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[生物──选修3现代生物科技专题]

人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）．

（1）体外受精时，人工采集的动物精子必须经过______处理才能完成图示中的①过程；图中的高血压相关基因作为______，完成②过程常采用的方法是______．

（2）④过程中，为维持培养液pH的相对稳定，必须将培养瓶放置在______中进行培养，培养过程用______（酶）处理才能获得单个细胞．

（3）图示中甲为______（时期）的去核卵母细胞，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和______．⑤过程操作技术叫做______．

（4）在上述转基因鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术有______、早期胚胎的培养和______．

（5）子代大鼠如果检测到______和______出现，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型．转基因鼠只携带一个B基因，常采用的方法来培育基因型为BB的个体．

慢性病人常出现白蛋白值偏低的状况（比如慢性肝病、慢性肾病、肿瘤等）．缺乏白蛋白，人就容易出现浮肿．人体的白蛋白正常值在每100mL血液中含有3.8～4.8克，如果比正常值低很多时就需要注射入血白蛋白，所以临床上对白蛋白需求量很大．如图是利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图：

（1）通过①采集的卵子，都需要进行体外培养，其目的是______：通过②采集的精子需______后才能进行受精作用．

（2）要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、乳腺蛋白基因的启动子和终止子、______等部分．

（3）过程④需将重组质粒用______方法注入受精卵的雄原核内，在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是______．正常生理状况下防止多精入卵的两道屏障分别是______、______．

（4）对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的______细胞进行鉴定，一般采用SRY-PCR方法，选择出现阴性反应的______（雌性/雄性）胚胎进行移植．

（5）为了使胚胎移植能成功，需要对代孕奶山羊C进行______处理，使之与供体的生理状况保持相同．

如图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转人赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程，请据图回答问题．

（1）克隆牛“织女”的诞生过程中涉及到的细胞水平的现代生物技术主要有：______ （至少答出两项）

（2）实施基因工程包括四个基本操作步骤，其核心步骤是______，实现②过程的常用方法是______

（3）现有-长度为1000碱基对（by）的DNA分子，用限酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000by，说明此DNA分子为______ （填“线性”或“环状”），用Kpn I单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分子．请绘出该DNA分子的酶切图谱的示意图：______ （请在图中标明限制酶的类型、酶切位点和碱基长度）．

糖尿病是近年来高发的“富贵病”，常见类型有遗传型糖尿病和II型糖尿病．遗传型糖尿病的主要病因之一是胰岛受损．科研机构作出如下设计：取糖尿病患者的细胞，将人的正常胰岛素基因导入其中，然后做细胞培养，诱导产生胰岛组织，重新植入患者的胰岛，使胰岛恢复功能．II型糖尿病需要注射胰岛素治疗．目前临床使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰，与人体生理状态不符．科研人员通过一定的工程技术手段，将胰岛素B链的28号和29号氨基酸互换，获得了速效胰岛素，已通过临床试验．

（1）对遗传型糖尿病进行基因治疗的方案中，胰岛素基因称为______，实验室中要先对该基因利用______技术进行扩增．将该基因导入正常细胞所用的方法是______．

（2）对遗传型糖尿病患者进行治疗的基因工程步骤中的核心步骤是______．

（3）科研人员利用蛋白质工程合成速效胰岛素，该技术的实验流程为：

A→设计预期的蛋白质结构→B→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）→生产出速效胰岛素，其中，流程B是______．