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简答题

胰岛素是治疗糖尿病的重要药物。下图是利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程,请据图回答:

(1)完成过程②、③必需的酶分别是________、_________。

(2)在利用A、B获得C的过程中,必须先用_________酶切割A和B,使它们产生相同的_________,再加入___________酶,才可形成C。

(3)取自大肠杆菌的物质B,它的本质是__________分子。

(4)图中的细胞D是基因工程中常用的受体细胞,主要原因是_______等。

正确答案

(1)逆转录酶;解旋酶

(2)同一种限制酶;黏性末端或平末端;DNA连接酶

(3)DNA

(4)繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等

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美籍华人钱永健等科学家因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献,获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光,该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。据图回答相关问题。

(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。

(2)上述过程中涉及到的细胞水平现代生物技术主要有___________________。

(3)在②过程进行转基因体细胞的筛选时,比较简易的筛选方法是_________。

(4)在④过程培养重组细胞时,需要适宜的温度和pH外,还需要____________。

(5)图中从③到④的过程中一般利用去核后的卵细胞作为受体,而不用去核的体细胞,主要原因是______________。

正确答案

(1)目的

(2)动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植

(3)能否发出绿色荧光

(4)渗透压和溶解氧            

(5)卵细胞中含有能使体细胞的核基因表达的物质(卵细胞的全能性大于体细胞)

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金茶花是中国特有的观赏品种,但易得枯萎病,降低观赏价值。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因,用转基因方法培育出了抗枯萎病的新品种。请据图回答下列问题。

(1)将②连接到①上并形成③,常用到的酶有__________。

(2)②与①上的某种抗药性基因在结构上的最大区别是__________。

(3)经检测,被③侵染的金茶花叶片细胞具备了抗病性,这说明②已经________。欲快速培育大量该抗病新品种,应该采用的技术是________,依据的理论基础是________。

(4)通过转基因方法获得的抗病金茶花,将来产生的配子中是否一定含有抗病基因?__________。

正确答案

(1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶

(2)②的编码区是间隔的、不连续的(只要合理均正确)

(3)表达   植物组织培养     植物细胞的全能性

(4)不一定

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天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类,用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌,获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题:

(1)将淀粉酶基因切割下来所用的工具是________,用_______将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子,此表达载体除目的基因外,必须含有______、_______和标记基因。

(2)若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌,可采用的检测方法是_______________,该项方法要用____________作探针进行检测;若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶,可采用_____方法检测。

(3)采用PCR技术可对目的基因进行体外扩增。该反应体系的主要成分应包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种dNTP、模板DNA、引物和____________。其中引物有_________种,实质是_______,假如引物都用3H标记,从理论上计算循环4次,所得DNA分子中含有3H标记的占____。

(4)已知BarnHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示,用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作,若干循环后_______序列明显增多。

(5)基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质,__________却能生产自然界不存在的新的蛋白质,但最终还须通过改造基因来实现,原因是__________。

正确答案

(1)限制性核酸内切酶;DNA连接酶;启动子;终止子

(2)DNA分子杂交技术;用放射性同位素进行标记了的含目的基因的DNA片断;抗原—抗体杂交法(或淀粉酶活性)

(3)Taq酶(耐高温的或热稳定的DNA聚合酶);2;DNA;100%

(4)

(5)蛋白质工程;①基因控制蛋白质的合成,改造基因即改造了蛋白质;②改造的基因可以遗传,直接改造的蛋白质不能遗传;③目前对大多数蛋白质复杂的高级结构还不清楚,所以改造基因比直接改造蛋白质容易(答对其中一点即可)

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降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低,半衰期较短。某科学机构为了研究一种活性高、半衰期长的新型降钙素,从预期新型降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如下图。在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题:

(1)Klenow酶是一种__________酶,合成的双链DNA有___________个碱基对。

(2)获得的双链DNA经EcoR(识别序列和切割位点-GAATTC-)和BamH(识别序列和切割位点-GGATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①.大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它____________。

②.设计EcoR和BamHⅠ双酶切的目的是____________。

③.要进行重组质粒的鉴定和选择,需要大肠杆菌质粒中含有___________。

(3)经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是_____。

(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是___________。

正确答案

(1) DNA聚合   126

(2)①.繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少

②.保证目的基因和载体定向连接(或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接)

③.标记基因 

(3)合成的核苷酸单链仍较长,产生缺失碱基的现象

(4)蛋白质工程

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