- 土壤中微生物的分离与计数
- 共916题
（1）微生物的分布：能降解某种除草剂（一种难以降解的含氮有机物）的细菌主要分布在______的土壤中．
（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用______和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用______法进行灭菌．
（3）微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型______发酵产生酒精．
（4）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是图示中A、B两种方法．常用来统计样品活菌数目的方法是[______]______．
（5）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是______．
（6）微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应______；从物理性质来看，还应加入______．接种培养后，依据培养基中是否产生______来筛选能降解该除草剂的细菌．
正确答案
长期使用该除草剂
酒精
高压蒸汽灭菌
酵母菌
A
稀释涂布平板法
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
以该除草剂为唯一氮源
琼脂
透明圈
解析
解：（1）微生物的分布：纤维素分解菌主要分布长期使用该除草剂的土壤．
（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用酒精和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．
（3）微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型酵母菌发酵产生酒精．
（4）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法．
（5）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．
（6）微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解该除草剂的细菌．设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应以该除草剂为唯一氮源；从物理性质来看，还应加入琼脂．接种培养后，依据培养基中是否产生透明圈来筛选能降解该除草剂的细菌．
故答案为：
（1）长期使用该除草剂
（2）酒精 高压蒸汽灭菌
（3）酵母菌
（4）A 稀释涂布平板法
（5）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（6）以该除草剂为唯一氮源 琼脂 透明圈
由于石油价格的不断上涨，替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等的开发备受世界关注，有人想利用玉米秸秆生产燃料酒精，其大致流程为：
（1）玉米秸秆预处理后，应该选用______进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖．
（2）分离这种水解酶的野生菌株一般从土壤中筛选，所需要的培养基为______培养基，但现有的野生菌株对玉米秸秆的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株．
实验步骤：
①配制______（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为______．
②将野生菌株接入已经用______法灭菌的培养基平板上．
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行______．
④菌落形成后，加入______染液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小，周围出现______（现象）的菌落即为初选菌落．
⑤分离、纯化菌种时为得到单菌落，常用______法接种．
（3）发酵阶段需要的菌种是酵母，生产酒精必须要控制的条件是______．
（4）生产的酒精易挥发但可溶于水，宜选用______的方法从酵母菌代谢产物中提取．
正确答案
纤维素酶
选择
固体
纤维素
高压蒸汽灭菌
诱变
刚果红
透明圈范围大
平板划线或稀释涂布平板
无氧（密封、密闭）
水蒸气蒸馏
解析
解：（1）玉米秸秆的主要成分是纤维素，根据酶的专一性原理，可用纤维素酶水解纤维素．
（2）分离纤维素分解菌的培养基时以纤维素为唯一碳源的培养基，属于选择培养基．
实验步骤：
①微生物的分离应该用固体培养基．
②培养基的灭菌方法只能使用高压蒸汽灭菌法．
③紫外线的作用是诱导DNA分子发生基因突变．
④刚果红可以和纤维结合形成红色复合物，纤维素分解菌将纤维素分解以后，红色复合物消失，会形成透明圈．
⑤接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．
（3）酵母菌的无氧呼吸的产物是乙醇，需要在密闭条件下才能进行无氧呼吸．
（4）酵母菌的代谢产物中有机物很多，由于酒精容易挥发，经过蒸馏装置加热以后，酒精先挥发出来，然后除去其中的水分．
故答案为：
（1）纤维素酶
（2）选择
①固体 纤维素 ②高压蒸汽灭菌 ③诱变 ④刚果红 透明圈范围大 ⑤平板划线 稀释涂布平板
（3）无氧（密封、密闭）
（4）水蒸气蒸馏
下表是探究温度对乳酸菌种群密度（个/mL）影响的实验结果，下列有关叙述中，不正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、采用抽样检测法调查酵母菌的种群密度，如被杂菌污染，则调查实验结果偏大，A正确；
B、酵母菌是单细胞真核生物观察时得借助显微镜、滴管、量筒、吸水纸、血细胞计数板、盖玻片等器具其中血细胞计数板是一种微生物细胞计数的常用工具，B正确；
C、温度影响细胞代谢进而影响酵母菌的增殖速率，但在空间、营养、气体供应等条件相同的情况下，环境容纳量应该基本不变，即10℃、20℃下培养酵母菌最终种群密度应相同，C错误；
D、表中数据表明相对三种不同的温度随培养时间的延长小时、20℃左右时酵母菌的种群数量达到最大值（348个/mL），D正确．
故选：C．
（1）为了从土壤中筛选能有效降解一种有害的、难于降解的有机化合物A的细菌．研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌（目地菌），该培养基为______培养基，其中化合A为目的菌提供______ 等营养要素，在分离、纯化、计数过程中，则常采用______ 法接种，实验过程中还需配制空白培养基作为对照，其目的是______，如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是______．
（2）在提取胡萝卜素时，常用的萃取剂具有沸点高且______ 等特点，在鉴定胡萝卜素粗品时，常用______ 法，如果标准样品只形成一种色素带，而提取样品形成了多种色素带，其原因可能是______．
（3）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用______ 洗涤红细胞，用______ 破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会______，降低分离效果．
正确答案
解：（1）由于用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌（目地菌），所以该培养基为选择培养基．由于微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，所以化合A为目的菌提供碳源和氮源等营养要素．在分离、纯化、计数过程中，则常采用稀释涂布法接种．实验过程中还需配制空白培养基作为对照，其目的是验证培养基灭菌是否彻底或检测培养基平板灭菌是否合格，如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌或培养基不纯，含有其他碳源和氮源或接种过程中被杂菌污染．
（2）在提取胡萝卜素时，常用的萃取剂具有沸点高且水不溶性或不与水混溶等特点，在鉴定胡萝卜素粗品时，常用纸层析法，如果标准样品只形成一种色素带，而提取样品形成了多种色素带，其原因可能是提取样品中含多种胡萝卜素．
（3）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用生理盐水洗涤红细胞，用蒸馏水和甲苯破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会搅乱洗脱次序，降低分离效果．
故答案为：
（1）选择 碳源和氮源 稀释涂布法 验证培养基灭菌是否彻底或检测培养基平板灭菌是否合格 土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌或培养基不纯，含有其他碳源和氮源或接种过程中被杂菌污染
（2）水不溶性或不与水混溶 纸层析 提取样品中含多种胡萝卜素
（3）生理盐水 蒸馏水和甲苯 搅乱洗脱次序
解析
解：（1）由于用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌（目地菌），所以该培养基为选择培养基．由于微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，所以化合A为目的菌提供碳源和氮源等营养要素．在分离、纯化、计数过程中，则常采用稀释涂布法接种．实验过程中还需配制空白培养基作为对照，其目的是验证培养基灭菌是否彻底或检测培养基平板灭菌是否合格，如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌或培养基不纯，含有其他碳源和氮源或接种过程中被杂菌污染．
（2）在提取胡萝卜素时，常用的萃取剂具有沸点高且水不溶性或不与水混溶等特点，在鉴定胡萝卜素粗品时，常用纸层析法，如果标准样品只形成一种色素带，而提取样品形成了多种色素带，其原因可能是提取样品中含多种胡萝卜素．
（3）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用生理盐水洗涤红细胞，用蒸馏水和甲苯破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会搅乱洗脱次序，降低分离效果．
故答案为：
（1）选择 碳源和氮源 稀释涂布法 验证培养基灭菌是否彻底或检测培养基平板灭菌是否合格 土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌或培养基不纯，含有其他碳源和氮源或接种过程中被杂菌污染
（2）水不溶性或不与水混溶 纸层析 提取样品中含多种胡萝卜素
（3）生理盐水 蒸馏水和甲苯 搅乱洗脱次序
（1）实验过程中对培养基、培养皿、实验操作者的双手所采用的灭菌、消毒方法依次是______、______、______．
（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是______．
（3）图示是利用______法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步______分散到培养基的表面．在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是______．
（4）关于图示的操作方法和结果，叙述正确的是______．
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌．
B．划线操作须在火焰上进行．
C．在5 区域中才可以提到所需菌落．
D．在1、2、3、4、5 区域中划线前后都要对接种环灭菌．
（5）植物组织培养所用的MS培养基和微生物培养所配制的培养基的主要区别是______．某同学在进行组织培养过程中，发现只分裂而不分化出芽和根，可能原因是______．
正确答案
解：（1）无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌．
（2）培养大肠杆菌时，检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（3）接种有平板划线法和稀释平板法，本题是后者，反复把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，可以实现对菌种的分离，在操作过程中灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是以免接种环温度太高杀死菌种；
（4）在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌主要是稀释作用；
（5）植物组织培养所用的MS培养基和微生物培养所用的培养基的主要区别是MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素；在植物组织培养实验中，植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等都会影响实验结果．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌 干热灭菌 化学消毒
（2）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（3）平板划线 稀释 以免接种环温度太高，杀死菌种
（4）D
（5）MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素 细胞分裂素和生长素使用顺序不对（或两者浓度配比不对）
解析
解：（1）无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌．
（2）培养大肠杆菌时，检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（3）接种有平板划线法和稀释平板法，本题是后者，反复把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，可以实现对菌种的分离，在操作过程中灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是以免接种环温度太高杀死菌种；
（4）在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌主要是稀释作用；
（5）植物组织培养所用的MS培养基和微生物培养所用的培养基的主要区别是MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素；在植物组织培养实验中，植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等都会影响实验结果．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌 干热灭菌 化学消毒
（2）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（3）平板划线 稀释 以免接种环温度太高，杀死菌种
（4）D
（5）MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素 细胞分裂素和生长素使用顺序不对（或两者浓度配比不对）
请根据所学知识回答以下问题
（1）有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数．在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下2种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了3个平板统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果；请评价这两位同学的实验结果的有效性．
①甲同学______，原因是______．
②乙同学______，原因是______．
③稀释涂布平板法所用培养基按物理性质划分属于______培养基；微生物实验室培养一般用的______培养基作为空白对照以检验培养是否受杂菌污染．
（2）生物工程常需分离酵母菌和Taq耐热菌，分离方法常用选择培养基．例如用尿素为唯一氮源的适宜培养基，分离能分解尿素的细菌．请提出从含细菌、酵母菌和Taq耐热菌的培养液中分离酵母菌和Taq耐热菌的方案．
④分离酵母菌：______．
⑤分离Taq耐热菌：______．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从______中获得供PCR技术利用．
正确答案
解：（1）①甲同学实验操作不合理，原因是只涂布了一个平板，未设置对照组，没有设置重复组，结果不具有说服力．
②乙同学结果也不合理，因1个计数结果与另2个相差太远，不能简单的用其平均数．
③在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性．在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验．
（2）④由于酵母菌为真菌，故可用加抗生素的选择培养基分离酵母菌．
⑤分离Taq耐热菌可根据该菌的特点用高温条件进行选择培养．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从中获得耐高温的热稳定DNA聚合酶，供PCR技术利用．
故答案为：
①不合理；没有设置重复组，结果不具有说服力．
②不合理；第一个计数结果误差过大，不应用作求平均值．
③固体 不接种
④用加抗生素的选择培养基分离酵母菌
⑤用高温培养条件分离Taq耐热菌
⑥热稳定DNA聚合酶
解析
解：（1）①甲同学实验操作不合理，原因是只涂布了一个平板，未设置对照组，没有设置重复组，结果不具有说服力．
②乙同学结果也不合理，因1个计数结果与另2个相差太远，不能简单的用其平均数．
③在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性．在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验．
（2）④由于酵母菌为真菌，故可用加抗生素的选择培养基分离酵母菌．
⑤分离Taq耐热菌可根据该菌的特点用高温条件进行选择培养．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从中获得耐高温的热稳定DNA聚合酶，供PCR技术利用．
故答案为：
①不合理；没有设置重复组，结果不具有说服力．
②不合理；第一个计数结果误差过大，不应用作求平均值．
③固体 不接种
④用加抗生素的选择培养基分离酵母菌
⑤用高温培养条件分离Taq耐热菌
⑥热稳定DNA聚合酶
某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（“目的菌”）．实验的主要步骤如下．请分析回答问题：
（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选______，这种培养基属于______培养基．
（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的______，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是______．
（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量______的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量______．
（4）转为固体培养时，常采用______的方法接种，获得单菌落后继续筛选．
（5）实验结束时，使用过的培养基应该进行______处理后，才能倒掉．
正确答案
解：（1）培养基中加入化合物A是为分解化合物A的微生物提供碳源和氮源，分离出能分解化合物A的微生物；这中培养基从功能上分属于选择培养基．
（2）分析培养基的配方可知，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；目的菌是需氧微生物，因此在培养过程中应该震荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求．
（3）由于“目的菌”有降解的有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加．
（4）转为固体培养时，常采用平板划线法进行接种，分离获得单菌落．
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止造成环境污染．
故答案为：
（1）“目的菌”选择
（2）化合物A 异养需氧型
（3）减少 增加
（4）平板划线
（5）灭菌
解析
解：（1）培养基中加入化合物A是为分解化合物A的微生物提供碳源和氮源，分离出能分解化合物A的微生物；这中培养基从功能上分属于选择培养基．
（2）分析培养基的配方可知，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；目的菌是需氧微生物，因此在培养过程中应该震荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求．
（3）由于“目的菌”有降解的有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加．
（4）转为固体培养时，常采用平板划线法进行接种，分离获得单菌落．
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止造成环境污染．
故答案为：
（1）“目的菌”选择
（2）化合物A 异养需氧型
（3）减少 增加
（4）平板划线
（5）灭菌
微生物培养是微生物工程中的基础技术．下列相关叙述正确的一项（ ）
正确答案
解析
解：A、病毒不能在培养基上繁殖，必须在活细胞内才能生存，A错误；
B、在每次划线前后都必须灼烧接种环，B错误；
C、自养型微生物不需添加碳源，固氮菌不需添加氮源，C正确；
D、在培养的过程中，若没有杂菌污染，细胞数目不断地增加，种类不增加，D错误．
故选：C．
关于灭菌和消毒的叙述，错误的是（ ）
正确答案
解析
解：A、接种环、接种针用灼烧的方法灭菌，A正确；
B、灭菌是杀死物体内外所有微生物，B正确；
C、消毒是杀死物体内外绝大多数的微生物，C正确；
D、高压蒸汽灭菌的原理是杀死所有微生物，D错误．
故选：D．
人们生产和生活与生物技术实践密切相关．请回答下列问题：
（1）生物技术实践离不开无菌技术，无菌技术主要通过消毒和灭菌过程来避免杂菌污染．常用的灭菌方法有______灭菌、干热灭菌和______灭菌．
（2）在制作果醋过程中，若榨取的果汁非常浑浊．解决方法是______．
（3）为满足广大人民群众的需要，科技工作者采用植物组织培养技术在温室大棚内生产出大量质优价廉的各种花卉．如图所示是郁金香芽尖通过特定操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗的培育过程．
①芽尖组织在接种至培养基之前，须进行消毒处理，整个组织培养过程需在______条件下操作，并严格控制好各个时期的培养条件．
②为促进芽尖组织细胞分裂生长，所使用的培养基中应有______和细胞分裂素两类植物激素．当后者用量与前者用量的比值较______时，利于芽的分化，抑制根的形成．
③再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还需要的条件是______．
④植物组织培养的优点是______．
正确答案
解：（1）常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．
（2）在制作果醋过程中，若榨取的果汁非常浑浊．解决方法是用果胶酶处理，瓦解植物细胞壁和胞间层．
（3）①芽尖组织在接种至培养基之前，须进行消毒处理，整个组织培养过程需在无菌条件下操作，并严格控制好各个时期的培养条件．
②为促进芽尖组织细胞分裂生长，所使用的培养基中应有生长素和细胞分裂素两类植物激素．当后者用量与前者用量的比值较高时，利于芽的分化，抑制根的形成．
③再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还需要的条件是光照、适宜的温度、pH值．
④植物组织培养的优点是快速繁殖，培育无病毒植株．
故答案为：
（1）灼烧 高压蒸汽
（2）用果胶酶处理
（3）无菌 生长素 高 光照、适宜的温度、pH值
（4）快速繁殖，培育无病毒植株
解析
解：（1）常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．
（2）在制作果醋过程中，若榨取的果汁非常浑浊．解决方法是用果胶酶处理，瓦解植物细胞壁和胞间层．
（3）①芽尖组织在接种至培养基之前，须进行消毒处理，整个组织培养过程需在无菌条件下操作，并严格控制好各个时期的培养条件．
②为促进芽尖组织细胞分裂生长，所使用的培养基中应有生长素和细胞分裂素两类植物激素．当后者用量与前者用量的比值较高时，利于芽的分化，抑制根的形成．
③再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还需要的条件是光照、适宜的温度、pH值．
④植物组织培养的优点是快速繁殖，培育无病毒植株．
故答案为：
（1）灼烧 高压蒸汽
（2）用果胶酶处理
（3）无菌 生长素 高 光照、适宜的温度、pH值
（4）快速繁殖，培育无病毒植株
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