热门试卷

RT-PCR是将mRNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术，具体过程如图所示，请回答：

（1）过程①需要加入缓冲液、原料、______、______ 和引物A等．

（2）过程②首先要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是______，该反应体系中所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受______℃高温．

（3）决定RT-PCR扩增片段的是______，要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要______个引物B．

（4）利用RT-PCR技术可用于对某些微量RNA病毒的检测，并可提高检测的灵敏度，原因是______．

（5）RT-PCR过程中主要通过对______的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应高效有序地进行．

近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体．

（1）加热使DNA双链打开，这一步是打开______键，称为______，在细胞中是在______酶的作用下进行的．

（2）当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程中的原料是______，遵循的原则是______．

（3）PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶以外，至少还要三个条件，即：液体环境、适宜的______和______．

（4）通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次之后，则15N标记的脱氧核苷酸链占全部脱氧核苷酸链总数的比例为______．

番茄果实成熟过程中，某种酶（PG）开始合成并显著增加，促使果实变红变软．但不利于长途运输和长期保鲜．科学家利用反义RNA技术（见图解），可有效解决此问题．该技术的核心是，从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株．新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA（靶mRNA）互补形或双链RNA，阻止靶mRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的．请结合图解回答．

（1）若要将人工合成的完整反义基因克隆出成百上千的反义基因，可用______（写出中文名称）技术实现体外快速扩增．

（2）假设PCR反应中的初始只有一个DNA作为模板，n轮循环的产物中含有模板DNA链的DNA分子有______个、含有人工合成的DNA引物的DNA分子有______个．若DNA分子中共含900个碱基对，碱基数量满足：，经5次循环，至少需要向试管中加入______个腺嘌呤脱氧核苷酸（不考虑引物所对应的片段）．

（3）PCR反应中所用到的酶是______，其具有______的特性．

（4）普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，脱分化后得到______，再转接到分化培养基上，诱导出试管苗，然后进一步培养成正常植株．

资料显示，近十年来，PCR技术（DNA聚合酶链式反应技术）成为分子生物实验的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DNA的人工复制（如图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体．请据图回答：

（1）加热至94℃的目的是使DNA样品的______键断裂，这一过程在生物体细

胞内是通过______酶的作用来完成的．通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA分子的合成遵循______．

（2）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用15N标记的模板DNA分子（第一代）放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含15N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为______．

（3）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法．若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的______

A．白细胞DNA   B．病毒蛋白质 　   C．血浆抗体  　 D．病毒核酸．

近十年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制，在很短时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不在受限于活的生物体．根据PCR技术原理，回答下列问题．

（1）标准的PCR过程一般分为______、______、______三大步骤．

（2）引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段______．

（3）当温度降低时，引物与模板______端结合，在DNA聚合酶作用下，引物沿着模板延伸，此过程中原料是______，遵循的原则是______．

（4）如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不作标记，控制“94℃-55℃-72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占______．

近十年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体．

（1）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，依据的原理是：______

（2）加热使DNA双链打开，这一步是打开______键，称为______，在细胞中是在______的作用下使此键断裂．

（3）当温度降低时，引物与模板______端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸的目的是______，遵循的原则是______．

（4）PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件．即：液体环境、适宜的______和______．

（5）PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为______、______、______三个步骤．

近十年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体．

（1）加热使DNA双链打开，这一步是打开______键，在细胞中是在______的作用下使此键断裂．

（2）当温度降低时，引物与模板 3’端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程中遵循的原则是______．

（4）PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件．即：液体环境、适宜的温度和______．

（5）PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为______、______、______三个步骤．

PCR技术是把某一DNA片段在酶的作用下，在体外合成许多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质作亲子鉴定．图中是电泳装置及相应电泳结果．

（1）电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是______，叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是______．

（2）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，依据的原理是______．PCR实验步骤主要包括______．

（3）图3是把含21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，据图可推知该多肽由______种氨基酸构成．

（4）图4通过提取某小孩和其母亲以及待测定的四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱．请分析：F1～F4中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？______．

多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术．它能以极少量的DNA为模板，在几个小时内复制出上百万份相同的DNA片段．请根据所学知识回答有关PCR技术的基本原理和应用问题．

（1）在80～100℃时，DNA双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性．当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，称为______．PCR利用DNA的______原理，通过控制______控制双链的结聚与结合．

（2）为了解决高温导致DNA聚合酶是失活的问题，促成PCR技术的自动化，20世纪80年代科学家从水生耐热细菌Taq中分离得到了耐高温的______．实验室中微生物的筛选，是人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长，用于筛选目的菌株的培养基称为______．

（3）PCR反应的条件：稳定的缓冲液环境、______、分别与两条模板链结合的两种______、四种______、耐热的DNA聚合酶、能严格控制温度变化的温度设备．

（4）PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为______三步．从第二次循环开始，上一次循环的产物也作为______参与反应．DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增．如果在PCR反应中只有一个DNA片段，在6次循环后，反应体系中共有______个这样的DNA分子．

（5）简述目前PCR技术的具体应用（至少两点）______．

利用基因工程技术，可以使目的基因上特定的碱基发生替换，从而产生定向变异以获得性 能更优异的蛋白质，其基本过程如图所示，请回答：

（1）参照PCR技术，可用______方法使质粒DNA双链解开，甲过程中加入的一定长度的核苷酸链，其中一个位置碱基C替代了碱基A，其它的序列与目的基因的一条链互补，该多核苷酸链在质粒DNA复制中作为______．

（2）乙过程是表示在DNA聚合酶作用下DNA链延伸，要形成闭合环状DNA分子，还需要______酶的参与

（3）丙和丁过程表示质粒分别导入目的细胞，进行增殖并______，多代繁殖后，能指导突变蛋白质产生的质粒占总数的______．

[生物一选修l生物技术实践】

请回答下列生物技术有关问题：

（1）DNA变性后，当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又重新结合成双链，称为，PCR技术利用了DNA的______原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合．

（2）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、______和______等条件，使用过的培养基及其培养物必须经过______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散．

（3）在制备固定化酵母细胞过程中，溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温，才能加入已活化的酵母菌，目的是防止______．如果在CaCI2溶液中形成的凝胶珠颜色过浅，说明固定的酵母细胞数目______．

（4）若用花药进行离体培养则应选择花粉发育至______期的花药培养成功率最高．

已知二倍体番茄红果(A)对黄果(a)为显性，双子房(B)对多子房(b)为显性，高蔓(C)对矮蔓(c)为显性。现有三个纯系品种：Ⅰ(黄色、多子房、高蔓)，Ⅱ(黄色、双子房、矮蔓)，Ⅲ(红色、双子房、高蔓)，为了快速获取红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

(1)请完善以下实验步骤。

第一步：Ⅰ×Ⅱ→获得植株Ⅳ，让Ⅳ自交，从子代中选取黄色、多子房、矮蔓植株Ⅴ。

第二步：_______________________。

第三步：_______________________。

(2)将上述植株V的离体细胞与Ⅲ的离体细胞融合，形成杂种细胞。

①．促进融合时常采用的化学诱导剂是________。

②．请画出该融合细胞中控制红色与黄色这对性状的染色体组成图，并标明相关基因。

(3)据报道，番茄红素具有一定防癌效果。科学家将含有酵母S—腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因(简称S基因)cDNA片断导入普通番茄植株，培育了番茄红素高的新品种。

①．获取cDNA片段的方法是_________。

②．假设S基因的一条链A和T的总量为2400个，占该片段总碱基的60%，用PCR扩增该基因，该基因复制n次共要dGTP__________个。

③．为确保S基因在番茄中表达，在构建基因表达载体时应插入特定的____________。

④．将基因表达载体导入番茄的方法有农杆菌转化法和___________等。

近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图所示)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。

(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开______键，称为______，细胞中氢键是在_____的作用下断裂的。

(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2条DNA分子，此过程中原料是___________，遵循的原则是__________________。

(3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的___________和___________。

(4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次后，则15N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为_______。