- 动物细胞工程
- 共1959题
开学初，小源到建设银行营业网点兑换了此前在网上预约的中国高铁纪念币。这枚纪念币由中国人民银行发行，面额10元，每人限兑20枚，且需要提前预约。小源打算与班上同学分享自己的喜悦。他可以向大家这样介绍
①纪念币面额和实际购买力都是由中国人民银行规定的
②纪念币可以直接购买商品，也具有支付手段等货币职能
③纪念币发行量有限，具有一定的收藏价值和升值空间
④纪念币不能与同面额人民币等值流通，必须在规定时间地点使用
正确答案
解析
①错误，国家无权规定纪念币的实际购买力；④错误，纪念币与同面额人民币等值流通，在任何时间地点都可使用；由中国人民银行发行的纪念币属于法定货币，可以直接购买商品，也具有支付手段等货币职能，因其发行量有限，具有一定的收藏价值和升值空间，故②③正确。
知识点
三聚氰胺是小分子有机物，下图为采用单克隆技术制备三聚氰胺特异性抗体的过程，下列叙述不正确的是
（ ）
正确答案
解析
解：A、根据试题的分析，聚氰胺分子“扩容“的目的是激活小鼠的免疫反应，A正确；
B、三聚氰胺是小分子有机物，不会被动物的免疫细胞的受体所识别，B错误；
C、体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清和抗生素，C正确；
D、经培养筛选得到的杂交瘤细胞具有双亲的特性，既能无限增殖又能产生单一抗体，D正确．
故选：B．
下列有关生物技术实践的叙述，不正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、制果酒时瓶口先通气后密封，先通气的目的是让酵母菌大量繁殖，后密封的目的是让酵母菌进行酒精发酵；因为醋酸菌是好氧菌，所以制果醋时需要通入氧气，故A正确；
B、因为酶的活性受温度影响，所以使用加酶洗衣粉时用温水洗涤效果比用冷水洗涤效果好，故B正确；
C、凝胶色谱法的依据是：根据相对分子质量的大小分离蛋白质，故C正确；
D、制备单克隆抗体所涉及到的生物技术包括动物细胞融合、动物细胞培养，但未涉及胚胎移植技术，故D错误．
故选D．
禽流感疫情有逐渐蔓延的趋势，有些国家还出现了人感染的病例．现在，科学家们已陆续从病死的家禽和候鸟体内分离到了H5N1亚型禽流感病毒（一种RNA病毒）．
若生产可以用于预防和治疗禽流感的抗体，请根据如图的单克隆抗体制备过程示意图回答有关问题：
（1）若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自______体内相应的______细胞，促进d过程的常用诱导剂是______或______．
（2）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成______种类型的C细胞，因此需用______培养基筛选出______（填特点）的D细胞用于培养．D细胞的名称是______．
（3）目前注射禽流感疫苗是预防禽流感的一种措施．我们已经知道，决定禽流感病毒在人体细胞中增殖变化的物质是______，而决定其抗原特异性的基因位于______．据此分析制备禽流感疫苗的主要思路：______．
（4）理论上，以上措施并不能使人类彻底摆脱禽流感，试分析原因：______．
正确答案
解析
解：（1）在制备单克隆抗体的过程中，需要从被特定抗原感染的机体中获得相应的浆细胞．诱导细胞融合的诱导剂有聚乙二醇或灭活的病毒．
（2）若只考虑两两细胞融合，则融合的细胞有三种：B细胞之间融合、骨髓瘤细胞之间融合及B细胞和骨髓瘤细胞之间的融合，所需还需要用选择培养基进行筛选，该培养基中只有B细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞存活，即能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．
（3）禽流感病毒的遗传物质是RNA；制备禽流感疫苗时，可以将灭活的禽流感注射到动物体内，从血清中提取抗体即可．
（4）由于禽流感病毒的遗传物质是RNA，结构不稳定容易发生变异，且记忆细胞在体内存活的时间有限，因此人类不能彻底摆脱禽流感．
故答案为：
（1）感染病毒的动物或人 效应B 聚乙二醇（PEG） 灭活的病毒
（2）3 选择 既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞
（3）病毒的RNA 病毒的衣壳上 将禽流感病毒灭活或减毒后注入鸟类或哺乳动物体内，从这些动物血清中提取（或利用基因工程技术生产禽流感病毒的衣壳蛋白）
（4）禽流感病毒易发生变异或对禽流感病毒有免疫作用的抗体、（记忆细胞）在体内存留的时间有限
核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径（如图）．正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶．现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞．关于筛选原理的叙述，正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、免疫的B细胞及其互相融合细胞全合成途径被A阻断，但通过补救合成途径在HAT培养基上能增殖，A错误；
B、骨髓瘤细胞及其互相融合细胞因无法进行上述两个途径而在HAT培养基上不能增殖，B正确；
C、杂交瘤细胞因为可以进行补救合成，所以能在HAT培养基上大量增殖，C错误；
D、HAT培养基上筛选出的杂交瘤细胞，并不都能产生高纯度的目标抗体，D错误．
故选：B．
如图为单克隆抗体制备流程示意图．
（1）______技术是单克隆抗体技术的基础．
（2）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是______．在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的______，以保证生命活动的正常进行．
（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是______．
（4）选出的杂交瘤细胞具备______特点．
（5）淋巴细胞是由动物体______中的______细胞分化、发育而．
（6）图2表示从正常人和患者体内获取的P53基因的部分区域．与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，已知限制酶E识别序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的P53基因部分区域（见图2），那么正常人的会被切成______个片段，而患者的则被切割成长度为______对碱基的两种片段．如果某人的P53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是______（以P+表示正常基因，Pn表示异常基因）
正确答案
解析
解：（1）单克隆抗体制备技术是动物细胞融合技术的应用之一，其基础是动物细胞培养．
（2）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）．在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的种类和浓度，关注培养基的渗透压和营养充沛，以保证生命活动的正常进行．
（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）．
（4）杂交瘤细胞具备骨髓瘤细胞在体外能大量增殖的特点，又具备B淋巴细胞能分泌特异性抗体的特点．
（5）淋巴细胞是骨髓中的造血干细胞分化、发育而来．
（6）由图示及限制酶E识别序列为CCGG可知，正常人的会被切成3个片段，因为正常人的该基因上有限制酶E和限制酶B的切割位点，患者的限制酶E的酶切位点消失，只有限制酶B的酶切位点，所以该基因被切除两段，长度为则被切割成长度为：290+170=460和220．如果某人的P53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，可知该人体内的一对基因中一个是正常的，一个是突变的（异常基因），因此该人的基因型是P+Pn．
故答案为：
（1）动物细胞培养
（2）筛选杂交瘤细胞 种类和数量（浓度）
（3）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）
（4）在体外大量增殖和分泌特异性抗体
（5）骨髓 造血干
（6）3 460、220 P+Pn
（1）下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请根据图回答下列问题：
①请用箭头把代表各图解的字母按单克隆制备过程的顺序连接起来．
②在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有______、______的特性．
③由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了______和______的动物细胞工程技术手段．
（2）金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病，降低观赏价值．科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，用转基因方法培育出了抗枯萎病的新品种．请据图回答：
①获得b并将b连接到a上形成c，常用到的酶有______．
②通过植物组织培养技术可快速、大量培养该抗病新品种，请简述此技术的基本流程．
正确答案
解析
解：（1）①单克隆抗体制备过程包括获取免疫能力的效应B细胞和骨髓瘤细胞、诱导细胞融合和筛选出杂交瘤细胞、克隆化培养和抗体检测并筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞、体外或体内培养杂交瘤细胞、获取大量单克隆抗体．因此按单克隆制备过程的顺序用箭头把代表各图解的字母连接，如图可示
②杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生特异性抗体．
③B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，属于动物细胞融合技术．杂交瘤细胞的培养属于动物细胞培养技术．
（2）①b连接到a上形成c的过程是基因表达载体的构建过程，此过程需要限制酶切割目的基因b和质粒a，再用DNA连接酶连接它们形成重组质粒．
②植物组织培养技术的过程：离体的抗病基因的茶花植物组织，器官或细胞（外植体）
故答案为：
（1）①
②在体外大量繁殖 产生特异性抗体
③动物细胞融合 动物细胞培养
（2）①限制性核酸内切酶和DNA连接酶
②获得抗病基因的茶花细胞→脱分化→愈伤组织→再分化得到转基因金茶花
（2015春•曲阜市校级期中）下列是应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，选项中对单克隆抗体制备的相关叙述不正确的是（ ）
①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞；
②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞；
③利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合；
④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养；
⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞；
⑥从腹水中提取抗体．
正确答案
解析
解：A、根据以上分析可知，实验顺序应当是①②③⑤④⑥，A正确；
B、④为杂交瘤细胞的克隆化培养过程，属于细胞水平上的克隆，B正确；
C、③过程获得的细胞不都能无限增殖，如浆细胞自身融合的细胞不能无限增殖，因此还需要用选择培养基进行筛选，C错误；
D、③到⑤的过程中通常要经过两次筛选，第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用抗体阳性检测筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，D正确．
故选：C．
（1）若A、B细胞为植物细胞，则已经用______酶除去了细胞壁，由此生成的A和B细胞称为______．融合完成的标志是______；形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株．
（2）若图表示单克隆抗体的制备过程，A为骨髓瘤细胞，则B细胞来自经______处理后的小鼠．诱导A、B细胞融合的手段与第（1）小题相比，特有的是______．形成的C细胞需要进行2次筛选：第一次用______培养基进行培养，以选出融合成功的杂交瘤细胞；第二次对杂交瘤细胞进行______以获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，此细胞的特点是______．
正确答案
解析
解：（1）植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此根据酶的专一性原理，去除植物细胞壁应该选用纤维素酶和果胶酶，由此生成的A和B细胞称为原生质体．融合完成的标志是形成了新的细胞壁．
（2）若图表示单克隆抗体的制备过程，A为骨髓瘤细胞，则B为浆细胞，其来自经注射特定抗原处理后的小鼠．诱导细胞融合的过程，对于植物细胞可采用物理法（离心、振动、电激）和化学法（聚乙二醇），对于动物细胞还可以采用生物法（灭活的病毒）．形成的C细胞需要进行2次筛选：第一次用选择培养基进行培养，以选出融合成功的杂交瘤细胞；第二次对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测（或专一抗体检验阳性）以获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，此细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体．
故答案为：
（1）纤维素酶和果胶酶 原生质体 形成了新的细胞壁
（2）注射特定抗原 灭活的病毒 选择 克隆化培养和抗体检测（或专一抗体检验阳性） 既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体
（1）该技术是在动物细胞培养技术和______技术的基础上发展起来的．
（2）图10中细胞A体外培养不具有分裂能力，但能分泌______，细胞B体外培养能够______．
（3）动物细胞融合常用的方法是______．
（4）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，要筛选出______细胞．在细胞培养过程
中，为了促进细胞摄取葡萄糖，常向培养液中加入______（激素）．
（5）培养2周后，即测定培养细胞的特征，筛选出______的细胞置于不同孔内（如图所示）培养．此操作前要将培养细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是______．
（6）要获得大量的单克隆抗体，可对获得的杂交瘤细胞进行______培养．
正确答案
解析
解：（1）单克隆抗体的制备技术首先要利用动物细胞融合将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，然后要利用动物细胞培养技术对融合的细胞进行筛选，筛选出杂交瘤细胞，再进行培养．
（2）图中细胞A为经过免疫的B淋巴细胞，该细胞不具有分裂能力，但能分泌特异性抗体．细胞B为骨髓瘤细胞，该细胞能够无限增殖．
（3）动物细胞融合常用的方法有物理法（离心、震动、电刺激）、化学法（PEG）、生物法（灭活的病毒）．
（4）HAT培养基是选择培养基．由于细胞融合的结果可能有三种情况：B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞，因此需要用HAT培养基筛选出杂交瘤细胞．胰岛素具有促进组织细胞加速摄取利用葡萄糖的作用，因此在细胞培养过程中，常向培养液中加入胰岛素．
（5）培养2周后，筛选出能产生特异性抗体的骨髓瘤细胞细胞置于不同孔内培养．此操作前要将培养细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是 保证每个孔内不多于一个细胞，达到单一细胞培养以保证抗体的纯度的目的．
（6）要获得大量的单克隆抗体，可对获得的杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中进行体内培养，也可利用动物细胞培养技术进行体外培养．
故答案为：
（1）动物细胞融合
（2）分泌特异性抗体 无限增殖
（3）PEG（灭活的病毒、电刺激）
（4）杂交瘤 胰岛素
（5）特异性分泌抗X蛋白抗体的 保证每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（单一细胞培养以保证抗体的纯度）
（6）体外或体内（体外和体内、体外、体内）
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