- 土壤中微生物的分离与计数
- 共916题
（2015春•恩施州校级期末）下列有关硝化细菌和固氮菌的叙述中，正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、硝化细菌氧化氨，为拟核中的基因表达产物的作用，A错误；
B、圆褐固氮菌合成的生长素属于初级代谢产物，控制合成的基因在拟核DNA上，B错误；
C、硝化细菌和根瘤菌都进行有氧呼吸，所以都是需氧型生物，C正确；
D、根瘤菌主要由根毛部分侵入根的皮层内，并在皮层细胞内进行迅速大量的繁殖．同时皮层细胞由于受根瘤菌分泌物的刺激也迅速分裂，产生大量新细胞，使皮层部分的体积膨大和凸出，从而形成根瘤，D错误．
故选：C．
（1）如图是利用______法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步______分散到培养基的表面．
（2）分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4•7H2O、KCl、H2O．若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述______成分，并加入______物质，以补充______源．
（3）四位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量．在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是______．
A．一个平板，统计的菌落数是23
B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24
C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
（4）一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL）______．
（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量______，因为______．
（6）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？______，为什么？______．
正确答案
解：（1）由图可知，其采取的是平板划线法，该方法能把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO3，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．
（3）A只涂布了一个平板，B只涂布了两个平板，这两位同学的实验数据说服力不够；C其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，数据缺乏真实性，因此正确可信的是D．
（4）在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 中的菌落数是=105×23.4×
（5）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测定得密度偏低．
（6）培养基上有其他杂菌的菌落，不能肯定是该大肠杆菌的品系被污染，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程．
故答案为：
（1）平板划线 稀释
（2）NaNO3 尿素和葡萄糖 氮、碳
（3）D
（4）1.17×108
（5）多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落
（6）不能 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
解析
解：（1）由图可知，其采取的是平板划线法，该方法能把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO3，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．
（3）A只涂布了一个平板，B只涂布了两个平板，这两位同学的实验数据说服力不够；C其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，数据缺乏真实性，因此正确可信的是D．
（4）在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 中的菌落数是=105×23.4×
（5）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测定得密度偏低．
（6）培养基上有其他杂菌的菌落，不能肯定是该大肠杆菌的品系被污染，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程．
故答案为：
（1）平板划线 稀释
（2）NaNO3 尿素和葡萄糖 氮、碳
（3）D
（4）1.17×108
（5）多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落
（6）不能 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
回答有关微生物的问题．
已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A．现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如图．
（1）步骤一使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，其中含有细菌生长所需的水、______等营养物质（至少写出3种）；该培养基是______（多选）．
A．固体培养基 B．液体培养基 C．通用培养基 D．选择培养基
（2）步骤一采用______接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的，最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是______．
（3）无论是培养基（液），接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是______．
（4）步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，预测可能的结果并推测结论：
①A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，两者未分离．
②______．
③______．
（4）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量测定结果都如39题中①的情况，则应______，再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．
正确答案
解：（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，该培养基是通用培养基或液体培养基或选择培养基．
（2）由图可知，步骤一采用平板划线法接种，步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是筛选、分离两种类型的细菌．
（3）接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是防止杂菌污染．
（4）若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，若A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，说明两者未分离；若A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ；若B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ．
（5）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量都下降，说明两种细菌还未分开，则需要重复步骤1和步骤2再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．
故答案为：
（1）无机盐、碳源、氮源 B、C、D
（2）划线法 筛选、分离两种类型的细菌
（3）防止杂菌污染
（4）②A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ③B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ
（5）重复步骤1和步骤2
解析
解：（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，该培养基是通用培养基或液体培养基或选择培养基．
（2）由图可知，步骤一采用平板划线法接种，步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是筛选、分离两种类型的细菌．
（3）接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是防止杂菌污染．
（4）若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，若A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，说明两者未分离；若A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ；若B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ．
（5）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量都下降，说明两种细菌还未分开，则需要重复步骤1和步骤2再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．
故答案为：
（1）无机盐、碳源、氮源 B、C、D
（2）划线法 筛选、分离两种类型的细菌
（3）防止杂菌污染
（4）②A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ③B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ
（5）重复步骤1和步骤2
白僵菌高孢粉是国家林业局推广的高效生物杀虫剂之一，应用于多种林木和农作物害虫的防治．白僵菌分生孢子在寄主表皮、气孔或消化道上，遇适宜条件开始萌发，生出芽管．同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶等溶解昆虫的表皮，通过芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内的养分，产生各种毒素，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身．
请根据上述材料回答下面的问题．
（1）从自然菌样中筛选较理想的生产用菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→______→性能测定．白僵菌的菌样应从______中采集．
（2）分离白僵菌菌种的培养基属于______培养基．在配制白僵菌培养基时常加入蔗糖、硫酸铵、硝酸钾等成分，蔗糖属于______（营养物质）．
正确答案
解：（1）筛选理想菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定．白僵菌的菌样应从感病昆虫中采集．
（2）选择培养基是加入抗生素或某些化学物质抑制某些细菌的生长，而促进或不影响另一些细菌，如分离白僵菌菌种的培养基属于选择培养基，培养基一般都含有碳源、氮源、水、无机盐，在配制白僵菌培养基时加入蔗糖提供碳源，而硫酸铵、硝酸钾属于氮源或无机盐营养物质．
故答案为：
（1）纯种分离 感病昆虫
（2）选择 碳源
解析
解：（1）筛选理想菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定．白僵菌的菌样应从感病昆虫中采集．
（2）选择培养基是加入抗生素或某些化学物质抑制某些细菌的生长，而促进或不影响另一些细菌，如分离白僵菌菌种的培养基属于选择培养基，培养基一般都含有碳源、氮源、水、无机盐，在配制白僵菌培养基时加入蔗糖提供碳源，而硫酸铵、硝酸钾属于氮源或无机盐营养物质．
故答案为：
（1）纯种分离 感病昆虫
（2）选择 碳源
请据图分析回答问题：
（1）实验过程中培养白地霉的培养基是______．培养基定量分装前，先调节______，分装后用棉塞封瓶口，最后______处理．
（2）图中 ①过程称为______，从甲到丁的培养过程是为了______．白地霉的代谢类型为______．
（3）为确定菌体产量，图中②操作之前，应先称量______的质量．过滤后需反复烘干称量，直至______．所得菌体干重等于______．
正确答案
废液上清液
pH
灭菌
接种
扩大培养
异养需氧型
滤纸
恒重（质量基本不变）
恒重时的质量与滤纸质量之差
解析
解：（1）依据本实验目的“利用发酵废培养、获得白地霉菌体”，确定本实验中使用的培养基应该是发酵废液上清液；由于发酵废液的pH为4.3，这种pH不利霉菌生长，因此，在使用废液时，应在分装前先调节pH，最后进行密封、灭菌处理．
（2）由图中所示培养过程需要“振荡培养”以及培养液中含有丰富的有机物，可以确定白地霉的新陈代谢类型属于异养需氧型．
（3）为避免培养液成分对微生物重量的影响，在称量前，应取一定体积的培养液（一定质量）进行过滤、离心、反复洗涤等处理，烘干时，为避免水分去除不净而影响实验结果，烘干应反复烘干称量，直到连续几次称得的重量不变；计算菌体的干重应注意去除称量使用的滤纸的重量．
故答案为：
（1）废液上清液 pH 灭菌
（2）接种 扩大培养 异养需氧型
（3）滤纸 恒重（质量基本不变） 恒重时的质量与滤纸质量之差
某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验．实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数．请回答与此实验相关的问题．
（1）培养基中含有的蛋白胨淀粉分别为细菌培养提供了氮源和______．除此之外，培养基还必须含有的基本成分是______和______．
（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是______．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于______中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，实验过程中还应该同时添加______．
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有______种细菌．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越______．
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐细菌，这种培养基（按功能分）被称为______．
正确答案
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）对培养基灭菌常采用的方法是高压蒸汽灭菌．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱 中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水（空白培养基）作为对照进行实验．
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，如果其总数越多，则说明湖水样品中有多种细菌，污染程度越重．
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为选择培养基．
故答案为：
（1）碳源 无机盐 水
（2）高压蒸汽灭菌
（3）恒温培养箱 空白培养基对照
（4）多 高
（5）盐（或NaCl） 选择性培养基
解析
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）对培养基灭菌常采用的方法是高压蒸汽灭菌．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱 中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水（空白培养基）作为对照进行实验．
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，如果其总数越多，则说明湖水样品中有多种细菌，污染程度越重．
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为选择培养基．
故答案为：
（1）碳源 无机盐 水
（2）高压蒸汽灭菌
（3）恒温培养箱 空白培养基对照
（4）多 高
（5）盐（或NaCl） 选择性培养基
请分析回答下列问题：
（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、______、灭菌、______；
（2）培养基灭菌的常用方法是______．如何证明所用培养基已经彻底灭菌？______．
（3）分解纤维素的微生物可以从土壤中分离获得，分离的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落．其中选择培养的目的是______，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是______．鉴别纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是______，该物质能够与纤维素反应生成______；如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够______．
（4）食品安全检测时通常采用大肠杆菌作为致病微生物的指示菌，为测定哪些菌落属于大肠杆菌，可选用______培养基对该菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现______色．
正确答案
解：（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板；
（2）培养基灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌，要证明所用培养基已经彻底灭菌只需对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底．
（3）分解纤维素的微生物的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是纤维素，别纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是刚果红，该物质能够与纤维素反应生成红色复合物，如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够产生纤维素酶，能够分解纤维素．
（4）为测定哪些菌落属于大肠杆菌，可选用伊红美蓝培养基对该菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现黑色．
故答案为：
（1）溶化 倒平板
（2）高压蒸汽灭菌 对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底
（3）增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物 纤维素 刚果红 红色复合物 产生纤维素酶，能够分解纤维素
（4）伊红美蓝 黑色
解析
解：（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板；
（2）培养基灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌，要证明所用培养基已经彻底灭菌只需对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底．
（3）分解纤维素的微生物的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是纤维素，别纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是刚果红，该物质能够与纤维素反应生成红色复合物，如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够产生纤维素酶，能够分解纤维素．
（4）为测定哪些菌落属于大肠杆菌，可选用伊红美蓝培养基对该菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现黑色．
故答案为：
（1）溶化 倒平板
（2）高压蒸汽灭菌 对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底
（3）增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物 纤维素 刚果红 红色复合物 产生纤维素酶，能够分解纤维素
（4）伊红美蓝 黑色
下列有关平板划线操作的叙述，错误的是（ ）
正确答案
解析
解：A、在操作的第一步以及每次划线之前都要将接种环放在火焰上灼烧，A正确；
B、接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，B正确；
C、蘸取菌液和划线要在火焰旁进行，防止空气中的杂菌，C正确；
D、划线时要避免最后一区的划线与第一区线连． 因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，D错误．
故选：D．
下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ）
正确答案
解析
解：A、将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，故A正确；
B、接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，故B正确；
C、蘸取菌液和划线要在火焰旁进行，防止空气中的杂菌，故C正确；
D、划线时要避免最后一区的划线与第一区线连． 因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，故D错误．
故选：D．
人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括______和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有______（答2种）．
（2）采用______法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养．在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在______旁进行操作．接种后的培养皿______于37℃的恒温箱中培养．
（3）用______培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于______培养基．若培养基中存在有脲酶的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的______，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力______．
（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数______．
A．多 B．少 C．相等 D．几乎为零．
正确答案
解：（1）用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等都必须是无菌的；常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌．
（2）采用稀释涂布平板法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养；为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，培养皿需要倒置在恒温培养箱中培养．
（3）酚红指示剂可用于鉴别微生物，所以含有酚红指示剂的培养基属于鉴别培养基；尿素被分解成氨可使PH呈碱性，变色区域越大，说明其分解能力越强．
（4）以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．
故答案为：
（1）接种工具和培养基 高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌
（2）稀释涂布平板法 酒精灯火焰旁 倒置
（3）鉴别 氨 越强
（4）B
解析
解：（1）用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等都必须是无菌的；常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌．
（2）采用稀释涂布平板法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养；为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，培养皿需要倒置在恒温培养箱中培养．
（3）酚红指示剂可用于鉴别微生物，所以含有酚红指示剂的培养基属于鉴别培养基；尿素被分解成氨可使PH呈碱性，变色区域越大，说明其分解能力越强．
（4）以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．
故答案为：
（1）接种工具和培养基 高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌
（2）稀释涂布平板法 酒精灯火焰旁 倒置
（3）鉴别 氨 越强
（4）B
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