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简答题

PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下,合成许多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段;电泳技术则是在外电场作用下,利用分子携带的净电荷不同,把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖 凝胶)中进行分离和分析的实验技术,利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子鉴定。下图是电泳装置和电泳结果:

(1)与电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较,后者使用的介质是__________,叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是_______________。

(2)PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。依据的原理是____________。

(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解,得到的氨基酸混合物进行电泳的结果,故可推知该多肽由___________种氨基酸构成。

(4)图4通过提取某小孩和其母亲,以及待测定的四位男性的DNA,分别由酶处理后,生成含有若干DNA片段,并进行扩增得到的混合物,然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱,请分析:F1~F4中,谁是该小孩真正生物学上的父亲?为什么?__________________,______________________。

正确答案

(1)层析液;各种色素随层析液在滤液上的扩散速度不同

(2)碱基互补配对原理

(3)6

(4)F2;C和F2两者的DNA指纹图谱完全相同

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简答题

回答下列与细胞有关的实验问题。

(1)下列4项实验中,需保持细胞生理活性的有____(填序号)。

①观察叶绿体和原生质的流动 ②观察洋葱鳞片叶内表皮细胞中DNA的分布 ③探究酵母菌的呼吸方式 ④红细胞中血红蛋白的提取和分离

(2)按下面步骤进行质壁分离实验。

步骤一:在洁净的载玻片中央加一滴清水,取一片藓类小叶,盖上盖玻片。

步骤二:从盖玻片一侧滴入0.3g/mL的蔗糖溶液,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次,使盖玻片下面的藓类小叶浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中。

步骤三:在显微镜下观察,结果如图所示。

①.图中A、B处的颜色分别是________。

②.如果上述实验步骤二中从盖玻片的一侧滴入的是加有伊红(植物细胞不吸收的红色染料)的0.3g/mL的蔗糖溶液,则在显微镜下观察到A、B处颜色分别是_________。

③.如果将步骤二中浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中的藓类小叶的装片,放在80℃条件下处理一段时间(装片中的藓类小叶保持在0.3g/mL的蔗糖溶液中)。在显微镜下清晰地观察到细胞结构后,为更准确地判断A处颜色,对显微镜的操作方法是______、______。如果A处呈绿色,可能的原因是______________。

正确答案

(l)①③

(2)①.无色、绿色  ②.红色、绿色  ③.改变光圈大小   调节反光镜(电光源亮度)   高温下细胞膜、叶绿体膜失去选择透过件,叶绿素等色素进入A处

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下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳,分离效果最好?

(1)血清清蛋白(pI=4.9)和血红蛋白(pI=6.8);

(2)肌红蛋白(pI=7.0)和胰凝乳蛋白酶原(pI=9.5);

(3)卵清蛋白(pI=4.6)、血清清蛋白(pI=4.9)和脲酶(pI=5.0)。

正确答案

(1)血清清蛋白的pI=4.9,血红蛋白的pI=6.8,两者的平均值为5.85,即(4.9+6.8)/2=5.85。因此,在pH5.85时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时血清清蛋白向阳极移动,而血红蛋白向阴极移动。

(2)肌红蛋白的pI=7.0,胰凝乳蛋白酶原的pI=9.5,两者的平均值为8.25,即(7.0+9.5)/2=8.25。因此,在pH8.25时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时肌红蛋白向阳极移动,而胰凝乳蛋白酶原向阴极移动。

(3)卵清蛋白的pI=4.6,血清清蛋白的pI=4.9,脲酶的pI=5.0。在pH4.9时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时血清清蛋白留在原点,卵清蛋白向阳极移动,而脲酶向阴极移动。

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填空题

蛋白质分子中,氨基酸的α-氨基和α-羧基虽然大部分结合成为肽键,但是蛋白质分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团,如肽链末端的α-氨基和α-羟基、天冬氨酸和谷氨酸残基中的羟基、赖氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团,所以蛋白质是两性电解质。在酸性溶液中,碱性基团的解离增大,使蛋白质带正电荷;在碱性溶液中,酸性基团的解离加强,使蛋白质带负电荷。当溶液到达某一pH时,蛋白质可因内部酸性和碱性基团的解离相等而呈等电状态,这时的溶液pH叫做蛋白质的等电点。不处于等电点状态的蛋白质分子的正、负电荷量是不相同的。试回答下列问题:

(1)多数蛋白质的等电点近于5,一般含碱性基团较多的蛋白质的等电点______(填“偏高”或“偏低”)。

(2)根据等电点的不同,你能用____方法将不同种类的蛋白质分子分开。

(3)简述根据等电点分离不同种类的蛋白质分子的原理。

正确答案

(1)偏高

(2)电泳

(3)调节电泳槽中缓冲液的pH,使某种蛋白质处于等电点状态,而其他蛋白质带有电荷,在电场作用下,带有正、负电荷的蛋白质分别移向两极,而不带电荷的蛋白质留在原处。

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填空题

某同学在实验课前从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血,并在采血容器中预先加入了抗凝血剂柠檬酸钠,取血回来马上进行实验。请回答红细胞洗涤的有关问题:

(1)洗涤红细胞的目的是________________。

(2)你如何知道红细胞已洗涤干净?___________________。

(3)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是___________________。

(4)如若离心速度过高或时间过长,则结果会怎样?______________________。

正确答案

(1)去除血浆蛋白

(2)离心后的上清液没有黄色

(3)低速如500r/min,短时间如2min

(4)离心速度过高或时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提纯

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