- 血红蛋白的提取和分离
- 共132题
（1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和纯度鉴定．
（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液．分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层：第一层为无色透明的______，第二层为______白色薄层固体，是物质的沉淀层，第三层是红色透明液体，是______的水溶液，第四层是其他杂质的暗红色沉淀物．
（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离．
①透析的目的是______．②透析的原理是______．
（4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．
下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入（图I）和洗脱（图Ⅱ）示意图，请据图回答下列问题．
a．在加样示意图中，正确的加样顺序是______．
b．用吸管加样时，应注意正确操作，分别是①待缓冲液降到与凝胶面齐平再加样．②贴着管壁加样______．
c．等样品完全进入凝胶后，才加入缓冲液洗脱．待______接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集．
①品纯化目的是______．
②血红蛋白呈现红色，这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？______．
正确答案
解：（1）血红蛋白提取和分离步骤：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．
（2）分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层：第一层为无色透明的甲苯层，第二层为脂溶性物质的白色薄层固体，是物质的沉淀层，第三层是红色透明液体，是血红蛋白的水溶液，第四层是其他杂质的暗红色沉淀物．
（3）透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内，因此透析可以去除相对分子质量较小的杂质．
（4）a．加样和洗脱的具体过程为：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质，因此正确的加样顺序是②①④③．
b．用吸管加样时，应注意正确操作，分别是：①待缓冲液降到与凝胶面齐平再加样．②贴着管壁加样，不要破坏凝胶面．
c．①品纯化目的是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去．
②血红蛋白呈现红色，因此可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这也使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作．
故答案为：
（1）样品处理；粗分离；纯化；纯度鉴定
（2）甲苯层；脂溶性物质；血红蛋白；
（3）①去除分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内
（4）a、②①④③b、③不要破坏凝胶面 c、红色蛋白质
①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
②可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作．
解析
解：（1）血红蛋白提取和分离步骤：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．
（2）分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层：第一层为无色透明的甲苯层，第二层为脂溶性物质的白色薄层固体，是物质的沉淀层，第三层是红色透明液体，是血红蛋白的水溶液，第四层是其他杂质的暗红色沉淀物．
（3）透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内，因此透析可以去除相对分子质量较小的杂质．
（4）a．加样和洗脱的具体过程为：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质，因此正确的加样顺序是②①④③．
b．用吸管加样时，应注意正确操作，分别是：①待缓冲液降到与凝胶面齐平再加样．②贴着管壁加样，不要破坏凝胶面．
c．①品纯化目的是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去．
②血红蛋白呈现红色，因此可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这也使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作．
故答案为：
（1）样品处理；粗分离；纯化；纯度鉴定
（2）甲苯层；脂溶性物质；血红蛋白；
（3）①去除分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内
（4）a、②①④③b、③不要破坏凝胶面 c、红色蛋白质
①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
②可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作．
如图表示血红蛋白提取和分离实验的部分装置或操作方法，请回答下列问题：
（1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要成分，我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，加入柠檬酸钠的目的是______．
（2）如图甲表示______过程，该操作目的是去除样品中分子量（大或小）______的杂质．
（3）如图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序是______（用序号表示）．在进行④操作前，应该等样品______，且要______（填“打开”或“关闭”）下端出口．
（4）如图丙，a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是______，原因是______．
正确答案
解：（1）血红蛋白提取和分离实验中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固．
（2）图甲表示血红蛋白的透析过程，即血红蛋白的粗分离，目的是去掉分子量较小的杂质．
（3）正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是②③④①；在进行④操作前，应该等样品完全进入凝胶层，且要 关闭下端出口．
（4）a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，所以a先从层析柱中洗脱出来．
故答案为：
（1）防止血液凝固
（2）透析（粗分离） 分子量较小
（3）②③④①完全进入凝胶层 关闭
（4）a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快
解析
解：（1）血红蛋白提取和分离实验中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固．
（2）图甲表示血红蛋白的透析过程，即血红蛋白的粗分离，目的是去掉分子量较小的杂质．
（3）正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是②③④①；在进行④操作前，应该等样品完全进入凝胶层，且要 关闭下端出口．
（4）a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，所以a先从层析柱中洗脱出来．
故答案为：
（1）防止血液凝固
（2）透析（粗分离） 分子量较小
（3）②③④①完全进入凝胶层 关闭
（4）a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快
某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”如图1：
试回答下列有关问题：
（1）样品处理中红细胞的洗涤要用______反复冲洗、离心．向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是______．
（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是______．
（3）电泳利用了待分离样品中各种分子的______等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离．
（4）一同学通过血红蛋白醋酸迁维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示．由如图2可知携带者有______种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释______．
正确答案
解：（1）样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心．向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）．
（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去小分子杂质．
（3）电泳利用了待分离样品中各种分子的带电性质以及分子大小、形状等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离．
（4）由如图2可知携带者有2种血红蛋白，因为携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质．
故答案为：
（1）生理盐水 渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）
（2）除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液
（3）带电性质以及分子大小、形状
（4）2 携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质
解析
解：（1）样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心．向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）．
（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去小分子杂质．
（3）电泳利用了待分离样品中各种分子的带电性质以及分子大小、形状等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离．
（4）由如图2可知携带者有2种血红蛋白，因为携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质．
故答案为：
（1）生理盐水 渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）
（2）除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液
（3）带电性质以及分子大小、形状
（4）2 携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质
血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输．请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题．
（1）血红蛋白的提取方法可以采用______法．将实验流程补充完整：B为______．
（2）洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白，洗涤干净的标志是______．释放血红蛋白的过程中起作用的是______．
（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/的______液的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致．
（4）a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是______．
正确答案
解：（1）血红蛋白的提取的常用方法是凝胶色谱法．图中A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱．
（2）洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白，当离心后的上清液中没有黄色，说明洗涤干净了．在释放血红蛋白的过程中需要加入蒸馏水和甲苯．
（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/的磷酸缓冲液可以模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致．
（4）相对分子质量大的物质，无法进入凝胶珠中的通道孔，只能留在凝胶珠之间的空隙中，图中a分子大，所以a先出来．
故答案为：
（1）凝胶色谱法 样品的加入和洗脱
（2）离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯
（3）磷酸缓冲
（4）a
解析
解：（1）血红蛋白的提取的常用方法是凝胶色谱法．图中A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱．
（2）洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白，当离心后的上清液中没有黄色，说明洗涤干净了．在释放血红蛋白的过程中需要加入蒸馏水和甲苯．
（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/的磷酸缓冲液可以模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致．
（4）相对分子质量大的物质，无法进入凝胶珠中的通道孔，只能留在凝胶珠之间的空隙中，图中a分子大，所以a先出来．
故答案为：
（1）凝胶色谱法 样品的加入和洗脱
（2）离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯
（3）磷酸缓冲
（4）a
红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．请回答下列有关问题：
（1）血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：______、______、______和______．
（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液．
①加入柠檬酸钠的目的是______
②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、______、透析．
（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离．
①透析的目的是______②透析的原理是______
（4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．样品纯化的目的是______
（5）提取细胞膜经常使用的材料是哺乳动物的成熟红细胞，原因是：______．
正确答案
解：（1）血红蛋白的提取和分离一般可分为：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步．
（2）样品处理过程分为红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析四步，实验前取新鲜的血液时，在采血容器中应预先加入柠檬酸钠，以防止血液凝固．
（3）血红蛋白的粗分离是通过透析完成的，透析的目的是除去分子量较小的杂质，原理是透析袋是半透膜，能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内．
（4）样品纯化是通过凝胶色谱法除去分子量大的杂蛋白．
（5）由于哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核、没有线粒体等由膜系统构成的细胞器，提取的细胞膜相对单一，只有细胞膜，因此取细胞膜经常使用的材料是哺乳动物的成熟红细胞．
故答案为：
（1）样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
（2）①防止血液的凝固②红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
（3）①将样品中分子量较小的杂质蛋白除去 ②透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内
（4）通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
（5）因为哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核、没有线粒体等由膜系统构成的细胞器，这样提取的细胞膜相对较纯
解析
解：（1）血红蛋白的提取和分离一般可分为：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步．
（2）样品处理过程分为红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析四步，实验前取新鲜的血液时，在采血容器中应预先加入柠檬酸钠，以防止血液凝固．
（3）血红蛋白的粗分离是通过透析完成的，透析的目的是除去分子量较小的杂质，原理是透析袋是半透膜，能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内．
（4）样品纯化是通过凝胶色谱法除去分子量大的杂蛋白．
（5）由于哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核、没有线粒体等由膜系统构成的细胞器，提取的细胞膜相对单一，只有细胞膜，因此取细胞膜经常使用的材料是哺乳动物的成熟红细胞．
故答案为：
（1）样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
（2）①防止血液的凝固②红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
（3）①将样品中分子量较小的杂质蛋白除去 ②透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内
（4）通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
（5）因为哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核、没有线粒体等由膜系统构成的细胞器，这样提取的细胞膜相对较纯
扫码查看完整答案与解析