- 血红蛋白的提取和分离
- 共132题
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:_______、_______、_______和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是_____________________。
②.在样品处理中包括红细胞的洗涤、___________________、分离血红蛋白溶液、透析。
③.洗涤红细胞的目的是____________,你如何知道红细胞已洗涤干净?___________。
④.分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是_________________。
⑤.若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_____________________。
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①.透析的目的是_____________________________。
②.透析的原理是_____________________________。
(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①.样品纯化的目的是__________________。
②.血红蛋白有什么特点?____________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义?____________________。
正确答案
(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
(2)①.防止血液凝固 ②.血红蛋白的释放 ③.去除杂蛋白 离心后的上清液没有黄色 ④低速短时间离心,如500r/min离心2min ⑤.离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度
(3)①.去除相对分子量较小的杂质 ②.透析袋能使小分子自由进出,而大分子则保留在袋内
(4)①.通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去 ②.血红蛋白呈现红色 在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液,这使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作。
(附加题)凝胶色谱法也称做分配色谱法,是根据相对分子量的大小分离蛋白质的有效方法。回答以下问题:
(1) 加入到色谱柱的液体是透析过的样本,那么透析的目的是__________。
(2) 在色谱柱中,____的蛋白质会扩散到凝胶颗粒中,该蛋白质在色谱柱中的路程_____,转移速度________。
(3) 用凝胶色谱法分离血红蛋白,当________接近色谱柱低端时,用试管收集到的蛋白质主要是血红蛋白。
正确答案
(1)除去样品中分子量较小的杂质
(2)相对分子量较小 较长 较慢
(3)红色蛋白质
某同学在实验课前从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血,并在采血容器中预先加入了抗凝血剂柠檬酸钠,取血回来马上进行实验,请回答有关红细胞洗涤的问题:
(1)洗涤红细胞的目的是_______________。
(2)你如何知道红细胞已洗涤干净?________________。
(3)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是________________。
(4)如若离心速度过高和时间过长结果会怎样?___________________。
正确答案
(1)去除杂蛋白
(2)离心后上清液中没有黄色
(3)低速(如500r/min),短时间(如2min)
(4)离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞, 影响后续血红蛋白的提取纯度。
下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入和洗脱示意图。请据图回答下列问题。
(1)在加样品示意图中,正确的顺序是___________。
(2)用吸管加样品时,应注意正确操作,分别是__________、__________、____________。
(3)待___________时,才加入缓冲溶液。
(4)待样品____________接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每________mL收集一管,连续收集。
正确答案
(1)④→①→②→③
(2)不能破坏凝胶面 贴着管壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动
(3)完全进入凝胶层
(4)红色的蛋白质 5
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)分离蛋白质分子的一种常用方法是___________,是根据__________分离蛋白质的有效方法。
(2)血红蛋白提取和分离的程序可分为__________、___________、_________和纯度鉴定。
(3)洗涤红细胞的目的是__________,以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞,分离时采用低速短时间_________,然后用胶头吸管吸出上层透明的___________,将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯,再加入_________洗涤,如此重复,直至上清液中没有黄色。
(4)将洗涤好的红细胞倒入烧杯中,加入_________和________充分搅拌,红细胞破裂,释放出血红蛋白。
(5)腐乳中含有丰富的蛋白质及其水解产物,味道鲜美。其制作过程中所用的微生物主要是___________,在制作过程中,加盐的作用是__________、__________,腐乳表面往往有一层致密的皮,这层皮实际上是微生物的____________,它对人体无害。
正确答案
(1)凝胶色谱法 相对分子质量
(2)样品处理 粗分离 纯化
(3)去除杂蛋白 离心 黄色血浆 五倍体积的生理盐水
(4)蒸馏水 40%体积的甲苯
(5)毛霉 析出豆腐中的水分 抑制微生物的生长,避免豆腐块腐败变质 菌丝
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