热门试卷

解：（1）根据题意和图示分析可知：图1基因表达载体中已有目的基因、启动子和标记基因，所以没有标注出来的基本结构是终止子．

（2）图1中启动子是RNA聚合酶酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达即转录过程；氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来．

（3）构建基因表达载体的过程中，必须用相同的限制酶切割（含目的基因的外源DNA分子）和运载体，以产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．

（4）β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，这样可以防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解．

（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，由于β-半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸，所以用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β-半乳糖苷酸被切成多个肽段．

（6）由于一个肽链中至少有一个游离的氨基和一个游离的羧基，在肽链内部的R基中可能也有氨基和羧基，而胰岛素含有A链和B链，所以每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量至少是2个．

故答案为：

（1）终止子   

（2）RNA聚合    作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来

（3）限制酶和DNA连接酶

（4）防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解

（5）β-半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、B链中不含甲硫氨酸

（6）至少2个    两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸的R基中可能还含有游离的氨基

解：（1）基因工程常用的运载体包括质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．

（2）动物细胞培养液中除糖、氨基酸、无机盐等以外还需要加入动物血清等天然成分．当正常细胞分裂生长到表面相互接触时就会停止分裂，这种现象称为接触抑制．

（3）据图2可知，let-7基因影响RAS基因表达的机理是：let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制．

 （4）若RAS基因含1000个碱基对，即2000个碱基，其中一条单链上A和T分别占该链碱基的10%和30%，根据碱基互补配对原则，整个DNA分子中A+T也占40%，则A=T=400个，C=G=600个，那么该基因第三次复制时消耗鸟嘌呤数目=23-1×600=2400个．

故答案为：

（1）λ噬菌体的衍生物       显微注射法

（2）动物血清       接触抑制

（3）RAS蛋白

（4）2400

解：（1）要利用奶牛乳汁生产组织型纤溶酶原激活剂（tPA），在构建的基因表达载体中，应将tPA基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件结合，使目的基因在乳腺组织中特异性表达．

（2）动物细胞培养过程中，需要在培养箱中加入一定量的二氧化碳，目的是维持培养液的pH．

（3）④过程采用了体细胞核移植技术．

（4）从A到B的⑤过程中采用了早期胚胎培养技术．从分子水平上看，若转基因牛的乳汁中含有tPA，则可确定转基因牛培育成功．

故答案为：

（1）乳腺蛋白

（2）维持培养液的pH值

（3）体细胞核移植技术

（4）早期胚胎培养     转基因牛的乳汁中含有tPA

解：（1）由图可知，①过程表示基因表达载体的构建，该过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶；当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．

（2）在基因表达载体中，人生长激素基因的前端必须有启动子，是RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出信使RNA，最终获得生长激素．除此之外构建好的表达载体中还必须有终止子、目的基因和标记基因．

（3）动物细胞培养过程中，培养环境中除须提供O2外还须混入一定量的CO2，CO2的主要作用是维持培养液的PH．为保证被培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，还要在细胞培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染．

（4）在抗虫棉培育过程中，④将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法．⑤过程用到的技术是植物组织培养，该技术的原理是利用植物细胞的全能性，首先经过脱分化形成愈伤组织，在经过再分化过程产生胚状体或丛芽，最终培育出完整的抗虫棉植株．

故答案为：

（1）限制性核酸内切酶    DNA连接酶    显微注射技术

（2）启动子   RNA聚合酶    终止子   目的基因    标记基因

（3）维持培养液的PH   抗生素

（4）农杆菌转换法  植物组织培养   全能性  愈伤组织  再分化

解：（1）切割目的基因时利用了酶的专一性，通常利用的酶是限制酶．

（2）根据题中信息及所学的相关内容，能与-TCGA-互补配对的是-AGCT，能与-TCGA-互补配对的是-ACGT-，则在构建含GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是HindⅢ和PartⅠ．

（3）将目的基因导入动物细胞常用的方法为显微注射法．检测目的基因是否进入受体细胞的方法为DNA分子杂交．

（4）目前还不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体，用动物体细胞克隆的动物，实际上是通过核移植来实现的．通过胚胎移植可将早期胚胎移入猪的子宫中．

（5）采用胚胎分割移植技术，可获得多个后代．也可以将已培育的转基因克隆母猪利用促性腺激素处理，使之超数排卵，从而提高其繁育能力．

故答案为：

（1）限制酶

（2）HindⅢ和PartⅠ

（3）显微注射技术     DNA分子杂交

（4）核移植    胚胎移植

（5）胚胎分割    促性腺激素

解：（1）在获得转基因动物的过程中，最常用的运载体是质粒，限制酶识别双链DNA分子的磷酸二酯键，并切割DNA双链．

（2）小鼠弯曲尾（B）对正常尾（b）显性，将一弯曲尾雄鼠与一正常尾雌鼠交配，F1中弯曲尾雌鼠：正常尾雄鼠=1：1，说明小鼠尾形表现与性别有关，目的基因位于X染色体上，根据亲子代情况，可以推出亲本基因型是XbXb 和XBY子一代雌鼠基因型为XBXb．

故答案为：

（1）质粒   磷酸二酯键

（2）X   XBXb

解答：解：（1）基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等．

（2）动物细胞培养时，需用胰蛋白酶将动物组织块分散成单个细胞．

（3）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素对母畜进行超数排卵处理．

（4）图中④表示核移植过程，成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核．

（5）⑤表示胚胎移植过程，应该选择处于桑椹胚或囊胚期的胚胎进行移植；胚胎移植能够成功进行的生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应．

故答案为：

（1）标记基因  

（2）胰蛋白酶（胶原蛋白酶） 

（3）促性腺激素 

（4）去核   核移殖

（5）胚胎移植    桑椹胚期或囊胚期     受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应

解：（1）纤维细胞E6启动子两侧是限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位点，且用这两种限制酶切割可以去除花椰菜病毒启动子，因此过程①中所用的限制性内切酶是HindⅢ、BamHⅠ；β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）两侧都是限制酶SmaⅠ的切割位点，因此②中所用的限制性内切酶是SmaⅠ．

（2）正、反义基因表达载体总长度相等，NotⅠ酶切位点在目的基因中的位置不一样，因此只用NotⅠ酶切反义基因表达载体可获得两种长度的DNA片段，即5.95+0.05=6.0kb、9.45+3.25=12.7kb．

（3）因为在普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短．而导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长．

故答案为：

（1）HindⅢ、BamHⅠSmaⅠ

（2）2     6.0kb、12.7kb

（3）阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长

解：（1）该mtDNA为环状DNA，用酶M得到3个片段，则有3个切点，用酶N得到2个片段，则有2个切点．用酶N切割得到2个片段的长度分别为7和9，则该mtDNA的长度为16Kb．

（2）M酶和N酶切割能得到相同的黏性末端，可以用DNA连接酶催化连接；结合图1可知，连接后的结果为．当连接后，没有了M酶和N酶所能识别的特定的碱基序列，因此两种酶不能再切割了．

故答案为：

（1）16        3、2

（2）DNA连接酶

否，连接后的序列不是M酶和N酶所能识别的特定的碱基序列