- DNA重组技术的基本工具
- 共1894题
下图为转基因抗病香蕉的培育过程流程图,其中质粒上的PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。请据图回答下列问题:
(1)形成重组质粒A 时,应选用限制酶_________,对__________进行切割。
(2)一个质粒被限制酶EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ同时切割后可得到__________个DNA片段,_________个黏性末端。
(3)图中①②表示组织培养过程中香蕉组织细胞的__________。该技术表明,当植物细胞处于_________ 状态时,在一定的营养物质、___________和其他外界条件的作用下,可表现出全能性,发育成完整植株。
(4)图中①过程_____________(需要/ 不需要)光照。通过①过程产生的愈伤组织细胞与根韧皮部细胞形态结构不同,其根本原因是______________________。
(5)在转基因抗病香蕉培育过程中,受体细胞如果采用形成层组织细胞,与采用叶肉组织细胞相比较,其优点是___________。
正确答案
(1)PstⅠ和EcoRⅠ(1)Pst I和EcoR 含抗病基因的DNA和质粒
(2)3 4
(3)脱分化和再分化 离体 植物激素
(4)不需要 基因的选择性表达
(5)全能性高
含抗病基因的DNA和质粒
(2)3 4
(3)脱分化和再分化 离体 植物激素
(4)不需要 基因的选择性表达
(5)全能性高
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图9所示,请回答下列问题:
(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用SalⅠ酶切,酶切产物用______催化连接后,两个DNA片段的连接结果有________种。
(2)在构建重组质粒时,应选用______两种酶对_______进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性。
(3)为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入________,理由是________。
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_________技术,愈伤组织经_________进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加__________。
正确答案
(1)DNA连接酶 3
(2)SalⅠ、HindⅢ 质粒和含抗盐基因的DNA
(3)氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏
(4)植物组织培养 细胞培殖和分化 植物激素(生长调节剂、生长素和细胞分裂素)
图为DNA分子的切割和连接过程。
(1)EcoRⅠ是一种_______酶,其识别序列是________,切割位点是_______与_______之间的_______键。切割结果产生的DNA片段末端形式为____。
(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是_______连接酶,此酶的作用是在______与_______之间形成_______键而起“缝合”作用。还有一种连接平末端的连接酶是__________。
正确答案
(1)限制性核酸内切 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 磷酸二酯 黏性末端
(2)E·coliDNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 磷酸二酯 T4DNA连接酶
下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题:
(1)图中cDNA文库_______(填“大于”“等于”或“小于”)基因组文库。
(2)①过程提取的DNA需要_________的切割,B过程是__________。
(3)为在短时间内大量获得目的基因,可用________扩增的方法,其原理是___________。
(4)目的基因获取之后,需要进行________,其组成必须有__________以及标记基因等。此步骤是基因工程的核心。
(5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是___________,其能否在此植物体内稳定遗传的关键是_________可以用_________技术进行检测。
(6)如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性,需要对现有蛋白质进行改造,这要通过基因工程延伸——蛋白质工程。首先要设计预期的_______,再推测应有的氨基酸序列,找到相对应的_________。
(7)除植物基因工程硕果累累之外,在动物基因工程、基因工程药物和基因治疗等方面也取得了显著成果,请列举出至少两方面的应用:__________________。
正确答案
(1)小于
(2)限制酶 反转录
(3)PCR技术 DNA复制
(4)基因表达载体的构建 启动子、终止子、目的基因(复制原点可不答)
(5)农杆菌转化法 目的基因是否整合到植物细胞的染色体上 DNA分子杂交
(6)蛋白质结构 脱氧核苷酸序列
(7)乳腺生物反应器,体外基因治疗复合型免疫缺陷综合征(其他合理均给分)
限制性同切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
(1)请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
(2)请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
(3)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来?为什么?
正确答案
(1)
(2)
(3)能,因为形成的黏性末端相同
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