- DNA重组技术的基本工具
- 共1894题
(附加题)如图为口蹄疫疫苗生产过程示意图。请回答下列问题:
(1)首先从口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA,而不是用口蹄疫病毒的全部RNA,原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白质,具有________特性,又不会使动物致病。以合成病毒蛋白的RNA产生病毒蛋白的DNA,需用到的工具酶是____________。
(2)构建基因表达载体所需要的工具酶是________。基因表达载体除目的基因外,还应包括_________。
(3)导入大肠杆菌前需先将大肠杆菌处理为______细胞。
(4)为检测目的基因是否导入受体细胞,常常要借助载体上______的表达,更准确的方法是利用放射性同位素标记的_________作探针与基因组DNA杂交。最后还要检测目的基因是否翻译成了病毒蛋白质,利用的技术是____________。
正确答案
(1)抗原 逆转录酶
(2)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 启动子、终止子、标记基因
(3)感受态
(4)标记基因 病毒蛋白基因(目的基因) 抗原―抗体杂交技术
(选做题)转基因植物油是由转基因植物通过压榨法或浸出法加工制得的,因其出油率高而被广泛采用。我国是植物油消费大国,每年都从国外进口大量的转基因植物油一请回答下列相关问题:
(1)在培育转基因油料植物的过程中,需要在________酶的作用下才能完成剪接工作。假如载体被切割后,得到的分子末端序列为,则能与该载体连接的目的基因的分子末端序列是__________。
A. B.
C.
D.
(2)图中A~D段分别表示质粒的某些片段,当B表示启动子,为使目的基因能够表达,目的基因插入的最佳位点是1~4中的_____处。
(3)在基因工程的四步操作过程中,一定遵循碱基互补配对原则的步骤有______、______。
(4)从分子水平分析不同种生物之间基因能够转移成功的主要原因是___________,也说明了不同生物共用一套_________。
(5)将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法有______________(答出一种即可)。若要检测获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因,可采用_________技术。
(6)该转基因油料植物中目的基因表达的产物是__________。
A.植物油 B.磷脂 C.蛋白质 D.核酸
(7)转基因油料植物获得的_________性状是由该表达产物来体现的。而要想知道上述植物是否真的出油率高,应如何做?____________。
(8)我国在种植转基因油料植物的同时仍保留原来非转基因油料植物等,这是依据生态工程中的_____原理。
正确答案
(1)限制酶和DNA连接 B
(2)3
(3)基因表达载体的构建 目的基因的检测和鉴定
(4)不同生物DNA分子的结构基本相同(只要答出DNA结构基本相同、大体相同、相似,DNA空间结构相同均可,但答DNA结构完全相同的不行) 遗传密码(密码子)
(5)农杆菌转化法(基因枪法、花粉管通道法) DNA分子杂交
(6)C
(7)高产油 将该植物制出的植物油与同等质量的非转基因植物制出的植物油称重比较
(8)物种多样性
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:
(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由___________连接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是___________末端,其产物长度为____________。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有___________种不同DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是____________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加__________的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是____________。
正确答案
(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
(2)平 537bp、790bp、661bp
(3)4
(4)BamHⅠ 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D与质粒反向连接
肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答:
(1)进行过程①时,需用______ 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动let-7基因转录,该部位称为_________。
(2)进行过程e时,需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。
(3)研究发现,如let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取_______进行分子杂交,以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中_________(RASmRNA/RAS蛋白质)含最减少引起的。
正确答案
(1)限制(限制性核酸内切) 启动子
(2)胰蛋白酶
(3)RNA RAS蛋白质
(附加题)请回答下列有关基因工程的问题:
(1)如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的_________片段,与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个受体菌群体就叫做这种生物的___________。
(2)一个基因表达载体的组成,除了目的基因外,还必须有_______、_______以及_______。
(3)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_________法。转基因动物中采用最多,也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是______________。
(4)目的基因导入受体细胞后,是否可以维持稳定和表达其遗传特性,只有通过检测与鉴定才能知道。首先,要检测转基因生物________上是否插入了目的基因。其次,还需要检测目的基因是否_______。最后检测目的基因是否____________。
正确答案
(1)多种互补DNA cDNA(部分基因)文库
(2)启动子 终止子 标记基因
(3)农杆菌转化 显微注射技术
(4)染色体的DNA 转录出了mRNA 翻译成蛋白质
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