热门试卷

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的功能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．根据材料回答下列问题．

（1）实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液．加入柠檬酸钠的目的是______．

（2）在对样品进行处理时，主要包括______、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤．其中透析技术的原理是______．

（3）同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的______、______以及分子的形状等．

（4）同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白分离（如图一），他在操作中加样的正确顺序是______，在执行图一中②所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该______（打开或关闭）

（5）图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是______．

下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究，请协助完成有关问题：

材料仪器：新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等．

化学试剂：pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂（与NH4+反应出现黄色或红棕色沉淀）、饱和（NH4）2SO4溶液、生理盐水等．

实验步骤：

（1）样品获取：向新鲜猪血中加入______，静置一段时间后取上层______．

（2）盐析法粗提蛋白质：

①向血浆中加入一定体积的饱和（NH4）2SO4溶液，使（NH4）2SO4的浓度达到50%，充分混合后静置、离心，取沉淀物．

②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解，再向其中加入一定体积的饱和（NH4）2SO4溶液，使（NH4）2SO4的浓度达到33%，充分混合后静置、离心，取沉淀物．

③重复步骤①、②2～3次，最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品．

盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是______，重复步骤①、②的主要目的是______．

（3）透析除盐：将粗提品装入透析袋，以pH为7.4的缓冲液作透析液，每隔4h更换一次透析液，每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH4+的量．利用缓冲液作透析液的目的是______．检测中，若观察到透析液______时，即可终止透析．

（4）凝胶色谱法分离：透析后的样品经凝胶柱洗脱，获得纯净血浆某白蛋白样品．

（5）分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性，解聚成单条肽链．在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小．如图为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果．根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理由是______．

红细胞含有大量血红蛋白，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2．我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．根据材料回答问题：

（1）实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，目的是______．

（2）提取和分离血红蛋白的程序是：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定．

①在样品处理步骤中，洗涤红细胞的目的是______，用______溶液洗涤，洗涤后离心分离的速度和时间要求是______，离心后的上清液没有______就说明红细胞已洗涤干净．

②在粗分离步骤中，透析的目的是______．

③纯化步骤用凝胶色谱法，图一操作中加样的正确顺序是______，在执行图一中②所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该______（填“打开”或“关闭”）．图二是利用样品分离得到的结果，则图二中蛋白质分子量最小的是______．

④纯度鉴定步骤，利用琼脂糖凝胶电泳技术，将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的______、______以及分子的形状等．而加入SDS后，使得蛋白质的迁移率只取决于______．

回答下列有关提取生物体内物质的问题：

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甲型血友病是由X染色体上的隐性基因导致的遗传病(H对h为显性)。图1中两个家系都有血友病发病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一个性染色体组成是XXY的非血友病儿子(Ⅳ2)，家系中的其他成员性染色体组成均正常。

(1)根据图1，        (填“能”或“不能”)确定Ⅳ2两条X染色体的来源；Ⅲ4与正常女子结婚，推断其女儿患血友病的概率是           。

(2)两个家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ(简称F8，即抗血友病球蛋白)基因碱基对缺失所致。为探明Ⅳ2的病因，对家系的第Ⅲ、Ⅳ代成员F8基因的特异片段进行了PCR扩增，其产物电泳结果如图2所示，结合图Ⅰ，推断3的基因型是          。请用图解和必要的文字说明Ⅳ2非血友病XXY的形成原因。

(3)现Ⅲ3再次怀孕，产前诊断显示胎儿(Ⅳ3)细胞的染色体为46，XY；F8基因的PCR检测结果如图2所示。由此建议Ⅲ3             。

(4)补给F8可治疗甲型血友病。采用凝胶色谱法从血液中分离纯化F8时，在凝胶装填色谱柱后，需要用缓冲液处理较长时间，其目的是                      ；若F8比某些杂蛋白收集到，说明F8的相对分子质量较这些杂蛋白    ______     。

(5)利用转基因猪乳腺生物反应器可生产F8。要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的          等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有   _______ 。

(6)为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入            ，构成重组胚胎进行繁殖。

PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖 凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子鉴定。下图是电泳装置和电泳结果：

(1)与电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是__________，叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是_______________。

(2)PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。依据的原理是____________。

(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽由___________种氨基酸构成。

(4)图4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定的四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：F1～F4中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？__________________，______________________。

回答下列与细胞有关的实验问题。

(1)下列4项实验中，需保持细胞生理活性的有____(填序号)。

①观察叶绿体和原生质的流动 ②观察洋葱鳞片叶内表皮细胞中DNA的分布 ③探究酵母菌的呼吸方式 ④红细胞中血红蛋白的提取和分离

(2)按下面步骤进行质壁分离实验。

步骤一：在洁净的载玻片中央加一滴清水，取一片藓类小叶，盖上盖玻片。

步骤二：从盖玻片一侧滴入0.3g/mL的蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，使盖玻片下面的藓类小叶浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中。

步骤三：在显微镜下观察，结果如图所示。

①．图中A、B处的颜色分别是________。

②．如果上述实验步骤二中从盖玻片的一侧滴入的是加有伊红(植物细胞不吸收的红色染料)的0.3g/mL的蔗糖溶液，则在显微镜下观察到A、B处颜色分别是_________。

③．如果将步骤二中浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中的藓类小叶的装片，放在80℃条件下处理一段时间(装片中的藓类小叶保持在0.3g/mL的蔗糖溶液中)。在显微镜下清晰地观察到细胞结构后，为更准确地判断A处颜色，对显微镜的操作方法是______、______。如果A处呈绿色，可能的原因是______________。

下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳，分离效果最好？

(1)血清清蛋白(pI=4.9)和血红蛋白(pI=6.8)；

(2)肌红蛋白(pI=7.0)和胰凝乳蛋白酶原(pI=9.5)；

(3)卵清蛋白(pI=4.6)、血清清蛋白(pI=4.9)和脲酶(pI=5.0)。