- 多聚酶链式反应扩增DNA片段
- 共164题
重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法．该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景．如图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程．其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别PCR，获得有重叠链的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因．结合所学知识，分析下列问题．
（1）引物中G+C的含量影响着引物与模板 DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性______．
（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA 的过程中，必须将引物l、2和引物3、4 置于不同反应系统中，这是因为______．
（3）引物l、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生______种双链DNA分子．
（4）在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过______次复制．
（5）若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：______、______、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因．
正确答案
解：（1）由于一个C-C之间有三个氢键，而一个A-T之间有两个氢键，所以引物中C+C含量越高，引物与模板DNA的结合就越稳定．
（2）从图中可以看出，引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对，所以如果将引物2和3放在一个反应系统中，则会引起引物2和3 的失效．
（3）两个反应系统中各自形成两种DNA分子，但由于引物1和引物4形成两个与原DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA属于同一种DNA，故总共形成三种DNA分子．
（4）第一次复制形成的两个DNA分子分别含有引物1和引物2，图中第一阶段形成的DNA分子同时具有引物1和引物2，图示双链DNA分子至少要经过第二次复制才能形成．
（5）利用微生物扩增该目的基因，需要将目的基因导入受体细胞，而导入受体细胞首先要将目的基因与载体结合．
故答案为：（8分）（每空1分，特殊说明除外）
（1）越高 （2）引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用
（3）3 （4）2 （5）目的基因与载体结合（2分） 将重组DNA导入受体细胞（2分）
解析
解：（1）由于一个C-C之间有三个氢键，而一个A-T之间有两个氢键，所以引物中C+C含量越高，引物与模板DNA的结合就越稳定．
（2）从图中可以看出，引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对，所以如果将引物2和3放在一个反应系统中，则会引起引物2和3 的失效．
（3）两个反应系统中各自形成两种DNA分子，但由于引物1和引物4形成两个与原DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA属于同一种DNA，故总共形成三种DNA分子．
（4）第一次复制形成的两个DNA分子分别含有引物1和引物2，图中第一阶段形成的DNA分子同时具有引物1和引物2，图示双链DNA分子至少要经过第二次复制才能形成．
（5）利用微生物扩增该目的基因，需要将目的基因导入受体细胞，而导入受体细胞首先要将目的基因与载体结合．
故答案为：（8分）（每空1分，特殊说明除外）
（1）越高 （2）引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用
（3）3 （4）2 （5）目的基因与载体结合（2分） 将重组DNA导入受体细胞（2分）
pcr技术是一种dna扩增技术，所需的酶来自于
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正确答案
在pcr实验操作中，下列说法不正确的是
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正确答案
pcr技术是在生物体外复制特定dna片段的技术，该技术的操作步骤依次是
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正确答案
标准的pcr过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是
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正确答案
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