- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中
的______处，DNA连接酶作用于______处．（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法
和______法．
（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记
的______作探针进行分子杂交检测，又要用______方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
正确答案
解：（1）图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的作用部位，也是DNA连接酶的连接部位；b表示氢键，是解旋酶的作用部位．
（2）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法．
（3）要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的目的基因做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
故答案为：
（1）a a
（2）花粉管通道法
（3）耐盐基因（目的基因） 一定浓度盐水浇灌 （移植到盐碱地中）
解析
解：（1）图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的作用部位，也是DNA连接酶的连接部位；b表示氢键，是解旋酶的作用部位．
（2）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法．
（3）要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的目的基因做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
故答案为：
（1）a a
（2）花粉管通道法
（3）耐盐基因（目的基因） 一定浓度盐水浇灌 （移植到盐碱地中）
菊天牛是菊花的主要害虫之一．科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花．下图是获得转基因菊花的技术流程．请据图回答：
（注：卡那霉素抗性基因（KanR为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）
（l）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是______，此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为载体．
（2）如图限制酶M和N切割产生的黏性末端是______，连接它们所需要的基本工具是______．
（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______处理；使其处于感受态．
（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及______的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花．
（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示．请据表回答：
①对照组应饲喂等量的______．
②据表分析，______差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．
正确答案
解：（l）质粒是小型环状DNA分子．
（2）根据图示限制酶M和N的识别序列可知，它们切割产生的黏性末端是GATC（CTAG）．DNA连接酶能将具有相同黏性末端的DNA片段连接形成重组DNA分子．
（3）将目的基因导入受体细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态．
（4）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花．
（5）①实验设计要遵循对照原则和单一变量原则，本实验的目的是探究转基因菊花对菊天牛2龄幼虫的作用，可见自变量为是否加入转基因菊花嫩茎及叶片，因此对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物．
②据表分析，实验组与对照组死亡率差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．
故答案为：
（1）（小型环状）DNA
（2）GATC （CTAG） DNA连接酶
（3）Ca2+
（4）卡那霉素
（5）①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物 ②实验组与对照组死亡率
解析
解：（l）质粒是小型环状DNA分子．
（2）根据图示限制酶M和N的识别序列可知，它们切割产生的黏性末端是GATC（CTAG）．DNA连接酶能将具有相同黏性末端的DNA片段连接形成重组DNA分子．
（3）将目的基因导入受体细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态．
（4）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花．
（5）①实验设计要遵循对照原则和单一变量原则，本实验的目的是探究转基因菊花对菊天牛2龄幼虫的作用，可见自变量为是否加入转基因菊花嫩茎及叶片，因此对照组应饲喂等量的非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物．
②据表分析，实验组与对照组死亡率差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用．
故答案为：
（1）（小型环状）DNA
（2）GATC （CTAG） DNA连接酶
（3）Ca2+
（4）卡那霉素
（5）①非转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物 ②实验组与对照组死亡率
（2015春•湖北校级期末）应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品．请据图回答下列问题：
（1）抗虫基因之所以能与Ti质粒进行重组并发挥其功能，是因为二者的空间结构都是______．人的生长激素基因能在牛的体内成功表达是因为______．
（2）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是______细胞，Ⅲ代表的细胞具有______的特点．
（3）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是______，⑤过程采用的技术是______．
正确答案
解：（1）不同生物的基因能够连接在一起的原因是不同生物的基因都具有相同的空间结构和化学组成；一种生物的基因能在另一种生物体内表达的原因是生物界共用一套遗传密码子．
（2）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞
（3）愈伤组织细胞是经过脱分化过程形成的，与叶肉细胞相比较，其全能性高；⑤过程中将转基因细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）规则的双螺旋结构 共用一套遗传密码
（2）效应B 既能无限增殖又能产生特定抗体
（3）全能性高 植物组织培养
解析
解：（1）不同生物的基因能够连接在一起的原因是不同生物的基因都具有相同的空间结构和化学组成；一种生物的基因能在另一种生物体内表达的原因是生物界共用一套遗传密码子．
（2）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞
（3）愈伤组织细胞是经过脱分化过程形成的，与叶肉细胞相比较，其全能性高；⑤过程中将转基因细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）规则的双螺旋结构 共用一套遗传密码
（2）效应B 既能无限增殖又能产生特定抗体
（3）全能性高 植物组织培养
由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）．
（1）图甲中，过程①需要的酶有______．为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以______作为唯一碳源．②、③过程需要重复几次，目的是______．
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的接种方法是______；推测该同学接种时可能的操作失误是______．
（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种______菌的发酵罐需要先排气，其原因是______．
（4）若要对培养液中的酵母菌进行计数，下表是取0.1ml菌液进行涂布时，不同稀释倍数下统计的平板培养基上的菌落数：
根据表中数据估算培养液中酵母菌的浓度约为______个/ml
正确答案
解：（1）图甲过程①表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌．
（2）由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的．
（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气．
（4）根据表中数据可知，稀释倍数为103和105时，各组数据之间的误差较大，而稀释倍数为104时，各组数据比较接近，同时用稀释涂布平板法计数时，要选用菌落数在30-300间的平板培养基，因此可以根据稀释倍数为104时的数据估算培养液中酵母菌的浓度，即
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 淀粉 进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法 涂布不均匀
（3）工程酵母 工程菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快
（4）1.29×107
解析
解：（1）图甲过程①表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌．
（2）由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的．
（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气．
（4）根据表中数据可知，稀释倍数为103和105时，各组数据之间的误差较大，而稀释倍数为104时，各组数据比较接近，同时用稀释涂布平板法计数时，要选用菌落数在30-300间的平板培养基，因此可以根据稀释倍数为104时的数据估算培养液中酵母菌的浓度，即
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 淀粉 进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法 涂布不均匀
（3）工程酵母 工程菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快
（4）1.29×107
干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取0.5μg，所以价格昂贵．现在美国加利福尼亚州的基因公司用如图的方式生产干扰素．试分析原理和优点．
（1）从人的淋巴细胞中取出干扰素基因，此基因在基因工程中称为______．此基因与细菌的质粒相结合要依靠______，其作用部位是磷酸二酯键，然后将目的基因移植到酵母菌体内，酵母菌在基因工程中叫______．
（2）科学家在培养转基因植物时，常用土壤农杆菌中的______作运载体，它具备运载体的条件是：
①______；
②______；
③______．
正确答案
解：（1）在基因工程中，干扰素基因称为目的基因．基因的运输工具--运载体将要将一个外源基因，即目的基因移植到目的细胞这种细胞叫受体细胞，目的基因与细菌的质粒相结合要依靠分子缝合针--DNA连接酶，其作用部位是磷酸二酯键．
（2）基因工程中常用细菌的质粒作运载体，是因为质粒具有：
①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；
②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；
③具有某些标记基因，便于进行筛选．
故答案为：
（1）目的基因 DNA连接 受细胞
（2）质粒
①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存
②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
③具有某些标记基因，便于进行筛选
解析
解：（1）在基因工程中，干扰素基因称为目的基因．基因的运输工具--运载体将要将一个外源基因，即目的基因移植到目的细胞这种细胞叫受体细胞，目的基因与细菌的质粒相结合要依靠分子缝合针--DNA连接酶，其作用部位是磷酸二酯键．
（2）基因工程中常用细菌的质粒作运载体，是因为质粒具有：
①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；
②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；
③具有某些标记基因，便于进行筛选．
故答案为：
（1）目的基因 DNA连接 受细胞
（2）质粒
①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存
②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接
③具有某些标记基因，便于进行筛选
二倍体哺乳动物体细胞不易进行基因操作和筛选，而生殖细胞已高度分化，不能在体外扩增培养．我国科学家建立了小鼠哺乳动物单倍体胚胎干细胞系，为基因操作找到了新的动物模型．过程如图所示，请据图回答：
（1）图中③过程通常采用的方法是______，启动子的作用是______．
（2）单倍体胚胎干细胞取自囊胚的______，和生殖细胞相比，单倍体胚胎干细胞在体外培养的条件下，可以______．
（3）在①过程中，科学家采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎，一是将受精后获得的合子胚胎的雌原核去除，另一种方法可能是______．
（4）④过程采用的技术手段是______，由此可见，单倍体胚胎干细胞能够代替精子，使卵细胞成功“受精”，支撑小鼠胚胎的全程发育．
（5）⑥过程用到的技术是______，早期胚胎能够在受体内存活的主要生理学基础是______．
（6）为增加后代的数量可以通过何种技术对胚胎处理______？此种方式属于______（有性生殖、无性生殖）范畴．
正确答案
解：（1）图中③过程表示将目的基因导入动物细胞，通常用的方法是显微注射法，启动子的作用是驱动基因转录出mRNA．
（2）由图可知细胞团发育为胎儿的各种组织，滋养层发育为胎膜和胎盘，故单倍体胚胎干细胞取自囊胚的内细胞团，和生殖细胞相比，单倍体胚胎干细胞在体外培养的条件下，可以增殖而不分化．
（3）在①过程中，科学家采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎，一是将受精后获得的合子胚胎的雌原核去除，由于细胞核发育为精子头的主要部分，所以另一种方法可能是向去核的卵母细胞中注射成熟精子的头部．
（4）④过程表示胚胎干细胞和卵母细胞融合形成重组细胞，该过程采用的技术手段是动物细胞融合技术．
（5）⑥过程表示将早期胚胎移植到转基因动物体内发育，因此用到的技术是胚胎移植，早期胚胎能够在受体内存活的主要生理学基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能．
（6）胚胎分割可以增加胚胎的数量．属于无性生殖的范畴．
故答案为：
（1）显微注射法 驱动基因转录出mRNA
（2）内细胞团 增殖而不分化
（3）向去核的卵母细胞中注射成熟精子的头部
（4）细胞融合
（5）胚胎移植 不发生免疫排斥
（6）胚胎分割 无性生殖
解析
解：（1）图中③过程表示将目的基因导入动物细胞，通常用的方法是显微注射法，启动子的作用是驱动基因转录出mRNA．
（2）由图可知细胞团发育为胎儿的各种组织，滋养层发育为胎膜和胎盘，故单倍体胚胎干细胞取自囊胚的内细胞团，和生殖细胞相比，单倍体胚胎干细胞在体外培养的条件下，可以增殖而不分化．
（3）在①过程中，科学家采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎，一是将受精后获得的合子胚胎的雌原核去除，由于细胞核发育为精子头的主要部分，所以另一种方法可能是向去核的卵母细胞中注射成熟精子的头部．
（4）④过程表示胚胎干细胞和卵母细胞融合形成重组细胞，该过程采用的技术手段是动物细胞融合技术．
（5）⑥过程表示将早期胚胎移植到转基因动物体内发育，因此用到的技术是胚胎移植，早期胚胎能够在受体内存活的主要生理学基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能．
（6）胚胎分割可以增加胚胎的数量．属于无性生殖的范畴．
故答案为：
（1）显微注射法 驱动基因转录出mRNA
（2）内细胞团 增殖而不分化
（3）向去核的卵母细胞中注射成熟精子的头部
（4）细胞融合
（5）胚胎移植 不发生免疫排斥
（6）胚胎分割 无性生殖
（2015秋•宜春校级月考）动物乳腺生物反应器是一项利用转基因动物的乳腺代替传统的生物发酵，进行大规模生产可供治疗人类疾病或用于保健的活性蛋白质的现代生物技术．目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品．大致过程如图所示：
（1）在过程③中需要用到的工具酶有______．要使人的药用蛋白基因在奶牛乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、______、标记基因等部分．
（2）要实现超数排卵，应在性成熟雌牛发情周期的某一阶段用______处理．通过①采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是______．
（3）将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过______处理的受体母牛子宫内．因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全搞清楚，所以，在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加______．
（4）若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割移植技术．在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意将______均等分割．胚胎分割移植后发育成小牛，这些小牛的基因型______（填“相同”或“不同”）．
正确答案
解：（1）在过程③是构建基因表达载体，此过程中需要用到的工具酶限制性核酸内切酶、DNA连接酶．完整的基因表达载体要包括目的基因、乳腺蛋白基因的启动子和终止子、标记基因等部分．
（2）性成熟雌牛发情周期的某一阶段用促性腺激素处理，让其超数排卵，．在．通过①采集的精子因为没有获能，所以不能直接使成熟的卵子受精．
（3）供体和受体是同一物种．并用激素进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同．将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过同期发情处理的受体母牛子宫内．在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加血清．
（4）胚胎进行分割时，应注意将内细胞团均等分割，以防影响胚胎发育．胚胎分割移植后发育成小牛，来自同一个受精卵，因此这些小牛的基因型相同．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 启动子、终止子
（2）促性腺激素 没有获能
（3）同期发情 血清
（4）内细胞团 相同
解析
解：（1）在过程③是构建基因表达载体，此过程中需要用到的工具酶限制性核酸内切酶、DNA连接酶．完整的基因表达载体要包括目的基因、乳腺蛋白基因的启动子和终止子、标记基因等部分．
（2）性成熟雌牛发情周期的某一阶段用促性腺激素处理，让其超数排卵，．在．通过①采集的精子因为没有获能，所以不能直接使成熟的卵子受精．
（3）供体和受体是同一物种．并用激素进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同．将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过同期发情处理的受体母牛子宫内．在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加血清．
（4）胚胎进行分割时，应注意将内细胞团均等分割，以防影响胚胎发育．胚胎分割移植后发育成小牛，来自同一个受精卵，因此这些小牛的基因型相同．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 启动子、终止子
（2）促性腺激素 没有获能
（3）同期发情 血清
（4）内细胞团 相同
在对番茄的研究中发现，害虫损伤番茄叶片后，叶上的细胞壁能释放出一种类激素因子，这种物质能通过细胞组织扩散到茎和其他叶片上，启动蛋白质酶抑制剂基因后，开始高效合成蛋白酶抑制剂，并在茎叶中迅速积累，以对付害虫的再次侵袭．蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，因此害虫取食后，就会因无法消化食物而死亡．人们尝试着将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米，让玉米获得与番茄相似的抗虫性状，以对付异常猖獗的玉米螟．
（1）将番茄的蛋白酶抑制剂基因截取及连接到玉米的DNA中用到的酶分别是______和______．
（2）若检测该蛋白酶抑制剂基因是否成功转入，应采用______法，若检测蛋白酶抑制剂基因是否表达，应采用______技术．
（3）将番茄的蛋白酶抑制剂基因转入玉米细胞时，最常采用的方法是______，除此之外，还有______和花粉管通道法等．
（4）能抗玉米螟的抗虫玉米生态效益显著，有人认为抗虫玉米就是无虫玉米，不必防治害虫．你是否赞成这种说法？说明理由．______；______．
正确答案
解：（1）基因工程中，构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需要用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组DNA．
（2）检测目的基因受否成功导入受体细胞常采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达，应采用抗原-抗体特异性反应技术．
（3）将目的基因导入植物细胞时，最常采用的方法是农杆菌转化法，除此之外，还有基因枪法和花粉管通道法等．
（4）转基因玉米能抵抗玉米螟，但并不能抵抗所有的害虫，因此不赞成该说法．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶 DNA连接酶
（2）DNA分子杂交 抗原-抗体特异性反应
（3）农杆菌转化法 基因枪法
（4）不赞成 转基因玉米能抵抗玉米螟，但并不能抵抗所有的害虫
解析
解：（1）基因工程中，构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需要用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组DNA．
（2）检测目的基因受否成功导入受体细胞常采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达，应采用抗原-抗体特异性反应技术．
（3）将目的基因导入植物细胞时，最常采用的方法是农杆菌转化法，除此之外，还有基因枪法和花粉管通道法等．
（4）转基因玉米能抵抗玉米螟，但并不能抵抗所有的害虫，因此不赞成该说法．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶 DNA连接酶
（2）DNA分子杂交 抗原-抗体特异性反应
（3）农杆菌转化法 基因枪法
（4）不赞成 转基因玉米能抵抗玉米螟，但并不能抵抗所有的害虫
补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8．某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列（图2），大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列（图1），由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物．HindⅢ、EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，图3中箭头所指为三种限制酶的切点．
（1）要能筛选出转基因菌种，应选用的限制性内切酶是______，选择的依据是切断______序列，为重组DNA分子的筛选提供______，但又不破坏______和______基因．
（2）限制酶作用于DNA的部位是______
A．氢键 B．糖苷键 C．磷酸二酯键 D．肽键
（3）控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为______．
（4）将经转基因技术处理过的质粒导入经______处理的过的处于______态的大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的______，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有______，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物．非蓝色菌落______（是/否）一定成功转入目的基因．
正确答案
解：（1）当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物，所以要破坏质粒中的α片段序列（含两个酶切位点：HindⅢ、EcoRI），利用X-gal底物来检测目的基因是否转入大肠杆菌．而α片段序列上含有HindⅢ、EcoRI两种限制性内切酶的切割位点，但HindⅢ位于目的基因上，所以不能用该酶切割，因此应选用限制性内切酶EcoRI切割外源DNA和质粒．
（2）限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯键，使DNA分子断裂．
（3）通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录．
（4）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用CaCl2处理大肠杆菌，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物．非蓝色菌落就是成功导入重组质粒．
故答案为：
（1）EcoRI α片段 标记 目的基因 抗性
（2）C
（3）逆（反）转录
（4）CaCl2 感受 粘性末端 完整的α、ω片段序列 是
解析
解：（1）当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物，所以要破坏质粒中的α片段序列（含两个酶切位点：HindⅢ、EcoRI），利用X-gal底物来检测目的基因是否转入大肠杆菌．而α片段序列上含有HindⅢ、EcoRI两种限制性内切酶的切割位点，但HindⅢ位于目的基因上，所以不能用该酶切割，因此应选用限制性内切酶EcoRI切割外源DNA和质粒．
（2）限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯键，使DNA分子断裂．
（3）通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录．
（4）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用CaCl2处理大肠杆菌，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物．非蓝色菌落就是成功导入重组质粒．
故答案为：
（1）EcoRI α片段 标记 目的基因 抗性
（2）C
（3）逆（反）转录
（4）CaCl2 感受 粘性末端 完整的α、ω片段序列 是
【生物一现代生物科技专题】
科学家发现人的第5号染色体中的PITXl基因能遏制端粒酶发挥作用，将该基因移植到实验鼠的癌细胞中，能使得癌细胞无法增殖．请分析回答问题：
（1）在上述转基因过程中用到的工具有______，PITXI基因称为______．
（2）将该基因移植到实验鼠的癌细胞的过程中，其操作的核心步骤为______，标记基因的作用是______．
（3）在配制动物细胞培养液时，通常加入______等天然成分，在培养癌细胞的过程中，______ （会、不会）出现接触抑制．
（4）用鼠的骨髓瘤细胞与人的某种浆细胞融合，得到的杂交瘤细胞既能______，又能______．
正确答案
解：（1）基因工程中用到的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体，题中PITXI基因称为目的基因．
（2）基因工程操作步骤中的核心步骤为基因表达载体的构建，基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、启动子、终止子，其中标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，将含有目的基因的细胞筛选出来．
（3）在配制动物细胞培养液时，通常加入血清等天然成分．由于癌细胞具有无限增殖的特点，已经失去接触抑制的特性，在培养癌细胞的过程中，不会出现接触抑制．
（4）用鼠的骨髓瘤细胞与人的某种浆细胞融合，得到的杂交瘤细胞结合了骨髓瘤细胞和浆细胞的遗传特点，即既能无限增，又能能产生特异性抗体．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶、运载体 目的基因
（2）基因表达载体的构建 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，将含有目的基因的细胞筛选出来
（3）血清（血浆） 不会
（4）无限增殖 能产生特异性抗体
解析
解：（1）基因工程中用到的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体，题中PITXI基因称为目的基因．
（2）基因工程操作步骤中的核心步骤为基因表达载体的构建，基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、启动子、终止子，其中标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，将含有目的基因的细胞筛选出来．
（3）在配制动物细胞培养液时，通常加入血清等天然成分．由于癌细胞具有无限增殖的特点，已经失去接触抑制的特性，在培养癌细胞的过程中，不会出现接触抑制．
（4）用鼠的骨髓瘤细胞与人的某种浆细胞融合，得到的杂交瘤细胞结合了骨髓瘤细胞和浆细胞的遗传特点，即既能无限增，又能能产生特异性抗体．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶、运载体 目的基因
（2）基因表达载体的构建 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，将含有目的基因的细胞筛选出来
（3）血清（血浆） 不会
（4）无限增殖 能产生特异性抗体
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