- 土壤中分解尿素的微生物或细菌的分离与计数
- 共916题
请分析回答下列有关生物技术实践的问题：
（1）微生物接种的方法，最常用的是______和______法，后者是将菌液进行一系列的______，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养的方法．在固体培养基上由单个细胞繁殖而来的形态可见的子细胞群体称为______．
（2）对月季进行组织培养时，适宜花药培养的时期是______期；为确定花粉是否处于该时期，镜检时最常用的染色方法是______．
（3）测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与______发生重氮化反应后，与N-l一萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料．
（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的是______；得到的萃取液需要用______方法进行浓缩．
正确答案
解：（1）微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．后者则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，然后进行恒温培养．菌落是在固体培养基上由单个细胞繁殖而来的形态可见的子细胞群体．
（2）花药组织培养的取材应通过镜检选用单核靠边期的花粉，成功率最高．镜检时最常用的染色方法是醋酸洋红法．
（3）在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，据此可以使用比色法测定亚硝酸盐含量．
（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的是使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度．浓缩时需要将得到的萃取液需要用蒸馏方法除去萃取剂．
故答案为：
（1）平板划线法 稀释涂布 梯度稀释 菌落
（2）单核 醋酸洋红法
（3）对氨基苯磺酸
（4）使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度 蒸馏
解析
解：（1）微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．后者则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，然后进行恒温培养．菌落是在固体培养基上由单个细胞繁殖而来的形态可见的子细胞群体．
（2）花药组织培养的取材应通过镜检选用单核靠边期的花粉，成功率最高．镜检时最常用的染色方法是醋酸洋红法．
（3）在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，据此可以使用比色法测定亚硝酸盐含量．
（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的是使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度．浓缩时需要将得到的萃取液需要用蒸馏方法除去萃取剂．
故答案为：
（1）平板划线法 稀释涂布 梯度稀释 菌落
（2）单核 醋酸洋红法
（3）对氨基苯磺酸
（4）使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度 蒸馏
下表中甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，回答下列问题：
（1）从作用上看，甲培养基属于______，其中能提供氮源的物质是______．为了进一步鉴定分离得到的菌种确实是能分解尿素的细菌，可在另一个与上述成分相同的培养基中加入______指示剂来判断．
（2）为了判断甲培养基是否具有筛选作用，应在牛肉膏蛋白胨培养基上接种等量的相应浓度的土壤稀释液，相同且适宜条件下培养．如果______，则证明该培养基具有筛选作用．
（3）如果将B配制成固体培养基，则在培养基上长出的菌落______（是/否）都能分解纤维素，理由是______．该培养基的主要作用是______．
（4）为了计数微生物的数量，接种时应采用______法，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为______．
正确答案
解：（1）题干指出甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基，其中尿素是作为唯一氮源，能生长的菌落说明能利用尿素中的氮源，所以甲从用途上属于选择培养基．其中含氮物质是尿素．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可以选择和鉴别尿素分解菌．
（2）牛肉膏蛋白胨培养基属于基础培养基，如果上述培养基上长出的菌落数量明显少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落，说明有的微生物适合在牛肉膏蛋白胨培养基上生长，不适合在甲培养基上生长，所以证明该培养基具有筛选作用．
（3）在B配制的固体培养基上生长的菌落不一定都能分解纤维素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源等．纤维素分解菌经过B培养基培养后，可以大量繁殖．
（4）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数．1毫升原土壤样液中上述微生物数量=（180+155+176+129）÷4×106×10=1.6×109个．
故答案为：（1）选择培养基 尿素 酚红
（2）上述培养基上长出的菌落数量明显少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落
（3）否 因培养基中水解酪素等能提供碳源，纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源（合理即得分） 能增加纤维素分解菌的浓度，确保从样品中分离到所需的微生物（或选择培养等）
（4）稀释涂布平板 1.6×109个
解析
解：（1）题干指出甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基，其中尿素是作为唯一氮源，能生长的菌落说明能利用尿素中的氮源，所以甲从用途上属于选择培养基．其中含氮物质是尿素．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可以选择和鉴别尿素分解菌．
（2）牛肉膏蛋白胨培养基属于基础培养基，如果上述培养基上长出的菌落数量明显少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落，说明有的微生物适合在牛肉膏蛋白胨培养基上生长，不适合在甲培养基上生长，所以证明该培养基具有筛选作用．
（3）在B配制的固体培养基上生长的菌落不一定都能分解纤维素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源等．纤维素分解菌经过B培养基培养后，可以大量繁殖．
（4）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数．1毫升原土壤样液中上述微生物数量=（180+155+176+129）÷4×106×10=1.6×109个．
故答案为：（1）选择培养基 尿素 酚红
（2）上述培养基上长出的菌落数量明显少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落
（3）否 因培养基中水解酪素等能提供碳源，纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源（合理即得分） 能增加纤维素分解菌的浓度，确保从样品中分离到所需的微生物（或选择培养等）
（4）稀释涂布平板 1.6×109个
分析以下关于科学探究实验的资料，回答问题
Ⅰ、下面是最早发现青霉素的科学家弗莱明所进行的探索过程．
观察及对问题的认识：细菌培养基中，偶然生出青霉菌，在其周围细菌没有生长．为什么出现这种现象？
假设：…
进行实验：把青霉菌放在培养液中进行培养，然后观察使用这种培养液对细菌生长的影响．
结果：这种培养液阻止了细菌的生长和繁殖．
结论：…
弗莱明在持续的研究中分离出了这一物质，分析出它的特征，并将它命名为青霉素．
说明：①在实验室里培养细菌常用琼脂配制成凝胶，平铺在培养皿里作为培养基（图1A）．
②某细菌需要添加特殊培养液才能正常生长（图1B）．
请回答：
（1）这一实验的假设为______．
（2）为了证明青霉素确实是由青霉菌产生的而不是培养液和培养基中的其他物质产生的，则应设计对照实验，对照试验为______．
（3）若对照组实验结果为______，则充分证明青霉菌确实能产生可阻止细菌繁殖的物质．
Ⅱ、在医学实践中发现，有些细菌对青霉素产生了抗药性．为了研究细菌对青霉素抗药性形成的机理，有人设计了如下实验方案：
步骤1 取培养皿A若干（A1、A2、A3…），加入普通细菌培养基；取培养皿B若干（B1、B2、B3…），加入含青霉素的细菌培养基．
步骤2 将适量细菌培养液涂抹在培养皿A1的培养基表面，放在适宜的条件下培养一段时间，培养基的表面会出现一些细菌菌落．
步骤3 用灭菌后的丝绒包上棉花制成的一枚“印章”，在A1上轻轻盖一下，再在B1上轻轻盖一下，这样A1中的细胞就按一定的位置准确的“复制”到了B1之中．将B1培养一段时间后，B1中一定部位出现了少量菌落．
步骤4 根据B1中菌落出现的方位，将A1中对应位置的菌落取出，均匀涂抹在A2表面，培养一段时间后，培养基表面又会出现许多菌落．
反复重复步骤3、4，在B2、B3…中保留下来的菌落越来越多．直到最后，所有“复制”到B中的菌落全都保留下来，都具有对青霉素的抗药性．
（4）普通培养基中的营养要素物质有______、无机盐和水．
（5）一般情况下配置培养基的步骤是______
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
（6）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地______，防止______．
灭菌的方法一般为高压蒸汽灭菌，具体条件为______．
（7）细菌抗药性的产生是细胞出现______的结果．根据现代进化理论，青霉素在细菌抗药性形成过程中起______的作用．
（8）如果B1中没有菌落保留下来，实验就无法进行下去．若要使实验进行下去，可以采用的方法有______．
正确答案
解：Ⅰ（1）根据实验的上下文可知，本实验作出的假设是青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质．
（2）为了证明青霉素确实是由青霉菌产生的而不是培养液和培养基中的其他物质产生的，则应设计对照实验，对照试验为对照组的培养液和培养基中均不加入青霉菌，观察细菌的生长繁殖．
（3）若对照组实验结果为细菌正常生长，则充分证明青霉菌确实能产生可阻止细菌繁殖的物质．
Ⅱ（4））普通培养基中的营养要素物质有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水．
（5）一般情况下配置培养基的步骤是；计算-称量-溶化-灭菌-倒平板，所以选C．
（6）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地搅拌，防止琼脂糊底引起烧杯破裂．灭菌的方法一般为高压蒸汽灭菌，具体条件为1.05kg/cm2、121℃、15～30min．
（7）细菌抗药性的产生是细胞出现基因突变的结果．根据现代进化理论，青霉素在细菌抗药性形成过程中起 选择作用．
（8）如果B1中没有菌落保留下来，实验就无法进行下去．若要使实验进行下去，可以采用的方法有用适量紫外线照射一段时间，引起基因突变以便产生对青霉素有抗药性的菌株．
故答案应为：
（1）青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质
（2）对照组的培养液和培养基中均不加入青霉菌，观察细菌的生长繁殖
（3）细菌正常生长
（4）碳源、氮源、生长因子
（5）C
（6）搅拌 琼脂糊底引起烧杯破裂 1.05kg/cm2、121℃、15～30min
（7）基因突变 选择
（8）用适量紫外线照射一段时间（其它引起基因突变的方法也行）
解析
解：Ⅰ（1）根据实验的上下文可知，本实验作出的假设是青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质．
（2）为了证明青霉素确实是由青霉菌产生的而不是培养液和培养基中的其他物质产生的，则应设计对照实验，对照试验为对照组的培养液和培养基中均不加入青霉菌，观察细菌的生长繁殖．
（3）若对照组实验结果为细菌正常生长，则充分证明青霉菌确实能产生可阻止细菌繁殖的物质．
Ⅱ（4））普通培养基中的营养要素物质有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水．
（5）一般情况下配置培养基的步骤是；计算-称量-溶化-灭菌-倒平板，所以选C．
（6）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地搅拌，防止琼脂糊底引起烧杯破裂．灭菌的方法一般为高压蒸汽灭菌，具体条件为1.05kg/cm2、121℃、15～30min．
（7）细菌抗药性的产生是细胞出现基因突变的结果．根据现代进化理论，青霉素在细菌抗药性形成过程中起 选择作用．
（8）如果B1中没有菌落保留下来，实验就无法进行下去．若要使实验进行下去，可以采用的方法有用适量紫外线照射一段时间，引起基因突变以便产生对青霉素有抗药性的菌株．
故答案应为：
（1）青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质
（2）对照组的培养液和培养基中均不加入青霉菌，观察细菌的生长繁殖
（3）细菌正常生长
（4）碳源、氮源、生长因子
（5）C
（6）搅拌 琼脂糊底引起烧杯破裂 1.05kg/cm2、121℃、15～30min
（7）基因突变 选择
（8）用适量紫外线照射一段时间（其它引起基因突变的方法也行）
某种链球菌能引起人的咽喉感染，研究人员欲测试一种新抗生素（P）对该种链球菌的杀菌效果．将此链球菌分别接种在三个培养皿中，在2号培养皿中放入一片浸过抗生素（P）的滤纸圆片，在3号培养皿中放入没有浸抗生素的滤纸圆片，如图所示．
（1）三个培养皿中，实验项是______，对照项是______，理由是______．
（2）培养皿3中的小圆片在放置前需做处理，具体步骤是：______．
（3）三只培养皿都放在37℃的温度条件下培养24小时，预测2号培养皿的结果是______．
（4）如果要探究某种植物叶片中是否含有抑制细菌生长的物质，请简述实验步骤、可能的结果及相应的结论．
实验步骤：______．
可能的实验结果与结论：______．
正确答案
解：（1）由图可知，本实验的自变量为有无抗生素，故实验组为培养皿2，对照组为1和3．因为本实验的实验目的是研究抗生素（P）对链球菌的杀菌效果，故培养皿2为实验项．培养皿1与培养皿2对照，用于排除除抗生素外的其他因素对实验的影响；培养皿3与培养皿2对照，用于排除滤纸圆片对实验的影响
（2）培养皿3上放置的是没有浸抗生素的滤纸圆片，由于实验室培养的关键在于防止杂菌污染，故在放置前时应将圆片高温灭菌处理，浸在无菌水中，不添加任何抗生素，与培养皿2做对照．
（3）三只培养皿都放在37℃的温度条件下培养24小时，2号培养皿可能的结果有培养皿中的链球菌持续生长或滤纸圆片周围的菌落不明显，外围有菌落或者培养皿中没有菌落出现，前者说明抗生素（P）对链球菌生长没有影响，后者说明抗生素（P）对链球菌有抑菌或杀菌效果．
（4）要探究某种植物叶片中是否含有抑制细菌生长的物质，自变量为有无叶子浸出液，因变量为是否有菌落产生，故实验步骤应为，第一步先制备叶子浸出液；然后配制固体培养基两组，A组加入叶子浸出液，B组不加或加入等量蒸馏水，两者形成对照，最后将A、B两组培养皿置于空气中一段时间后观察结果；可能的实验结果有若A、B培养基中均布满细菌，说明叶子中不含有抗菌的物质；若A组培养基上很少有菌落，B组培养基上布满菌落，说明叶子中含有抗菌的物质．
故答案为：
（1）培养皿2 培养皿1和3 实验目的是研究抗生素（P）对链球菌的杀菌效果，故培养皿2为实验项．培养皿1与培养皿2对照，用于排除除抗生素外的其他因素对实验的影响；培养皿3与培养皿2对照，用于排除滤纸圆片对实验的影响
（2）将圆片高温灭菌处理，浸在无菌水中，不添加任何抗生素
（3）培养皿中的链球菌持续生长，抗生素（P）对链球菌生长没有影响；滤纸圆片周围的菌落不明显，外围有菌落或者培养皿中没有菌落出现，说明抗生素（P）对链球菌有抑菌或杀菌效果．
（4）实验步骤：①制备叶子浸出液
②配制固体培养基两组，A组加入叶子浸出液，B组不加或加入等量蒸馏水．
③将A、B两组培养皿置于空气中一段时间后观察结果．
可能的实验结果及相应的结论：①A、B培养基中均布满细菌，说明叶子中不含有抗菌的物质；②A组培养基上很少有菌落，B组培养基上布满菌落，说明叶子中含有抗菌的物质．
解析
解：（1）由图可知，本实验的自变量为有无抗生素，故实验组为培养皿2，对照组为1和3．因为本实验的实验目的是研究抗生素（P）对链球菌的杀菌效果，故培养皿2为实验项．培养皿1与培养皿2对照，用于排除除抗生素外的其他因素对实验的影响；培养皿3与培养皿2对照，用于排除滤纸圆片对实验的影响
（2）培养皿3上放置的是没有浸抗生素的滤纸圆片，由于实验室培养的关键在于防止杂菌污染，故在放置前时应将圆片高温灭菌处理，浸在无菌水中，不添加任何抗生素，与培养皿2做对照．
（3）三只培养皿都放在37℃的温度条件下培养24小时，2号培养皿可能的结果有培养皿中的链球菌持续生长或滤纸圆片周围的菌落不明显，外围有菌落或者培养皿中没有菌落出现，前者说明抗生素（P）对链球菌生长没有影响，后者说明抗生素（P）对链球菌有抑菌或杀菌效果．
（4）要探究某种植物叶片中是否含有抑制细菌生长的物质，自变量为有无叶子浸出液，因变量为是否有菌落产生，故实验步骤应为，第一步先制备叶子浸出液；然后配制固体培养基两组，A组加入叶子浸出液，B组不加或加入等量蒸馏水，两者形成对照，最后将A、B两组培养皿置于空气中一段时间后观察结果；可能的实验结果有若A、B培养基中均布满细菌，说明叶子中不含有抗菌的物质；若A组培养基上很少有菌落，B组培养基上布满菌落，说明叶子中含有抗菌的物质．
故答案为：
（1）培养皿2 培养皿1和3 实验目的是研究抗生素（P）对链球菌的杀菌效果，故培养皿2为实验项．培养皿1与培养皿2对照，用于排除除抗生素外的其他因素对实验的影响；培养皿3与培养皿2对照，用于排除滤纸圆片对实验的影响
（2）将圆片高温灭菌处理，浸在无菌水中，不添加任何抗生素
（3）培养皿中的链球菌持续生长，抗生素（P）对链球菌生长没有影响；滤纸圆片周围的菌落不明显，外围有菌落或者培养皿中没有菌落出现，说明抗生素（P）对链球菌有抑菌或杀菌效果．
（4）实验步骤：①制备叶子浸出液
②配制固体培养基两组，A组加入叶子浸出液，B组不加或加入等量蒸馏水．
③将A、B两组培养皿置于空气中一段时间后观察结果．
可能的实验结果及相应的结论：①A、B培养基中均布满细菌，说明叶子中不含有抗菌的物质；②A组培养基上很少有菌落，B组培养基上布满菌落，说明叶子中含有抗菌的物质．
微生物培养与分离技术是生物学中重要的实验技术．根据有关微生物的知识，分析回答问题：
（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和A：______、B：______等过程，上述过程中需要在超净工作台上操作的是______．
（2）纯化菌种时为得到单菌落，常采用的接种方法是平板划线法和D：______法，其中需用接种环进行操作的是______．
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应以尿素作为唯一的______，培养基中加入指示剂______培养后，若变红以鉴定其中含有所需细菌．若筛选纤维素分解菌，在选择培养后须进行E：______和F：______过程，一般通过观察______的有无挑选出所需菌种．
正确答案
解：（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和灭菌、倒平板等过程，上述过程中需要在超净工作台上操作的是倒平板，防止杂菌的污染．
（2）纯化菌种时为得到单菌落，常采用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中需用接种环进行操作的是平板划线法，即通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面．
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应以尿素作为唯一的氮源，培养基中加入酚红指示剂培养，由于尿素分解菌能将尿素分解为氨，使pH升高．因此，若出现变红现象，说明其中含有所需细菌．若筛选纤维素分解菌，在选择培养后须进行梯度稀释和涂布平板过程，一般通过观察透明圈的有无挑选出所需菌种．
故答案为：
（1）灭菌 倒平板 倒平板
（2）稀释涂布平板 平板划线法
（3）氮源 酚红 梯度稀释 涂布平板 透明圈
解析
解：（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和灭菌、倒平板等过程，上述过程中需要在超净工作台上操作的是倒平板，防止杂菌的污染．
（2）纯化菌种时为得到单菌落，常采用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中需用接种环进行操作的是平板划线法，即通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面．
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应以尿素作为唯一的氮源，培养基中加入酚红指示剂培养，由于尿素分解菌能将尿素分解为氨，使pH升高．因此，若出现变红现象，说明其中含有所需细菌．若筛选纤维素分解菌，在选择培养后须进行梯度稀释和涂布平板过程，一般通过观察透明圈的有无挑选出所需菌种．
故答案为：
（1）灭菌 倒平板 倒平板
（2）稀释涂布平板 平板划线法
（3）氮源 酚红 梯度稀释 涂布平板 透明圈
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