- 土壤中微生物的分离与计数
- 共916题
高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性．研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示．
（1）进行①过程的目的是______．
（2）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是______．
（3）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放______分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈大的菌落，接种到Ⅱ号培养基．
（4）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于______培养基，仅以淀粉作为______源．
正确答案
解：（1）据图分析，①过程称为梯度稀释过程．
（2）培养基制作完成后要调整pH，再灭菌．
（3）图中，经稀释涂布平板法接种培养后，部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈．
（4））Ⅰ号培养基按功能分称为选择培养基；该实验的目的是筛选耐高温的淀粉分解菌，需要使用一淀粉为唯一碳源的选择培养基．
故答案为：
（1）稀释
（2）先调节pH，后灭菌
（3）淀粉酶
（4）选择 （唯一）碳
解析
解：（1）据图分析，①过程称为梯度稀释过程．
（2）培养基制作完成后要调整pH，再灭菌．
（3）图中，经稀释涂布平板法接种培养后，部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈．
（4））Ⅰ号培养基按功能分称为选择培养基；该实验的目的是筛选耐高温的淀粉分解菌，需要使用一淀粉为唯一碳源的选择培养基．
故答案为：
（1）稀释
（2）先调节pH，后灭菌
（3）淀粉酶
（4）选择 （唯一）碳
（1）从细胞结构来看，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）属于______生物，其可遗传变异的来源是______．
（2）抗生素在超级细菌进化过程中起到了______作用，使细菌的______发生定向改变．
（3）请设计一个实验，证明“抗生素诱导金黄色葡萄球菌产生了适应性的变异”的观点是错误的．
材料和器具：青霉素、培养皿以及对青霉素敏感的普通金黄色葡萄球菌．将实验完善：
①实验步骤：
步骤1：取培养皿A若干个（A1、A2、A3…），加入普通细菌培养基；取培养皿B若干（B1、B2、B3…）加入______的细菌培养基．
步骤2：将适量细菌培养液涂在培养皿A1的培养基表面，放在适宜的条件下培养一段时间，培养基表面会出现一些细菌菌落．
步骤3：用灭菌后的丝绒包上棉花制成一枚“印章”，在A1上轻盖一下，再在B1上轻盖一下，这样A1中的细胞就按一定的位置正确地“复制”到B1之中，将B1培养一段时间后，B1中一定部位出现了少量菌落．步骤4：根据B1中菌落出现的方位，将A1中对应位置的菌落取出，均匀涂抹在A2表面，培养一段时间后，培养基表面又会出现许多菌落．反复重复步骤3、4．
②预期结果：在B2、B3中保留下来的菌落越来越多，直到最后，所有复制到B中的菌落全部保留下来，都具有了对青霉素的抗药性．
③本实验的原理：______，说明细菌抗药性变异的产生与抗生素无关．
正确答案
解：（1）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种细菌，属于原核生物；可遗传的变异包括基因突变、基因重组和染色体变异，原核生物不含染色体，不会发生染色体变异，同时原核生物不能进行有性生殖，因此也不会发生基因重组，即原核生物的可遗传变异的来源只有基因突变．
（2）抗生素在超级细菌进化过程中起到了选择作用，使细菌的基因频率发生定向改变，导致细菌进化．
（3）该实验的目的是要证明“抗生素诱导金黄色葡萄球菌产生了适应性的变异”的观点是错误的，因此该实验的单一变量为是否加入抗生素，因变量为金黄色葡萄球菌是否产生了适应性变异．因此步骤1为：取培养皿A若干个（A1、A2、A3…），加入普通细菌培养基；取培养皿B若干（B1、B2、B3…）加入含有青霉素的细菌培养基．
本实验的原理：A组细菌从未接触抗生素，而细菌的抗药性不断增强，说明细菌抗药性变异的产生与抗生素无关．
故答案为：
（1）原核 基因突变
（2）选择 基因频率
（3）①含有青霉素 ③A组细菌从未接触抗生素，而细菌的抗药性不断增强
解析
解：（1）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种细菌，属于原核生物；可遗传的变异包括基因突变、基因重组和染色体变异，原核生物不含染色体，不会发生染色体变异，同时原核生物不能进行有性生殖，因此也不会发生基因重组，即原核生物的可遗传变异的来源只有基因突变．
（2）抗生素在超级细菌进化过程中起到了选择作用，使细菌的基因频率发生定向改变，导致细菌进化．
（3）该实验的目的是要证明“抗生素诱导金黄色葡萄球菌产生了适应性的变异”的观点是错误的，因此该实验的单一变量为是否加入抗生素，因变量为金黄色葡萄球菌是否产生了适应性变异．因此步骤1为：取培养皿A若干个（A1、A2、A3…），加入普通细菌培养基；取培养皿B若干（B1、B2、B3…）加入含有青霉素的细菌培养基．
本实验的原理：A组细菌从未接触抗生素，而细菌的抗药性不断增强，说明细菌抗药性变异的产生与抗生素无关．
故答案为：
（1）原核 基因突变
（2）选择 基因频率
（3）①含有青霉素 ③A组细菌从未接触抗生素，而细菌的抗药性不断增强
胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：
（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用稀释涂布平板法或______．采用后一种方法接种时需先灼烧接种环，其目的是______．
（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供______．欲纯化此工程菌，可以采用______法将菌种接种在______培养基上，以获得______菌落；进行扩大培养时，应选用______培养基．
（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好______和时间以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用水浴方式加热以防止______；萃取液浓缩前需进行______，其目的是去掉不溶物．
（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素，鉴定过程中需用______作为 （实验）对照．
正确答案
解：（1）微生物接种常用稀释涂布平板法和平板划线法，为了避免其它杂菌的污染，接种过程要进行无菌操作，接种前对接种环灼烧就是为了杀灭接种环上的微生物，即灭菌．
（2）蔗糖主要提供碳源，也可以作为能源物质，硝酸盐含氮元素，可提供氮源．欲纯化此工程菌，可以采用划线法将菌种接种在固体培养基上，以获得单个菌落；进行扩大培养时，应选用液体培养基．
（3）胡萝卜素不是很稳定，温度过高、干燥时间过长会导致其分解；由于萃取剂往往具有挥发性，且易燃烧，如果直接加热挥发出来的有机溶剂遇明火易燃烧爆炸；萃取液浓缩前需进行过滤，萃取后需将原料中的固体物滤去．
（4）用标准样品可对照检查提取出来的胡萝卜素的纯度．
故答案为：
（1）平板划线法接种 灭菌
（2）碳源、氮源 划线（或稀释涂布） 固体 单个 液体
（3）温度 温度过高 过滤
（4）胡萝卜素标准品
解析
解：（1）微生物接种常用稀释涂布平板法和平板划线法，为了避免其它杂菌的污染，接种过程要进行无菌操作，接种前对接种环灼烧就是为了杀灭接种环上的微生物，即灭菌．
（2）蔗糖主要提供碳源，也可以作为能源物质，硝酸盐含氮元素，可提供氮源．欲纯化此工程菌，可以采用划线法将菌种接种在固体培养基上，以获得单个菌落；进行扩大培养时，应选用液体培养基．
（3）胡萝卜素不是很稳定，温度过高、干燥时间过长会导致其分解；由于萃取剂往往具有挥发性，且易燃烧，如果直接加热挥发出来的有机溶剂遇明火易燃烧爆炸；萃取液浓缩前需进行过滤，萃取后需将原料中的固体物滤去．
（4）用标准样品可对照检查提取出来的胡萝卜素的纯度．
故答案为：
（1）平板划线法接种 灭菌
（2）碳源、氮源 划线（或稀释涂布） 固体 单个 液体
（3）温度 温度过高 过滤
（4）胡萝卜素标准品
（1）培养基中含有的牛肉膏和蛋白胨为细菌培养提供了______和氮源．除此之外，培养基还必须含有的基本成分是______．
（2）如果要配置固体培养基，则还需要在培养基中再加入______．培养基的pH值需要在定容______（前/后）调节．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中______培养，培养的温度一般设定在______℃左右．
（4）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为______．
（5）在进行细菌纯化培养过程中，需要在培养基上按右图编号顺序操作进行划线接种，经过培养之后，可以观
察到在______（填图中编号）区域出现单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是______个细菌．
正确答案
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）固体培养基的常用的凝固剂是琼脂，培养基的pH值需要在定容后，灭菌前进行．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37℃，倒置培养的目的是防止冷凝水的污染．
（4）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为选择培养基．
（5）图中接种的方式是平板划线法．平板划线法是将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线，然后，将培养皿放入恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落．
故答案为：（1）碳源 水和无机盐
（2）琼脂 后
（3）倒置 37
（4）选择培养基
（5）③1
解析
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）固体培养基的常用的凝固剂是琼脂，培养基的pH值需要在定容后，灭菌前进行．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37℃，倒置培养的目的是防止冷凝水的污染．
（4）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐细菌，这种培养基被称为选择培养基．
（5）图中接种的方式是平板划线法．平板划线法是将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线，然后，将培养皿放入恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落．
故答案为：（1）碳源 水和无机盐
（2）琼脂 后
（3）倒置 37
（4）选择培养基
（5）③1
某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验．实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数．请回答与此实验相关的问题．
（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了______和______．除此之外，培养基还必须含有的基本成分是______．
（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是______．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种______作为对照进行实验．
（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有______种细菌．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越______．
正确答案
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）对培养基灭菌常采用的方法是高压蒸汽灭菌．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱 中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水 作为对照进行实验．
（4）观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明样品中的细菌种类多．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越高．
故答案为：
（1）氮源 碳源 无机盐、水
（2）高压蒸汽灭菌
（3）恒温培养箱 无菌水
（4）多 高
解析
解：（1）不同的培养基都含有基本成分，水、无机盐，碳源、氮源．所以培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源、碳源，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是水和无机盐．
（2）对培养基灭菌常采用的方法是高压蒸汽灭菌．
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱 中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水 作为对照进行实验．
（4）观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明样品中的细菌种类多．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越高．
故答案为：
（1）氮源 碳源 无机盐、水
（2）高压蒸汽灭菌
（3）恒温培养箱 无菌水
（4）多 高
葡萄种植基地为解决葡萄滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行葡萄的深加工，获得了较好效益，其生产流程如图所示，据图回答：
（1）在筛选菌种A时，需要在接种前用______法对葡萄果汁进行灭菌．对于需要长期保存的菌种，可以采用______的方法．
（2）在纯化菌种A时接种了5个平板，每个平板均接种了0.1mL样品并培养．其中乙平板的菌落分布如图，纯化菌种A的接种方法是______，推测出现平板乙可能的操作失误是涂布不均匀．其余的甲、丙、丁、戊平板的菌落数分别是180、220、480、200，则样品中菌种A的数量为______个/mL，用该方法统计的结果，一般______（低于、高于）实际值．
（3）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和细胞分裂素，这些植物激素一般需要事先单独配置成______保存备用．
正确答案
解：（1）葡萄果汁作为筛选菌种A时的培养基需要在接种前用高压蒸汽灭菌进行灭菌．需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法．
（2）分析图乙中培养基培养结果，可以推知采用的纯化方法是稀释涂布平板法．样品中菌种A的数量为（180+220+200）÷3÷0.1=2000 个/mL，由于稀释涂布平板法的个别菌落可能来自于两个和多个细胞，所以用该方法统计的结果，一般低于实际值．
（3）植物组织培养常需要添加生长素和细胞分裂素，并且需要单独配置成母液备用．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌 甘油管藏
（2）稀释涂布平板法 2000 低于
（3）母液
解析
解：（1）葡萄果汁作为筛选菌种A时的培养基需要在接种前用高压蒸汽灭菌进行灭菌．需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法．
（2）分析图乙中培养基培养结果，可以推知采用的纯化方法是稀释涂布平板法．样品中菌种A的数量为（180+220+200）÷3÷0.1=2000 个/mL，由于稀释涂布平板法的个别菌落可能来自于两个和多个细胞，所以用该方法统计的结果，一般低于实际值．
（3）植物组织培养常需要添加生长素和细胞分裂素，并且需要单独配置成母液备用．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌 甘油管藏
（2）稀释涂布平板法 2000 低于
（3）母液
如图是微生物接种示意图，操作顺序为1→2→3→4→5，以下叙述正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、图示方法为平板划线法，A错误；
B、在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，且接种时划线操作是在火焰周围进行，B正确；
C、在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落，所以由单个细胞形成的菌落不一定出现在5区域，C错误；
D、在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，D错误．
故选：B．
在恒温箱培养微生物时，平板要倒置的原因是（ ）
正确答案
解析
解：平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染．在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生．
故选：D．
用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（ ）
①都需要用固体培养基 ②都需要使用接种针进行接种
③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用菌落数来计数活菌．
正确答案
解析
解：①平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，①正确；
②平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，②错误；
③纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，③正确；
④平板划线法一般用于分离而不是计数，④错误．
所以，①③正确．
故选：B．
我国现已成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国．根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为原料的第1代生物乙醇和以秸秆等纤维素为原料的第2代生物乙醇．两者的生产过程都需要多种微生物参与，且在较高温度下反应能提高产率．
（1）生产第1代生物乙醇时，首先利用微生物或酶将淀粉材料彻底水解为______，才能利用酵母菌在______条件下将其转化为乙醇．
（2）生产第2代生物乙醇时需要纤维素分解菌，为此，小明同学设计了两种培养基．甲培养基含纤维素粉5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g、无机盐适量；乙培养基含CMC-Na10g、酵母膏1g、琼脂15g、土豆汁100mL、无机盐适量．
①在上述______（填“甲”或“乙”）种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，筛选该菌落时常需要向该培养基中添加______；另外一种培养基的作用是______．
②为防止杂菌污染，除要对培养基进行______灭菌，还需要对操作者的双手进行清洁和______．
③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供______条件．
正确答案
解：（1）微生物或酶将淀粉材料彻底水解为葡萄糖，才能利用酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸将其转化为乙醇．
（2）①筛选纤维素分解菌需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据题意可知，乙种培养基中含有CMC-Na和琼脂，所以可以筛选纤维素分解菌．筛选该菌落时常需要向该培养基中添加刚果红染液，用来鉴定纤维素分解菌．甲种培养基可以用来增加纤维素分解菌的浓度．
②制作的培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌，操作者的双手进行清洁和消毒．
③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供高温条件．
故答案为：
（1）葡萄糖 无氧
（2）①乙 刚果红 增加纤维素分解菌的浓度
②高压蒸汽 消毒
③高温
解析
解：（1）微生物或酶将淀粉材料彻底水解为葡萄糖，才能利用酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸将其转化为乙醇．
（2）①筛选纤维素分解菌需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据题意可知，乙种培养基中含有CMC-Na和琼脂，所以可以筛选纤维素分解菌．筛选该菌落时常需要向该培养基中添加刚果红染液，用来鉴定纤维素分解菌．甲种培养基可以用来增加纤维素分解菌的浓度．
②制作的培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌，操作者的双手进行清洁和消毒．
③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供高温条件．
故答案为：
（1）葡萄糖 无氧
（2）①乙 刚果红 增加纤维素分解菌的浓度
②高压蒸汽 消毒
③高温
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