热门试卷

植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。

回答下列问题：

（1）理论上，基因组文库含有生物的      基因；而cDNA文库中含有生物的      基因。

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中      出所需的耐旱基因。

（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物      的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的       ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的       是否得到提高。

（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了             （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。

Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_______。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到_______期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的_______设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_______酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_______，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：

一，.利用大肠杆菌表达BglB酶

（1）PCR扩增bglB基因时，选用         基因组DNA作模板。

（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入            和           不同限制酶的识别序列。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为                        。

二，.温度对BglB酶活性的影响

（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会              ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在              （单选）。

a，50℃

b，60℃

c，70℃

d，80℃

三，.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。

（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中             （多选）。

A.仅针对bglB基因进行诱变    

B.bglB基因产生了定向突变

C.bglB基因可快速累积突变     

D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_________。采集的精子需要经过_________，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_________。

（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到_________，说明目的基因成功表达。

32.（9 分）胰岛素 A、B 链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。 图 1 是该方法所用的基因表达载体，图2 表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B 分别表示-半乳糖苷酶与胰岛素 A、B链融合的蛋白）。 请回答下列问题：

（1）图1 基因表达载体中没有标注出来的基本结构是____ 。

（2）图1 中启动子是____酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是____ 。

（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有____ 。

（4）茁-半乳糖苷酶与胰岛素A 链或B 链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于____ 。

（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的 A 链或 B 链，且-半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为____。

（6）根据图2 中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。 你的推测结果是____，理由是____。

请考生在30,31两题中任选一题作答，若多做按第一题计分。

30．【生物－选修1：生物技术实践】生产果汁时，用果胶酶处理果泥可提高果汁的出汁率。回答下列相关问题：

（1）某同学用三种不同的果胶酶进行三组实验，各组实验除酶的来源不同外，其他条件都相同，测定各组的出汁量，据此计算各组果胶的活性的平均值并进行比较。这一实验的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）现有一种新分离出来的果胶酶，为探究其最适温度，某同学设计了如下实验：取试管16支，分别加入等量的果泥、果胶酶、缓冲液，混匀，平均分为4组，分别置于0℃、5℃、10℃、40℃下保温相同时间，然后，测定各试管中的出汁量并计算各组出汁量平均值。该实验温度设置的不足之处有＿＿＿和＿＿＿＿。

（3）某同学取5组试管（A～E）分别加入等量的同种果泥，在A、B、C、D4个实验组的试管中分别加入等量的缓冲液和不同量的同种果胶酶，然后，补充蒸馏水使4组试管内液体体积相同；E组加入蒸馏水使试管中液体体积与实验组相同。将5组试管置于适宜温度下保温一定时间后，测定各组的出汁量。通过A～D组实验可比较不同实验组出汁量的差异。本实验中，若要检测加入酶的量等于0而其他条件均与实验组相同时的出汁量，E组设计＿＿＿（填“能”或“不能”）达到目的，其原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

31．【生物－选修3：现代生物科技专题】在体内，人胰岛素基因表达可合成出一条称为前胰岛素原的肽链，此肽链在内质网中经酶甲切割掉氨基端一段短肽后成为胰岛素原，进入高尔基体的胰岛素原经酶乙切割去除中间片段C后，产生A、B两条肽链，再经酶丙作用生成由51个氨基酸残基组成的胰岛素。目前，利用基因工程技术可大量生产胰岛素。回答下列问题：

（1）人体内合成前胰岛素原的细胞是＿＿＿＿＿，合成胰高血糖素的细胞是＿＿＿＿＿。

（2）可根据胰岛素原的氨基酸序列，设计并合成编码胰岛素原的＿＿＿＿＿序列，用该序列与质粒表达载体构建胰岛素原基因重组表达载体。再经过细菌转化、筛选及鉴定，即可建立能稳定合成＿＿＿＿＿的基因工程菌。

（3）用胰岛素原抗体检测该工程菌的培养物时，培养液无抗原抗体反应，菌体有抗原抗体反应，则用该工程菌进行工业发酵时，应从＿＿＿＿＿中分离、纯化胰岛素原。胰岛素原经酶处理便可转变为胰岛素。

8.纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。

据图回答：

（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是______或__________。

（2）设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________不携带纤维素酶基因。

（3）纤维素酶基因的表达包括__________和__________过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有______________________________。

（4）在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株___________不能存活，原因是_________________________________。

（5）酵母菌生产酒精的细胞部位是___________，产生酒精时细胞的呼吸方式是___________，在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的中重组质粒含有____________。使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。

33.（8 分）荧光原位杂交可用荧光标记的特异 DNA 片段为探针，与染色体上对应的 DNA 片段结合，从而将特定的基因在染色体上定位。 请回答下列问题：

（1）DNA 荧光探针的制备过程如图 1 所示，DNA 酶玉随机切开了核苷酸之间的____键，从而产生切口，随后在 DNA 聚合酶玉作用下，以荧光标记的____为原料，合成荧光标记的 DNA 探针。

（2）图2 表示探针与待测基因结合的原理。 先将探针与染色体共同煮沸，使 DNA 双链中____键断裂，形成单链。 随后在降温复性过程中，探针的碱基按照____原则，与染色体上的特定基因序列形成较稳定的杂交分子。 图中两条姐妹染色单体中最多可有____条荧光标记的 DNA 片段。

（3）A、B、C 分别代表不同来源的一个染色体组，已知 AA 和 BB 中各有一对同源染色体可被荧光探针标记。 若植物甲（AABB）与植物乙（AACC）杂交，则其 F1 有丝分裂中期的细胞中可观察到____个荧光点;在减数第一次分裂形成的两个子细胞中分别可观察到____个荧光点。