热门试卷

限制性核酸内切酶主要是从______________中分离纯化出来的，每种限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中____________________断开。以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：其中的(2)能和________(填序号)在_____________的作用下连接成_______________。

大肠杆菌与人类的生产生活密切相关。据图表回答下列有关问题：

(1)科研人员用放射线处理某大肠杆菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如上表。突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是____________。将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中，却能正常生长的原因最可能是_____________。

(2)上图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中。若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖甘酶，并能将培养基中含有的IPTG和x-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落；pUC118还携带了氨苄青霉索抗性基因。据此可知，作为受体的大肠杆菌应______，以便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。图中获取人体基因时所用到的酶是_______试管I中必须加入的酶是___________，将利用氯化钙溶液处理(增加其细胞壁的通透性)过的受体大肠杆菌置于试管Ⅱ中，并加入在试管I中制备好的人体基因。

(3)图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入__________、_________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

(4)将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：

①．_________________________________；

②．_________________________________。

(选做题)下图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答：

(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有__________、_________、__________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_____________。

(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_____________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物____________。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是__________，其合成的产物是____________。

(4)在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_____________。