-E融合基因 促进原癌基因和抑癌基因发生突变
（3）碱基对的替换 不定向性、多害少利
自然界中的两种微生物，可以通过各自不同的作用将培养液中的葡萄糖转化为维生素C，其过程如下图所示．在欧文氏菌中无2，5-DKG还原酶，不能将2，5-DKG转化为2-KLG；而棒状杆菌不能直接转化D-葡萄糖．科学家通过基因工程技术，改造其中一种细菌，仅用一步发酵即可生成2-KLG．请根据以上信息回答下列问题．
（1）由图知，欧文氏菌和棒状杆菌的同化作用类型是______．
（2）利用基因工程技术可以改造上述两种菌中的______菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-KLG．
（3）利用基因工程技术改造此细菌的基本方法是：先用______同时切割______和______，然后用DNA连接酶将上述切割产物连接，构成______并将其导入到受体菌中．
（4）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即______DNA连接酶和______DNA连接酶．
（5）基因工程中除质粒外，______和______也可作为运载体．
（6）一般情况下，不能直接用未处理的此菌作为受体菌，原因是______．
正确答案
解：（1）由图知，欧文氏菌和棒状杆菌的同化作用类型都是异养型．
（2）由于在欧文氏菌中无2，5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶，所以利用基因工程技术改造欧文氏菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龙酸．
（3）利用基因工程技术改造此细菌的基本方法是：先用同种限制性核酸内切酶同时切割目的基因（2，5-DKG还原酶基因）和运载体，然后用DNA连接酶将上述切割产物连接，构成重组DNA分子，并将其导入到受体菌中．
（4）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶．
（5）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
（6）未处理的此菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，因此一般情况下，不能直接用未处理的此菌作为受体菌．
故答案为；
（1）异养型
（2）欧文氏菌
（3）同种限制性核酸内切酶 2，5-DKG还原酶基因 质粒 重组质粒（重组DNA）
（4）Ecoli T4
（5）噬菌体 动植物病毒
（6）未处理的此菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
解析
解：（1）由图知，欧文氏菌和棒状杆菌的同化作用类型都是异养型．
（2）由于在欧文氏菌中无2，5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶，所以利用基因工程技术改造欧文氏菌，使其可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龙酸．
（3）利用基因工程技术改造此细菌的基本方法是：先用同种限制性核酸内切酶同时切割目的基因（2，5-DKG还原酶基因）和运载体，然后用DNA连接酶将上述切割产物连接，构成重组DNA分子，并将其导入到受体菌中．
（4）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶．
（5）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
（6）未处理的此菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，因此一般情况下，不能直接用未处理的此菌作为受体菌．
故答案为；
（1）异养型
（2）欧文氏菌
（3）同种限制性核酸内切酶 2，5-DKG还原酶基因 质粒 重组质粒（重组DNA）
（4）Ecoli T4
（5）噬菌体 动植物病毒
（6）未处理的此菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
请据图回答下列问题：
（1）在培育转基因牛过程中，②过程常用的方法是______．转基因牛可通过分泌乳汁来产生人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有______，其作用是能够被______识别并结合从而启动转录过程．
（2）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是______细胞，Ⅲ代表的细胞具有______和______的特点．
（3）一般情况下农杆菌不能感染的植物是______，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现______．
正确答案
解：（1）当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．基因的表达需要启动子，因此在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有启动子，其作用是能够被RNA聚合酶识别并结合从而启动转录过程．
（2）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（3）在自然条件下，农杆菌感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力．利用农杆菌这一点特点，能实现将目的基因导入到植物细胞染色体的DNA上的目的．
故答案为：
（1）显微注射法 启动子 RNA聚合酶
（2）B细胞（浆细胞） 无限增殖 产生特异性抗体
（3）单子叶植物 目的基因导入到植物细胞染色体的DNA上
解析
解：（1）当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．基因的表达需要启动子，因此在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有启动子，其作用是能够被RNA聚合酶识别并结合从而启动转录过程．
（2）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（3）在自然条件下，农杆菌感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力．利用农杆菌这一点特点，能实现将目的基因导入到植物细胞染色体的DNA上的目的．
故答案为：
（1）显微注射法 启动子 RNA聚合酶
（2）B细胞（浆细胞） 无限增殖 产生特异性抗体
（3）单子叶植物 目的基因导入到植物细胞染色体的DNA上
（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的______处，DNA连接酶作用于______处．（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的方法有______法、______法和______法．
（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用______技术，该技术的核心是______和______．
（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______做探针进行分子杂交检测，又要用______方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
正确答案
解：（1）图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的切割位点，也是DNA连接酶的连接位点；b表示氢键，是解旋酶的作用位点．
（2）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法．
（3）将细胞培养成植株需要利用植物组织培养技术，该技术的主要步骤是脱分化和再分化，原理是植物细胞具有全能性．
（4）要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
故答案为：
（1）a a
（2）农杆菌转化 基因枪 花粉管通道
（3）植物组织培养 脱分化 再分化
（4）耐盐基因（目的基因） 一定浓度的盐水浇灌（移裁到盐碱地中）
解析
解：（1）图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的切割位点，也是DNA连接酶的连接位点；b表示氢键，是解旋酶的作用位点．
（2）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法．
（3）将细胞培养成植株需要利用植物组织培养技术，该技术的主要步骤是脱分化和再分化，原理是植物细胞具有全能性．
（4）要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的耐盐基因做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
故答案为：
（1）a a
（2）农杆菌转化 基因枪 花粉管通道
（3）植物组织培养 脱分化 再分化
（4）耐盐基因（目的基因） 一定浓度的盐水浇灌（移裁到盐碱地中）
如图是转基因猕猴培育过程示意图，请据图回答：
（1）过程②中常用的方法将______目的基因导入受精卵．
（2）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持______．
（3）从雄性猕猴附睾中取出的精子不能在体外使卵母细胞受精，需要用人工配置的______使精子获能；上述流程中必须要将供体母畜体内的______冲取出来．
（4）图中过程⑦称为______，为使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，此前需对雌猴作同期发情处理．
正确答案
解：（1）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法．
（2）动物细胞培养时，提供CO2气体的作用是维持培养液的pH．
（3）取出的精子在获能液中进行获能处理后才具有受精的能力；可通过促性腺激素处理供体母畜后将卵母细胞冲取出来．
（4）⑦为胚胎移植．
故答案为：
（1）显微注射
（2）培养液的pH
（3）获能液卵母细胞
（4）胚胎移植
解析
解：（1）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法．
（2）动物细胞培养时，提供CO2气体的作用是维持培养液的pH．
（3）取出的精子在获能液中进行获能处理后才具有受精的能力；可通过促性腺激素处理供体母畜后将卵母细胞冲取出来．
（4）⑦为胚胎移植．
故答案为：
（1）显微注射
（2）培养液的pH
（3）获能液卵母细胞
（4）胚胎移植
科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达．但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，据图回答：
（1）过程①表示的是采取______的方法来获取目的基因．
（2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶切割______质粒，用限制酶切割目的______基因．用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过______原则进行连接．
（3）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了______，反之则没有导入．
（4）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为______．写出目的基因导入细菌中表达的过程．______
（5）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是______．
正确答案
解：（1）由人生长激素基因的mRNA获取人生长激素基因的方法是反转录法．
（2）由题干知限制酶Ⅰ与限制酶Ⅱ切割后留下的黏性末端能黏合在一起；由图示知质粒上有限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ两种酶的识别序列，形成重组质粒后，GeneⅠ完整，那么切割质粒的切点应在GeneⅡ处，即用限制酶Ⅰ在GeneⅡ处将质粒切开．用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端可以通过碱基互补配对原则形成氢键进行连接．
（3）用限制酶Ⅱ切割质粒后会破四环素抗性基因，不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此能在含氨苄青霉素的培养基上生存的大肠杆菌已经成功导入普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入．
（4）所有的生物共用一套密码子，是人体的生长激素基因在细菌体内成功表达的基础．目的基因导入细菌中的表达过程包括转录和反应过程，如图
（5）由于人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同，因此人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组．
故答案为：
（1）逆转录法（人工合成法）
（2）ⅠⅡ碱基互补配对
（3）普通质粒或重组质粒
（4）共用一套（遗传）密码子
（5）人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同
解析
解：（1）由人生长激素基因的mRNA获取人生长激素基因的方法是反转录法．
（2）由题干知限制酶Ⅰ与限制酶Ⅱ切割后留下的黏性末端能黏合在一起；由图示知质粒上有限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ两种酶的识别序列，形成重组质粒后，GeneⅠ完整，那么切割质粒的切点应在GeneⅡ处，即用限制酶Ⅰ在GeneⅡ处将质粒切开．用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端可以通过碱基互补配对原则形成氢键进行连接．
（3）用限制酶Ⅱ切割质粒后会破四环素抗性基因，不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此能在含氨苄青霉素的培养基上生存的大肠杆菌已经成功导入普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入．
（4）所有的生物共用一套密码子，是人体的生长激素基因在细菌体内成功表达的基础．目的基因导入细菌中的表达过程包括转录和反应过程，如图
（5）由于人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同，因此人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组．
故答案为：
（1）逆转录法（人工合成法）
（2）ⅠⅡ碱基互补配对
（3）普通质粒或重组质粒
（4）共用一套（遗传）密码子
（5）人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同
（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：
…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…
…TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG…
红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：
…TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…
…AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG…
其中，______ DNA分子含有“目的基因”，______ DNA分子是“质粒”．
（2）用剪刀代表进行切割．酶切位点在______ （a处还是b处），此化学键称为______．请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点．
（3）你模拟插入的DNA片断能称得上一个基因吗？______．EcoRI属于______ 酶．
（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的______ 的群体．按照其中所含基因的量又可分为______ 文库和______ 文库．
正确答案
解：（1）EcoRI酶的识别序列是-GAATTC-，甲中含有一个识别序列，乙中含有两个识别序列，所以甲表示质粒，乙中含有目的基因．
（2）限制酶的切割位点是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．EcoRI限制酶能识别-GAATTC-序列，并在G与A之间切割核苷酸序列，切割方式如下：
绿色硬纸板（DNA分子甲）的碱基序列为：
…ATAGCATGCTATCCATG||AATTCGGCATAC…
…TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG…
红色硬纸板（DNA分子乙）的碱基序列为：
…TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC…
…AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG…
（3）基因是具有遗传效应的DNA片段，该片断不能称为一个基因．EcoRI属于限制酶．
（4）基因文库是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的受体菌的群体，包括基因组文库和部分基因文库．
故答案为：
（1）乙，甲
（2）a处，磷酸二酯键
绿色硬纸板（DNA分子甲）的碱基序列为：
…ATAGCATGCTATCCATG||AATTCGGCATAC…
…TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG…
红色硬纸纸（DNA分子乙）的碱基序列为：
…TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC…
…AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG…
（3）不能，限制性核酸内切酶
（4）受体菌 基因组 部分基因
解析
解：（1）EcoRI酶的识别序列是-GAATTC-，甲中含有一个识别序列，乙中含有两个识别序列，所以甲表示质粒，乙中含有目的基因．
（2）限制酶的切割位点是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．EcoRI限制酶能识别-GAATTC-序列，并在G与A之间切割核苷酸序列，切割方式如下：
绿色硬纸板（DNA分子甲）的碱基序列为：
…ATAGCATGCTATCCATG||AATTCGGCATAC…
…TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG…
红色硬纸板（DNA分子乙）的碱基序列为：
…TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC…
…AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG…
（3）基因是具有遗传效应的DNA片段，该片断不能称为一个基因．EcoRI属于限制酶．
（4）基因文库是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的受体菌的群体，包括基因组文库和部分基因文库．
故答案为：
（1）乙，甲
（2）a处，磷酸二酯键
绿色硬纸板（DNA分子甲）的碱基序列为：
…ATAGCATGCTATCCATG||AATTCGGCATAC…
…TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG…
红色硬纸纸（DNA分子乙）的碱基序列为：
…TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC…
…AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG…
（3）不能，限制性核酸内切酶
（4）受体菌 基因组 部分基因
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