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简答题

PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下,合成许多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段;电泳技术则是在外电场作用下,利用分子携带的净电荷不同,把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖 凝胶)中进行分离和分析的实验技术,利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子鉴定。下图是电泳装置和电泳结果:

(1)与电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较,后者使用的介质是__________,叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是_______________。

(2)PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。依据的原理是____________。

(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解,得到的氨基酸混合物进行电泳的结果,故可推知该多肽由___________种氨基酸构成。

(4)图4通过提取某小孩和其母亲,以及待测定的四位男性的DNA,分别由酶处理后,生成含有若干DNA片段,并进行扩增得到的混合物,然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱,请分析:F1~F4中,谁是该小孩真正生物学上的父亲?为什么?__________________,______________________。

正确答案

(1)层析液;各种色素随层析液在滤液上的扩散速度不同

(2)碱基互补配对原理

(3)6

(4)F2;C和F2两者的DNA指纹图谱完全相同

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简答题

回答下列与细胞有关的实验问题。

(1)下列4项实验中,需保持细胞生理活性的有____(填序号)。

①观察叶绿体和原生质的流动 ②观察洋葱鳞片叶内表皮细胞中DNA的分布 ③探究酵母菌的呼吸方式 ④红细胞中血红蛋白的提取和分离

(2)按下面步骤进行质壁分离实验。

步骤一:在洁净的载玻片中央加一滴清水,取一片藓类小叶,盖上盖玻片。

步骤二:从盖玻片一侧滴入0.3g/mL的蔗糖溶液,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次,使盖玻片下面的藓类小叶浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中。

步骤三:在显微镜下观察,结果如图所示。

①.图中A、B处的颜色分别是________。

②.如果上述实验步骤二中从盖玻片的一侧滴入的是加有伊红(植物细胞不吸收的红色染料)的0.3g/mL的蔗糖溶液,则在显微镜下观察到A、B处颜色分别是_________。

③.如果将步骤二中浸润在0.3g/mL的蔗糖溶液中的藓类小叶的装片,放在80℃条件下处理一段时间(装片中的藓类小叶保持在0.3g/mL的蔗糖溶液中)。在显微镜下清晰地观察到细胞结构后,为更准确地判断A处颜色,对显微镜的操作方法是______、______。如果A处呈绿色,可能的原因是______________。

正确答案

(l)①③

(2)①.无色、绿色  ②.红色、绿色  ③.改变光圈大小   调节反光镜(电光源亮度)   高温下细胞膜、叶绿体膜失去选择透过件,叶绿素等色素进入A处

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下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳,分离效果最好?

(1)血清清蛋白(pI=4.9)和血红蛋白(pI=6.8);

(2)肌红蛋白(pI=7.0)和胰凝乳蛋白酶原(pI=9.5);

(3)卵清蛋白(pI=4.6)、血清清蛋白(pI=4.9)和脲酶(pI=5.0)。

正确答案

(1)血清清蛋白的pI=4.9,血红蛋白的pI=6.8,两者的平均值为5.85,即(4.9+6.8)/2=5.85。因此,在pH5.85时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时血清清蛋白向阳极移动,而血红蛋白向阴极移动。

(2)肌红蛋白的pI=7.0,胰凝乳蛋白酶原的pI=9.5,两者的平均值为8.25,即(7.0+9.5)/2=8.25。因此,在pH8.25时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时肌红蛋白向阳极移动,而胰凝乳蛋白酶原向阴极移动。

(3)卵清蛋白的pI=4.6,血清清蛋白的pI=4.9,脲酶的pI=5.0。在pH4.9时将样品点在中间电泳,分离效果最好。此时血清清蛋白留在原点,卵清蛋白向阳极移动,而脲酶向阴极移动。

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蛋白质分子中,氨基酸的α-氨基和α-羧基虽然大部分结合成为肽键,但是蛋白质分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团,如肽链末端的α-氨基和α-羟基、天冬氨酸和谷氨酸残基中的羟基、赖氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团,所以蛋白质是两性电解质。在酸性溶液中,碱性基团的解离增大,使蛋白质带正电荷;在碱性溶液中,酸性基团的解离加强,使蛋白质带负电荷。当溶液到达某一pH时,蛋白质可因内部酸性和碱性基团的解离相等而呈等电状态,这时的溶液pH叫做蛋白质的等电点。不处于等电点状态的蛋白质分子的正、负电荷量是不相同的。试回答下列问题:

(1)多数蛋白质的等电点近于5,一般含碱性基团较多的蛋白质的等电点______(填“偏高”或“偏低”)。

(2)根据等电点的不同,你能用____方法将不同种类的蛋白质分子分开。

(3)简述根据等电点分离不同种类的蛋白质分子的原理。

正确答案

(1)偏高

(2)电泳

(3)调节电泳槽中缓冲液的pH,使某种蛋白质处于等电点状态,而其他蛋白质带有电荷,在电场作用下,带有正、负电荷的蛋白质分别移向两极,而不带电荷的蛋白质留在原处。

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某同学在实验课前从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血,并在采血容器中预先加入了抗凝血剂柠檬酸钠,取血回来马上进行实验。请回答红细胞洗涤的有关问题:

(1)洗涤红细胞的目的是________________。

(2)你如何知道红细胞已洗涤干净?___________________。

(3)分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是___________________。

(4)如若离心速度过高或时间过长,则结果会怎样?______________________。

正确答案

(1)去除血浆蛋白

(2)离心后的上清液没有黄色

(3)低速如500r/min,短时间如2min

(4)离心速度过高或时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提纯

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下列4项实验中,需保持细胞生理活性的有______(填序号)。

①观察叶绿体和原生质的流动 ②观察洋葱鳞片叶内表皮细胞中DNA的分布 ③探究酵母菌的呼吸方式 ④红细胞中血红蛋白的提取和分离

正确答案

①③

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下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置,请回答下列问题。

(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_____功能。

(2)甲装置中,B是血红蛋白溶液,则A是________;乙装置中C溶液的作用是________。

(3)甲装置用于_________,目的是_______。用乙装置分离蛋白质的方法叫________,是根据________分离蛋白质的有效方法。

(4)用乙装置分离血红蛋白时,待________时,用试管收集流出液,每5mL收集一管,连续收集。

正确答案

(1)运输

(2)磷酸缓冲液   洗脱血红蛋白

(3)透析(粗分离)   去除样品中相对分子质量较小的杂质   凝胶色谱法   相对分子质量的大小

(4)红色的蛋白质接近色谱柱底端

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某同学使用下列装置或操作进行有关实验,请据图回答问题:

(1)制作果酒时可选用图甲的装置。为适当提高果酒生产速率,进气口应先打开后关闭,这是因为____________;排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连,这样做的原因是______________。为研究发酵中酵母菌的生长状况,常要通过_______进行取样统计分析并测定pH值,判断取样先后顺序的主要依据是_______________。

(2)乙图中加入蒸馏水的目的是____________,此时玻璃棒使用要点是_________,以保证DNA分子结构的完整性。

(3)丙、丁用于提取和分离血红蛋白,应先对样品进行处理用图_____装置进行_______;丁图中液体Ⅱ应为__________,底端试管中首先收集到的应是相对分子质量较____(大/小)的蛋白质。

正确答案

(1)因为酵母菌是兼性厌氧型生物,先打开充气口,保证酵母菌进行有氧呼吸,增加菌体的数量;后关闭充气口,保证酵母菌进行无氧发酵,产生更多的酒精     防止污染   出料口    pH值的大小,pH值越大,取样越早

(2)降低NaCl溶液的浓度,析出DNA    轻缓,并沿同一个方向

(3)丙   透析   20mmoL/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)   大

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PCR技术可扩增DNA分子,电泳技术是将待测样品放在光滑的凝胶薄膜上,加上直流电场,利用分子带电荷不同分离和分析氨基酸和多核苷酸片段等有机物。这两项技术综合应用于现代刑侦,可以获得最可靠的证据。如下图所示是一次寻找嫌疑犯的测试结果:图甲是把遗迹中含有21个氨基酸的多肽进行水解,将氨基酸混合物进行电泳的结果;图乙是通过提取罪犯B遗迹DNA和四位嫌疑犯的DNA进行扩增,并采用特定限制酶处理后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱。

(1)在同一电场下,由于蛋白质或DNA的___________以及___________不同而产生不同的迁移方向或速度,从而实现样品的分离。

(2)在电泳过程中,带电分子会向着__________的电极移动。

(3)由甲图得知,多肽由_______种氨基酸组成;由乙图可知B最可能的对象是___________。

正确答案

(1)带电性质   分子本身大小、形状

(2)与其所带电荷相反

(3)7   F2

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简答题

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

(1)将实验流程补充完整:A为________,B为________。凝胶色谱法是根据____________而达到蛋白质分离的有效方法。

(2)洗涤红细胞的目的是去除_________,洗涤次数过少,无法除去_________;离心速度过高和时间过长会使_______一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是__________。释放血红蛋白的过程中起作用的是______________。

(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是____________。如果红色区带____________,说明色谱柱制作成功。

正确答案

(1)血红蛋白的释放   样品的加入和洗脱   相对分子质量的大小

(2)杂蛋白(血浆蛋白)   血浆蛋白   白细胞和淋巴细胞   离心后的上清液中没有黄色   蒸馏水和甲苯

(3)准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内一致均匀一致地移动

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填空题

血红蛋白的氧解离曲线为______说明第一个亚基与O2结合可______第二个亚基与O2结合,这被称为______效应。

正确答案

S型;促进;正协同

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填空题

用凝胶过滤分离蛋白质,分子量较小的蛋白质在柱中滞留的时间较______因此最先流出凝胶柱的蛋白质,其分子量最______。

正确答案

长;大

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填空题

蛋白质颗粒在电场中移动。移动的速率主要取决于______和______这种分离蛋白质的方法称为______。

正确答案

蛋白质的表面电荷量;分子量;电泳

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填空题

科学家发现家蝇体内存在着一种抗菌活性蛋白。这种蛋白具有极强的抗菌能力,受到研究者重视。

(1)分离该抗菌蛋白可用电泳法,其原理是根据蛋白质分子的________、大小及形状不同,在电场中的________不同而实现分离。

(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供_______和_______。

(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后,比较两种培养基中菌落的_______,确定该蛋白质的抗菌效果。

(4)细菌培养常用的接种方法有________和________。实验结束后,对使用过的培养基应进行________处理。

正确答案

(1)电荷(带电情况)   迁移速度

(2)碳源   氮源

(3)数量

(4)平板划线法   稀释涂布平板法(稀释混合平板法)   灭菌

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随着分子生物学的发展,人们越来越重视对蛋白质的研究。测定蛋白质的相对分子质量是研究蛋白质的一项重要技术,常用的测定方法是凝胶(由多孔性网状物质构成的颗粒,其孔能让小分子物质进出)过滤法,即在一根垂直的玻璃柱中装满凝胶,然后在其上端加入蛋白质混合液并用缓冲液进行洗脱。根据各种蛋白质洗脱的先后顺序可以比较它们的相对分子质量大小。不同蛋白质相对分子质量大小与洗脱液体积的关系如下图所示。请回答下列问题:

(1)蛋白质的基本单位是___________,其结构通式为__________。

(2)把含有肌红蛋白(相对分子质量为16900)、血清蛋白(相对分子质量为68500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35000)、牛胰岛素(相对分子质量为5700)的蛋白质混合液进行凝胶过滤,最先洗脱出来的是______。

(3)某人欲用凝胶过滤法比较A、B两种蛋白质的分子量大小,请你选择需要的材料,帮助其设计实验步骤,并预测实验结果,以得出相关结论。

实验步骤:_____________________________。

实验结果:_____________________________。

(4)若由凝胶过滤法测得某一由2条肽链构成的蛋白质的相对分子质量为m,且已知氨基酸的平均相对分子质量为n,则该蛋白质是由_________个氨基酸经脱水缩合而成的。

正确答案

(1)氨基酸     

(2)血清蛋白

(3)交替将含有A、B两种蛋白质的混合液加入装满凝胶的玻璃柱上端并用缓冲液进行洗脱,检测它们洗脱的先后顺序  若A先于B洗脱出来,则A的相对分子质量大于B;若B先于A洗脱出来,则B的相对分子质量大于A

(4)(m-36)/(n-18)

下一知识点 : 植物有效成分的提取
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