- 血红蛋白的提取和分离
- 共132题
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:______、______、______和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是________。
②.以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞洗涤、_______、分离血红蛋白溶液。
③.洗涤红细胞的目的是________,你如何知道红细胞已洗涤干净?_________。
④.分离红细胞对离心速度及离心时间的要求分别是__________________。
⑤.如若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_______________________。
正确答案
(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
(2)①.防止血液凝固 ②.血红蛋白的释放 ③.去除杂蛋白 离心后的上清液没有黄色 ④.低速500r/min、短时间如2min ⑤.离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:_______、_______、_______和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是_____________________。
②.在样品处理中包括红细胞的洗涤、___________________、分离血红蛋白溶液、透析。
③.洗涤红细胞的目的是____________,你如何知道红细胞已洗涤干净?___________。
④.分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是_________________。
⑤.若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_____________________。
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①.透析的目的是_____________________________。
②.透析的原理是_____________________________。
(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①.样品纯化的目的是__________________。
②.血红蛋白有什么特点?____________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义?____________________。
正确答案
(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
(2)①.防止血液凝固 ②.血红蛋白的释放 ③.去除杂蛋白 离心后的上清液没有黄色 ④低速短时间离心,如500r/min离心2min ⑤.离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度
(3)①.去除相对分子量较小的杂质 ②.透析袋能使小分子自由进出,而大分子则保留在袋内
(4)①.通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去 ②.血红蛋白呈现红色 在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液,这使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作。
(选做题)科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白,这种蛋白质具有极强的抗菌能力,受到研究者重视。
(1)分离该抗菌蛋白可用电泳法,其原理是根据蛋白质分子的__________________、大小及形状不同,在电场中的____________不同而实现分离。
(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供_____________和_____________。
(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后,比较两种培养基中菌落的________________,确定该蛋白质的抗菌效果。
(4)细菌培养常用的接种方法有________________和________________。实验结束后,对使用过的培养基应进行_________处理。
正确答案
(1)电荷(带电情况) 迁移速度
(2)碳源 氮源
(3)数量
(4)平板划线法 稀释涂布平板法(稀释混合平板法) 灭菌
(附加题)凝胶色谱法也称做分配色谱法,是根据相对分子量的大小分离蛋白质的有效方法。回答以下问题:
(1) 加入到色谱柱的液体是透析过的样本,那么透析的目的是__________。
(2) 在色谱柱中,____的蛋白质会扩散到凝胶颗粒中,该蛋白质在色谱柱中的路程_____,转移速度________。
(3) 用凝胶色谱法分离血红蛋白,当________接近色谱柱低端时,用试管收集到的蛋白质主要是血红蛋白。
正确答案
(1)除去样品中分子量较小的杂质
(2)相对分子量较小 较长 较慢
(3)红色蛋白质
某同学在实验课前从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血,并在采血容器中预先加入了抗凝血剂柠檬酸钠,取血回来马上进行实验,请回答有关红细胞洗涤的问题:
(1)洗涤红细胞的目的是_______________。
(2)你如何知道红细胞已洗涤干净?________________。
(3)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是________________。
(4)如若离心速度过高和时间过长结果会怎样?___________________。
正确答案
(1)去除杂蛋白
(2)离心后上清液中没有黄色
(3)低速(如500r/min),短时间(如2min)
(4)离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞, 影响后续血红蛋白的提取纯度。
凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果,目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。据下图回答问题:
(1)a、b均为蛋白质分子,其中先从层析柱中洗脱出来的是_________,原因是__________。
(2)自己制作凝胶色谱柱时,在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由________替代。
(3)装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡存在,原因是__________。
(4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体_________(填“相同”或“不同”),洗脱时,对洗脱液的流速要求是______________。
正确答案
(1)a a的相对分子质量大,无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快
(2)尼龙网和尼龙纱
(3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果
(4)相同 保持稳定
下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入和洗脱示意图。请据图回答下列问题。
(1)在加样品示意图中,正确的顺序是___________。
(2)用吸管加样品时,应注意正确操作,分别是__________、__________、____________。
(3)待___________时,才加入缓冲溶液。
(4)待样品____________接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每________mL收集一管,连续收集。
正确答案
(1)④→①→②→③
(2)不能破坏凝胶面 贴着管壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动
(3)完全进入凝胶层
(4)红色的蛋白质 5
红细胞内含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或者CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步:_______、粗分离、纯化和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是__________。
②.以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞的洗涤、________、________。
(3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离,其方法是__________。
(4)然后通过_______将样品进一步纯化,最后经________进行纯度鉴定。样品纯化的目的是__________。
(5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速率,从而实现样品中各种分子的分离。
正确答案
(1) 样品处理 纯度鉴定
(2)①.防止血液的凝固 ②.血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
(3)透析
(4)凝胶色谱法 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
(5)分子本身的大小
(附加题)红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题:
(1)实验前取新鲜血液,要在采血器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是____________。
(2)在对样品进行处理时,主要包括______、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技术的原理是__________。
(3)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离,在电泳过程中,影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的______、______以及分子的形状等。
(4)同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离(如图一),他在操作中加样的正确顺序是_________,在执行图一中②所示操作时,色谱柱下端连接的尼龙管应该______(打开或关闭)。
(5)图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果,则图三中与图二中蛋白质P对应的是____________。
正确答案
(1)防止血液凝固
(2)红细胞的洗涤 小分子可以自由进出透析袋(半透膜),而大分子不能通过
(3)大小 带电性质
(4)④①②③ 关闭
(5)丙
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)分离蛋白质分子的一种常用方法是___________,是根据__________分离蛋白质的有效方法。
(2)血红蛋白提取和分离的程序可分为__________、___________、_________和纯度鉴定。
(3)洗涤红细胞的目的是__________,以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞,分离时采用低速短时间_________,然后用胶头吸管吸出上层透明的___________,将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯,再加入_________洗涤,如此重复,直至上清液中没有黄色。
(4)将洗涤好的红细胞倒入烧杯中,加入_________和________充分搅拌,红细胞破裂,释放出血红蛋白。
(5)腐乳中含有丰富的蛋白质及其水解产物,味道鲜美。其制作过程中所用的微生物主要是___________,在制作过程中,加盐的作用是__________、__________,腐乳表面往往有一层致密的皮,这层皮实际上是微生物的____________,它对人体无害。
正确答案
(1)凝胶色谱法 相对分子质量
(2)样品处理 粗分离 纯化
(3)去除杂蛋白 离心 黄色血浆 五倍体积的生理盐水
(4)蒸馏水 40%体积的甲苯
(5)毛霉 析出豆腐中的水分 抑制微生物的生长,避免豆腐块腐败变质 菌丝
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