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填空题

番木瓜,俗称木瓜,有“百果之王”的美称,在人们所食的38种常见水果中,营养价值居首位,从种植到结果只要9-15个月,所以人们一直希望找到与番木瓜果实质量、产量、抗病性、环境适应性等有关的基因,更难得的是它是第一种进行转基因实验的水果。2004年12月,我国南开大学与美国夏威夷大学共同主持番木瓜的基因组测定工作,30余家单位参与该工作,并于2008年4月在《自然》杂志上以封面文章的形式发表了《转基因热带水果植物--木瓜的基因组草图》的成果论文。请回答下列有关问题:

(1)研究组首先从番木瓜细胞中提取出DNA,使用“鸟枪法”将其打成碎片,需要用到的工具酶是_____。经过定位和测序后,再重新连接成整体,用到的工具酶是__________。

(2)“抗环斑病毒的番木瓜”细胞中的抗病毒基因的表达过程(图解表示)是:_________。

(3)木瓜松软的果肉和香甜的口感,与它有很多用于细胞壁松弛和淀粉制造的酶有关,控制这些酶的基因结构中编码区的特点是_________________。

(4)将已导入抗病毒基因的木瓜细胞培养成植株,需要通过下列过程:,①能被培养成为④的根本原因是___________。这个过程中需要用到________(激素);②表示_______,它的特点是_________________。

正确答案

(1)限制性内切酶(限制酶)   DNA连接酶

(3)间隔的,不连续的(有内含子和外显子之分)

(4)细胞具有全能性   生长素和细胞分裂素(缺一不可)   愈伤组织   细胞排列疏松,高度液泡化,无定形状态的薄壁细胞

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简答题

(附加题)植物像人一样也会生病,引起植物生病的微生物称为病原微生物,主要有病毒、真菌和细菌等。烟草由于受到烟草花叶病毒的侵染而减产,我国科学家利用基因工程技术成功地培育出抗烟草花叶病毒的烟草,如图是转基因烟草培育过程示意图,据图分析回答下列问题:

(1)质粒是基因工程中常用的载体,质粒是一种裸露的、结构简单、具有自我复制能力的很小的____分子,至少有一个至多个________位点。载体除质粒之外,还可以用______等。

(2)如图是基因的一个片段,切断a处的工具酶是________,切断b处的酶是_______。

(3)作为目的基因载体的质粒往往要带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因主要用于_____。

(4)基因表达载体导入烟草细胞常用的方法是_________。

(5)转基因工程改良动植物品种,最突出的优点是___________。

(6)一个烟草体细胞通过组织培养技术培育成一个完整的烟草植株个体,原理是_______。组织培养过程中,在培养基中要添加的两种激素是________。

正确答案

(1)环状DNA     限制酶切割     动植物病毒

(2)限制酶     DNA解旋酶

(3)检测目的基因是否导入受体细胞

(4)农杆菌转化法

(5)按照人类的需要,定向改变生物的遗传性状

(6)植物细胞的全能性     生长素和细胞分裂素

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简答题

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点。下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因),其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤,Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答。

(1)在构建基因表达载体时,可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,在此实例中,应该选用限制酶_______,分别对_______进行切割,切割后产生的DNA片段分别为_______种。

(2)培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应使基因表达载体Ⅰ中含有_______,作为标记基因。

(3)研究人员通常采用______法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_______技术,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

(4)利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的________________。

正确答案

(1)Pst I、Sam I   含鱼的抗冻蛋白基因的DNA、质粒   4、2

(2)抗氨苄青霉素基因(ampr)

(3)农杆菌转化(或基因枪法等)   抗原-抗体杂交

(4)脱分化、再分化

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简答题

下图为科学家通过基因工程方法培育转基因抗虫棉的大致过程。请据图分析回答:

(1)图中①过程需要的酶有__________,图中A的组成,除了目的基因外,还必须有_______和复制原点。

(2)农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有__________的特点。图中②过程的方法称为_________。

(3)目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是____________,检测时常采用的方法是___________。

(4)图中③过程常采用的生物技术是___________,此技术首先需通过细胞的__________过程,培养出__________,然后经再分化形成小植株,其原理是_________。

(5)图中③过程培育到____________,将其包上人工种皮,可制成神奇的人工种子。

正确答案

(1)限制酶和DNA连接酶      启动子、终止子、标记基因

(2)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上     农杆菌转化法

(3)目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上     DNA分子杂交技术

(4)植物组织培养     脱分化     愈伤组织     植物细胞的全能性

(5)胚状体(不定芽、腋芽、顶芽)

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假设A、b代表玉米的优良基因,这两种基因是自由组合的。现有AABB、aabb两个品种,为培育出优良新品种AAbb,可以采用的方法如图所示。

(1)由品种AABB、aabb经过①②③过程培育出新品种的育种方法称为_______,应用的原理是_________。若经过②过程产生的子代总数为1552株,则其中基因型为AAbb的植株理论上有________株。

(2)过程⑤常采用________由AaBb得到Ab个体。与“过程①②③”的育种方法相比,“过程⑤⑥”育种的优势是___________________________。

(3)过程④在完成目的基因与运载体的结合时,必须用到的工具酶是____________。与“过程⑦”的育种方法相比,“过程④”育种的优势是_________________。

正确答案

(1)杂交育种    基因重组 97

(2)花药离体培养  明显缩短了育种年限

(3)限制酶、DNA连接酶      定向地改造生物的遗传性状

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简答题

某科学家为获得纯合高蔓抗病番茄植株,采用了下图所示的方法,图中两对相对性状中高蔓对矮蔓为显性,感病对抗病为显性,两对性状独立遗传,据图分析:

(1)过程①的自交代数越多,纯合高蔓抗病植株比例会越来越_______(填“高”或“低”),若逐代筛选掉不符合要求的植株,那么如果从杂交所得的F1杂合体算起自交→淘汰→自交→淘汰……到第n代时,表现型符合要求的植株中杂合子的比例为_______(可以用字母表示),按这样的比例,自交_______代后才能使纯合植株的比例达到95%以上。

(2)过程②可以取任一植株的适宜花药作培养材料,经过_______形成愈伤组织和_______继续发育成单倍体,再进行加倍处理,选取表现型符合条件的植株。

(3)过程③是直接通过基因工程导入某种基因来获得理想的基因型植株,其思路如上图所示。请问图中酶A是指__________,酶B是指__________。

(4)研究者偶然发现,获得的纯合高蔓抗病植株的一些个体的果实中维生素c的含量显著高于其他植株,设计两个方案,检测这一性状是否能遗传;若能遗传,确定该性状的遗传方式是细胞质遗传还是细胞核遗传。

方案一:

①.选取_______×♂维生素c含量正常个体

②.若子代中总有维生素c含量较高的个体出现,是否能确定该性状为稳定遗传?

③.若子代中没有维生素c含量较高的个体出现,是否确定不能遗传?

方案二:若已确定该性状为稳定遗传,则利用以下方案确定遗传方式:

第一步:选取♀_________×♂_________杂交。

第二步:测定子代果实中的维生素c含量。

第三步:再选取♀________×♂_________杂交。

第四步:测定子代果实中的维生素c含量。

实验结果:如果_____________________________;如果____________________________。

正确答案

(1)高  2/(1+2N)   6

(2)脱分化   再分化

(3)DNA限制性内切酶   DNA连接酶

(4)方案一:①.♀维生素c含量较高的个体。②.不一定。因为还有可能是环境作用的结果。③.不一定。有可能是隐性基因决定的,在子一代中不一定能表现出来。

方案二:第一步:♀维生素c含量高×♂维生素c含量正常   第三步:♀维生素c含量正常×♂雏生素c含量高

实验结果:如果正反变结果一致,可判定为细胞核遗传   如果正反交结果不一致,可判定为细胞质遗传

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简答题

(附加题)下图为利用生物技术获得抗虫棉的过程示意图。据图回答:

(1)在培育转基因植物的过程中,卡那霉素抗性基因(kanr)常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。A过程需要的酶有________、_______。C过程的培养基除含有必要的营养物质、琼脂和激素外,还必须加入_________。

(2)离体棉花叶片组织经C、D过程成功地培育出了转基因抗虫植株,此过程涉及的细胞工程技术是_____________,该技术的原理是_____________。

(3)科学家将植物细胞培养到____________,包上人工种皮,制成了神奇的人工种子,以便更好地大面积推广培养。

(4)如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测,D过程应该用_________作为探针。

正确答案

(1)限制性核酸内切酶      DNA连接酶     卡那霉素

(2)植物组织培养      植物细胞的全能性

(3)胚状体

(4)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因

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简答题

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点。下图是转基因抗病香蕉的培育过程,含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:

(1)用图中的质粒和目的基因构建重组质粒,不能使用SmaⅠ酶切割,原因是__________。

(2)构建含目的基因的重组质粒A时,选用_________限制酶对_________进行切割,可以防止_________和____________的外源DNA片段自身环化。

(3)①~⑤中存在碱基互补配对的是_________。

(4)香蕉组织细胞具有___________,因此,可以利用组织培养技术将导入目的(抗病)基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中④、⑤依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的____________、___________。

(5)培养皿中的培养基除添加营养物质外,还需要添加___________、____________等植物激素,其目的是诱导外植体完成④、⑤生理过程,培养成完整的植物体。

(6)如何检测图示过程最终是否取得成功?____________。

正确答案

(1)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

(2) BamHI和HindⅢ     外源DNA      目的基因      质粒

(3)①④⑤

(4)全能性     脱分化     再分化

(5)生长素      细胞分裂素

(6)用虫子感染转基因香蕉,观察其是否抗虫

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(附加题)土壤农杆菌是一种细菌,在转基因植物研究上有很重要的应用。下图是某植物转基因技术流程示意图:

(1)形成重组DNA的过程需要的酶有______和_____。

(2)所谓农杆菌转化是指让其侵染植物组织细胞从而把目的基因导入植物细胞,在这个过程中_________(是/不是)所有细胞都导入了目的基因。

(3)图中的植株再生利用的是_____技术,其理论基础(原理)是___________。

(4)培养基中除含有必要的营养物质、琼脂和激素(如:_________和_________)外,还必须加入_________。

正确答案

(1)限制酶     DNA连接酶

(2)不是

(3)植物组织培养     植物细胞全能性

(4)生长素     细胞分裂素     卡那霉素

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填空题

作物育种的方法有多种。请针对下面两种方法回答问题:

方法1  方法2

(1)方法1称为__________;方法2称为_________。

(2)方法1的“新性状植株”不能都作为良种保留,根本原因是________。

(3)方法2产生“愈伤组织”的过程,称为细胞的________,它形成“胚状体”的过程可称为________,此方法的基本技术手段可称为_______。上述过程证实了已分化的植物体细胞仍具有_______性。

(4)两种方法都能获得新品种,但二者的本质区别是方法1利用了_________的变异;方法2利用了________的变异。

正确答案

(1)诱变育种     基因工程育种(转基因育种)

(2)突变多害少利(突变是不定向的)

(3)脱分化     再分化     植物组织培养     全能

(4)不定向    人为定向

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简答题

下图为细胞融合的简略表示,请据此回答:

(1)若A、B是植物细胞,在进行过程C之前去掉某一结构最常用的方法是_________;此过程中除了用化学法诱导融合的手段外,还利用了细胞膜的__________。

(2)由A、B至F的过程中所采用的技术手段有______________。

(3)假若A、B至D是制备单克隆抗体的过程,A为小鼠的B淋巴细胞,那么A、B形成的D细胞应该是_________,从中筛选出它的方法是在____________中培养。如何从培养液中分离出杂种细胞呢?请阅读材料后回答:

  已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。淋巴细胞中有这两种DNA合成途径,但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇促融,获得杂种细胞。请回答:

①.试管中除融合的杂种细胞处,还有_____种细胞。

②.设计一方法(不考虑机械方法),从培养液中分离出杂种细胞,并说明原理。

方法:_____________________________。

原理:_____________________________。

(4)假若A为人的B淋巴细胞,受到抗原刺激后产生某种物质,并发挥重要的生理作用,与该物质的合成、加工、运输有关的生物膜有_____________________。(答两项)

正确答案

(1)酶解法     聚乙二醇(PEG)流动性

(2)植物体细胞杂交,植物组织培养

(3)杂交瘤细胞   特定的选择性培养基    ①.4

②.方法:培养基中加入氨基嘌呤,收集增殖的细胞     原理:加入氨基嘌呤后,使D合成途径阻断,仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖,但鼠淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖

(4)内质网、高尔基体、细胞膜、线粒体

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小麦的高杆性状(D)对矮杆性状(d)为显性,抗锈病性状(T)对易染病性状(t)为显性,两对基因分别位于两对同源染色体上,现有纯合的高杆抗锈病和矮杆易染锈病两个品种,如果你是一位育种专家,请用不同的育种方法,设计出两套育种方案,培育出矮杆抗锈病的理想类型。

(1)方案一:所用的育种方法为_________。

步骤:____________________。

(2)方案二:所用的育种方法为_________。

步骤:____________________。

(3)总结:两种方法相比较,哪种方法育种较快_________,为什么?_______________

正确答案

(1)方案一:杂交育种

步骤:①.P: DDTT高杆抗锈病×ddtt矮杆易染锈病;②.F1: 高杆抗锈病DdTt自交;③.从F2:选育出矮杆抗锈病(ddTT或ddTt)多代连续自交,提高纯种矮杆抗锈病ddTT的比例。

(2)方案二:单倍体育种

步骤:①.P:DDTT高杆抗锈病×ddtt矮杆易染锈病

②.F1:获得高杆抗锈病DdTt→取其花粉→选育出矮杆抗锈病(dT)单倍体获得矮杆抗锈病(ddTT)纯种

(3)单倍体育种      培育后代均为纯种,从而明显缩短育种年限

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(选做题)已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产,乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此,可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内,使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。回答下列问题:

(1)为了获得丙中蛋白质的基因,在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上,推测出丙中蛋白质的_________序列,据此可利用__________方法合成目的基因。获得丙中蛋白质的基因还可用_______、________方法。

(2)在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中,常需使用________酶和_______。

(3)将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养,筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织,由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗________的危害。

(4)若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口,则该植株的种子__________(填“含有”或“不含”)丙种蛋白质基因。

正确答案

(1)基因    化学   基因文库   PCR

(2)限制     DNA连接

(3)乙种昆虫

(4)不含

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香蕉原产于热带地区,是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响,对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒(BBTV,单链环状DNA病毒)引起的香蕉束顶病,对香蕉产生的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体,由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式,缺少遗传变异性,因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平,具有重要意义。请根据上述材料,回答下列问题。

(1)简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。_____________________________。

(2)脱毒香蕉苗的获得,可采用__________的方法,此方法的依据是___________和___________。

(3)建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量,请问可用哪些方法检测病毒的存在?_________________(列举两种方法)。

(4)在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值,该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。___________________(列举两点)。

(5)如何利用afp基因,通过转基因技术获得抗寒能力提高的香蕉植株?在运用转基因香蕉的过程中,在生态安全方面可能会出现什么问题?________________(列举两点)。

(6)从细胞工程的角度出发,简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及其依据。__________________。另外,抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期,请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。__________________。

正确答案

(1)选取香蕉外植体,通过诱导脱分化产生愈伤组织,然后通过调整植物激素比例,使其再分化形成芽和根,获得大量试管苗(或通过诱导形成大量胚状体,制成人工种子,适宜条件下萌发长成幼苗)。

(2)茎尖(分生组织)组织培养    茎尖不带病毒(或病毒在植物体内分布不均匀)    植物细胞全能性

(3)①.BBTV病毒基因的检测(DNA分子杂交技术);

②.BBTV病毒蛋白的检测(获得抗血清,利用抗原一抗体的杂交反应,判断病毒是否存在)。

(4)(答出两点即可)

①.选择NaCl溶液的合适浓度,利用DNA和其他杂质在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性,达到分离目的;

②.加入一定量酒精,使部分蛋白质杂质溶解于酒精,与DNA分离;

③.加入蛋白酶,除去蛋白质杂质的干扰;

④.控制DNA提取的温度,使大多数蛋白质杂质变性。

(5)(答出两点即可)

将afp基因插入土壤农杆菌的质粒,构建表达载体,通过农杆菌的转化导入香蕉受体细胞,成功转化的香蕉细胞通过组织培养形成植株。生态安全问题包括:

①.外源基因扩散到其他物种(外源基因漂移);

②.转基因植株扩散影响生态系统的结构和功能;

③.转基因植株扩散对生物多样性的影响;

④.转基因植物残体或分泌物对环境的影响。

(6)体细胞杂交育种,其依据是将不同品种的香蕉体细胞利用细胞融合技术融合成杂种细胞后培育出抗寒香蕉品种(或体细胞诱变育种,其依据是利用诱变剂等方法使香蕉离体培养细胞发生基因突变,然后筛选培育出抗寒品种)。

蛋白质工程方法的步骤为:

①.果胶裂解酶蛋白的功能分析;

②.果胶裂解酶蛋白的结构预测和设计;

③.果胶裂解酶基因的改造。

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简答题

育种工作者利用不同的方法进行了如下四组实验。请据图回答问题。

(1)图Ⅰ过程由番茄韧皮细胞形成幼苗A的过程要经过__________形成愈伤组织,再通过_________形成幼苗,该过程依据的原理是_______。

(2)植物组织培养除了需要提供一定的营养、__________、温度和光照外,还必须在__________的条件下培养。

(3)已知番茄的红果(Y)对黄果(y)为显性,少室(M)对多室(m)为显性,控制两对相对性状的基因分别位于两对同源染色体上。用红果多室(Yymm)番茄植株的花粉进行Ⅱ、Ⅲ有关实验,则Ⅱ过程中,从花粉形成幼苗B所进行的细胞分裂方式是__________。Ⅲ过程中植物体C的基因型有__________。

(4)图Ⅲ、Ⅳ过程中需要去除细胞壁,方法为___________。

(5)在图中Ⅳ过程中,在促融因子的作用下,原生质体的融合概率大大增加,容器内至少存在__________种细胞.经过鉴别和筛选后,通常植物体D能表现出两个亲本的遗传性状,根本原因是____________。

正确答案

(1)脱分化;再分化;植物细胞全能性

(2)植物激素(生长素、细胞分裂素);无菌

(3)有丝分裂;YYmm或Yymm或yymm

(4)酶解法

(5)5种细胞;由于细胞B是番茄与马铃薯的体细胞融合而成,则细胞B具有番茄和马铃薯两亲本的遗传物质。植物体D是由细胞B经组织培养而成,细胞B的基因型决定了植物体D的基因型。故植物体D与细胞B一样具有两亲本的遗传物质。

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