热门试卷

回答下列有关基因工程问题．

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．

（1）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，其产物长度分别为______．

若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐形纯合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有______种不同长度的DNA片段．

（2）为了提高试验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝．该方法也是检测______多样性的最简单方法．

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．

（4）为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌在含______的培养基上培养，得到如图3的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含______的培养基上培养，得到如图4的结果（空圈表示与图3对照无菌落的位置）．

（5）在选出的大肠杆菌内基因D能成功表达的原因是______．其表达产物是一条多肽链，如考虑终止密码，则其至少含有的氧原子数为______．

目前，精子载体法逐渐成为最具有活力的制备转基因动物的方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体使精子携带外源基因进入卵细胞受精．如图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程．请据图回答：

（1）获取外源基因用到的工具酶是______，为了提高实验成功率，通常利用______技术获得大量标记的外源基因．

（2）外源基因能够整合到精子的______上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的______才能进入卵细胞中．

（3）过程②采用的是______技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行______处理．自然受精中防止多精入卵的两道屏障依次是______反应和______反应．

（4）由于目前人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养液中加入______．

（5）一般来说，胚胎发育到______阶段或______阶段时适宜用作胚胎移植．

番茄果实成熟过程中，某种酶（PG）开始合成并显著增加，促使果实变红变软，但不利于长途运输和长期保鲜．科学家利用反义RNA技术（见图解），可有效解决此问题．该技术的核心是：从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板，人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株；新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA（靶mRNA）互补形成双链RNA，阻止靶mRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的．请结合图解回答：

（1）反义基因像一般基因一样是一段双链的DNA分子，合成该分子的第一条链时，使用的模板是细胞质中的信使RNA，原料是四种______，所用的酶是______．

（2）开始合成的反义基因第一条链是与模板RNA连在一起的杂交双链，通过加热去除RNA，然后再以反义基因第一条链为模板合成第二条链，这样一个完整的反义基因被合成．若要以完整双链反义基因苋隆成百上千的反义基因，所用复制方式为______．

（3）如果指导番茄合成PG的信使RNA的减基序列是一A-U-C-C-A-G-G-U-C-，那么，PG反义基因的这段碱基对序列是______

（4）将人工合成的反义基因导入番茄叶肉细胞原生质体的运输工具是______；该目的基因与运输工具相结合需要使用的酶有______；在受体细胞中该基因指导合成的最终产物是______．

如图a示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因．目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性．为了检查载体是否导入原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）．再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）．据此分析并回答：

（1）pBR322质粒的基本组成单位是______．在基因工程中，质粒上的Amrr、Tetr称为______基因．

（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是______，由此说明______．

（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中的______步骤，该基因工程中的受体细胞是______．