- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
（1）上述两分子能够杂交，依据的原理是β珠蛋白基因与其mRNA上的碱基能够遵循______原则；细胞中β-珠蛋白基因不能翻译的序列是______（填写图中序号）．
（2）细胞中β-珠蛋白基因开始转录时，能识别和结合①中调控序列的酶是______．
（3）若一个卵原细胞的一条染色体上，β-珠蛋白基因能翻译的序列中一个A替换成T，则由该卵原细胞产生的卵细胞携带该突变基因的概率是______
（4）上述突变基因的两个携带者婚配，其后代中不含该突变基因的概率是______．
正确答案
解：（1）分子杂交的原理是碱基互补配对原则；β-珠蛋白基因编码区包括外显子（②④⑥）和内含子（③⑤），其中内含子（③⑤）能转录，但不能翻译．
（2）转录需要RNA聚合酶的参与，该酶能识别和结合基因首端的启动子．
（3）若一个卵原细胞的一条染色体上的β-珠蛋白基因在复制时一条脱氧核苷酸链中一个A替换成T，则以这条脱氧核苷酸链为模板合成的子代DNA分子发生基因突变，而以另一条脱氧核苷酸链为模板合成的DNA分子正常，该正常DNA分子进入次级卵母细胞的概率是
（4）上述突变基因的两个携带者婚配，根据基因分离定律，其后代中不含该突变基因的概率是
故答案为：
（1）碱基互补配对 ③和⑤
（2）RNA聚合酶
（3）
（4）
解析
解：（1）分子杂交的原理是碱基互补配对原则；β-珠蛋白基因编码区包括外显子（②④⑥）和内含子（③⑤），其中内含子（③⑤）能转录，但不能翻译．
（2）转录需要RNA聚合酶的参与，该酶能识别和结合基因首端的启动子．
（3）若一个卵原细胞的一条染色体上的β-珠蛋白基因在复制时一条脱氧核苷酸链中一个A替换成T，则以这条脱氧核苷酸链为模板合成的子代DNA分子发生基因突变，而以另一条脱氧核苷酸链为模板合成的DNA分子正常，该正常DNA分子进入次级卵母细胞的概率是
（4）上述突变基因的两个携带者婚配，根据基因分离定律，其后代中不含该突变基因的概率是
故答案为：
（1）碱基互补配对 ③和⑤
（2）RNA聚合酶
（3）
（4）
下列是利用植物生产抗艾滋病病毒的药物过程，请据图回答：
（1）获取目的基因的常用方法是______、______和PCR技术扩增．若用PCR技术扩增抗旱基因，需要用到的酶是______．
（2）图中构成B的组件除抗旱基因、启动子、终止子外，还有______，在构建此结构时A基因和Ti质粒结合的部位是______．
（3）图中③目的基因导入烟草细胞的方法是______，除此之外导入植物受体细胞的方法还可以是______．
（4）含有目的基因的受体细胞培养成烟草植株的培养基中，除加入一定的营养成分外，还需要添加______，同时除提供适宜的温度、光照和氧气等环境条件外，成功的关键是______．
（5）与该培养过程所用培养基相比，用于动物细胞培养的培养液除含有水分，无机盐、糖类、维生素以及氨基酸之外，还需要添加______．
正确答案
解：（1）获取目的基因的常用方法有基因文库中获取、人工合成和PCR技术扩增等，其中PCR技术需要用热稳定性DNA聚合酶．
（2）图中B为重组质粒，其结构包括抗旱基因（目的基因）、启动子、终止子外、标记基因，在构建此结构时A基因和Ti质粒结合的部位是T-DNA片段内．
（3）图中③目的基因导入烟草细胞的方法是农杆菌转化法，还可以用花粉管通道法和基因枪法．
（4）决定脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类及比例，因此在培养过程中，除添加必要的营养物质，还需要向培养基中添加植物激素；植物组织培养时除提供适宜的温度、光照和氧气等环境条件外，成功的另一关键是无菌操作．
（5）动物细胞培养的培养液成分：水分、无机盐、糖类、维生素以及氨基酸等之外，还要加入动物血清．
故答案为：
（1）基因文库中获取 人工合成 热稳定性DNA聚合酶
（2）标记基因 T-DNA片段内
（3）农杆菌转化法 花粉管通道法和基因枪法
（4）植物激素 无菌操作
（5）血清、血浆
解析
解：（1）获取目的基因的常用方法有基因文库中获取、人工合成和PCR技术扩增等，其中PCR技术需要用热稳定性DNA聚合酶．
（2）图中B为重组质粒，其结构包括抗旱基因（目的基因）、启动子、终止子外、标记基因，在构建此结构时A基因和Ti质粒结合的部位是T-DNA片段内．
（3）图中③目的基因导入烟草细胞的方法是农杆菌转化法，还可以用花粉管通道法和基因枪法．
（4）决定脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类及比例，因此在培养过程中，除添加必要的营养物质，还需要向培养基中添加植物激素；植物组织培养时除提供适宜的温度、光照和氧气等环境条件外，成功的另一关键是无菌操作．
（5）动物细胞培养的培养液成分：水分、无机盐、糖类、维生素以及氨基酸等之外，还要加入动物血清．
故答案为：
（1）基因文库中获取 人工合成 热稳定性DNA聚合酶
（2）标记基因 T-DNA片段内
（3）农杆菌转化法 花粉管通道法和基因枪法
（4）植物激素 无菌操作
（5）血清、血浆
如图表示应用现代生物技术制备甲型H1N5病毒抗体的设想，请回答下列问题：
（1）转甲型H1N5病毒抗体基因奶牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N5病毒抗体，③过程需将受精卵培养到______时期再植入母体．可以采用______技术，培养出相同的转基因奶牛．
（2）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是______细胞，筛选出的Ⅱ细胞才既能______又能产生特定抗体．
（3）制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术，与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用______对细胞进行处理，以除去细胞壁；常用的促融剂是______．
正确答案
解：（1）③是胚胎移植过程，移植前需将受精卵培养到桑椹胚或囊胚时期再植入母体．因为来自同一胚胎的后代具有相同的基因型，所以要培养出多头相同的转基因奶牛，可以采用胚胎分割技术．
（2）只有浆细胞能分泌抗体，因此Ⅰ最可能是浆细胞（效应B细胞）细胞．导入prG后浆细胞才具备无限增殖的能力，因此筛选出的Ⅱ细胞既能无限增殖又能产生特定抗体．
（3）植物体细胞杂交在细胞融合之前要用酶解法去壁，即用纤维素酶和果胶酶对细胞进行处理，以除去细胞壁；常用的促融剂是聚乙二醇．
故答案为：
（1）早期胚胎（桑椹胚或囊胚） 胚胎分割
（2）浆细胞（效应B细胞） 无限增殖
（3）纤维素酶和果胶酶 PEG（聚乙二醇）
解析
解：（1）③是胚胎移植过程，移植前需将受精卵培养到桑椹胚或囊胚时期再植入母体．因为来自同一胚胎的后代具有相同的基因型，所以要培养出多头相同的转基因奶牛，可以采用胚胎分割技术．
（2）只有浆细胞能分泌抗体，因此Ⅰ最可能是浆细胞（效应B细胞）细胞．导入prG后浆细胞才具备无限增殖的能力，因此筛选出的Ⅱ细胞既能无限增殖又能产生特定抗体．
（3）植物体细胞杂交在细胞融合之前要用酶解法去壁，即用纤维素酶和果胶酶对细胞进行处理，以除去细胞壁；常用的促融剂是聚乙二醇．
故答案为：
（1）早期胚胎（桑椹胚或囊胚） 胚胎分割
（2）浆细胞（效应B细胞） 无限增殖
（3）纤维素酶和果胶酶 PEG（聚乙二醇）
图为科学家通过基因工程方法培育转基因抗虫棉的大致过程．请据图分析回答：
（1）图中①过程需要的酶有______，图中A的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、______和复制原点．启动子的作用是______．
（2）农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有______的特点．图中②过程的方法称为______．
（3）目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是______，检测时常采用的方法是______．
（4）目的基因在受体细胞内是否表达出产物从分子水平角度可根据______实验．
正确答案
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒；图中A为重组质粒，其组成至少包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点．启动子上有RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA．
（2）农杆菌的Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上．由图可知，过程②是农杆菌转化法．
（3）目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体的DNA上，检测目的基因是否导入受体细胞的方法是DNA分子杂交技术．
（4）检测目的基因是否表达，即翻译成蛋白质，一般用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶 标记基因 RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA
（2）可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上 农杆菌转化法
（3）目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上 DNA分子杂交技术
（4）抗原-抗体杂交
解析
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒；图中A为重组质粒，其组成至少包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点．启动子上有RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA．
（2）农杆菌的Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上．由图可知，过程②是农杆菌转化法．
（3）目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体的DNA上，检测目的基因是否导入受体细胞的方法是DNA分子杂交技术．
（4）检测目的基因是否表达，即翻译成蛋白质，一般用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶 标记基因 RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA
（2）可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上 农杆菌转化法
（3）目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上 DNA分子杂交技术
（4）抗原-抗体杂交
图示科学家通过基因工程培育抗虫棉时，从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫基因“放入”棉 花细胞中与棉花的DNA分子结合起来而发挥作用的过程示意图．请据图回答下列有关问题：
（1）图中科学家在进行①操作时，要使用______酶和______酶．科王
（2）图中的Ⅱ是______，Ⅱ由目的基因、______组成．
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是______，约80%的转基因植物都是通过这种方法获得的，除此之外，还有______．
（4）图中的Ⅲ是导入了目的基因的受体细胞，经植物组织培养获得一株棉花，这株棉花是否具有抗虫特性可进行______水平的鉴定．
正确答案
解：（1）图中科学家在进行①操作时，需要对目的基因和质粒进行切割，然后进行连接，要使用到限制性内切酶和DNA连接酶．
（2）图中的Ⅱ是基因表达载体，是由目的基因、启动子、终止子和标记基因等组成．
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，约80%的转基因植物都是通过这种方法获得的，除此之外，还有基因枪法和花粉管通道法等．
（4）图中的Ⅲ是导入了目的基因的受体细胞，经植物组织培养获得一株棉花，这株棉花是否具有抗虫特性可进行个体生物学水平的鉴定．
故答案为：
（1）限制性内切酶和DNA连接酶
（2）基因表达载体 启动子、终止子和标记基因等
（3）农杆菌转化法 基因枪法和花粉管通道法等
（4）个体生物学
解析
解：（1）图中科学家在进行①操作时，需要对目的基因和质粒进行切割，然后进行连接，要使用到限制性内切酶和DNA连接酶．
（2）图中的Ⅱ是基因表达载体，是由目的基因、启动子、终止子和标记基因等组成．
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，约80%的转基因植物都是通过这种方法获得的，除此之外，还有基因枪法和花粉管通道法等．
（4）图中的Ⅲ是导入了目的基因的受体细胞，经植物组织培养获得一株棉花，这株棉花是否具有抗虫特性可进行个体生物学水平的鉴定．
故答案为：
（1）限制性内切酶和DNA连接酶
（2）基因表达载体 启动子、终止子和标记基因等
（3）农杆菌转化法 基因枪法和花粉管通道法等
（4）个体生物学
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草．
资料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性．科学家对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性．
资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育．
回答下列问题：
（1）在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是：农杆菌感染植物后，将______转移到受体细胞的______中．
（2）资料乙属于______工程的范畴．该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对______进行改造，或制造一种新蛋白质的技术．在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的______序列发生了改变．
（3）资料丙属于胚胎工程的范畴．胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到______种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术．在资料丙的实例中，兔甲称为______体．
正确答案
解：（1）在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，从而将目的基因转移到受体细胞中．
（2）资料乙中可以看出，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，提高T4溶菌酶的耐热性，该技术属于蛋白质工程的范畴．该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造一种新蛋白质的技术．在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的氨基酸序列发生了改变．
（3）胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到同种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术．资料丙中，兔甲是提供胚胎的个体，称为供体，兔乙是接受胚胎的个体，称为受体．
故答案为：
（1）目的基因 染色体DNA
（2）蛋白质 蛋白质 氨基酸
（3）同 供体
解析
解：（1）在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上，从而将目的基因转移到受体细胞中．
（2）资料乙中可以看出，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，提高T4溶菌酶的耐热性，该技术属于蛋白质工程的范畴．该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造一种新蛋白质的技术．在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的氨基酸序列发生了改变．
（3）胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到同种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术．资料丙中，兔甲是提供胚胎的个体，称为供体，兔乙是接受胚胎的个体，称为受体．
故答案为：
（1）目的基因 染色体DNA
（2）蛋白质 蛋白质 氨基酸
（3）同 供体
回答下列有关基因工程问题．
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．
（1）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，其产物长度分别为______．
若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐形纯合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有______种不同长度的DNA片段．
（2）为了提高试验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝．该方法也是检测______多样性的最简单方法．
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．
（4）为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌在含______的培养基上培养，得到如图3的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含______的培养基上培养，得到如图4的结果（空圈表示与图3对照无菌落的位置）．
（5）在选出的大肠杆菌内基因D能成功表达的原因是______．其表达产物是一条多肽链，如考虑终止密码，则其至少含有的氧原子数为______．
正确答案
解：（1）图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp．隐形纯合子的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，即被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会2种不同的DNA片段．
（2）为了提高试验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝．该方法也是检测遗传多样性的最简单方法．
（3）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．
（4）用限制酶BamHⅠ切割质粒后，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌，能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；再用含有抗生素A的培养基培养，能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌．最后能在培养皿1上生存，但不能在培养皿2上生存的大肠杆菌菌落进行培养，即可得到含重组质粒的大肠杆菌．图4中空心圈在图3中对应的位置是含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落．
（5）不同生物共用一套遗传密码子，所以基因D能再大肠杆菌内成功表达．基因D含有1020对碱基，最多能翻译形成含有1020÷3-1（终止密码子）=339个氨基酸的多肽链．多肽链含有O原子数=肽键数+2肽链数+R基中的O原子数，所以该多肽至少含有O原子数为338+2×1=340个．
故答案为：
（1）537bp、790bp、661bp 2
（2）遗传（基因）
（3）BamH1
（4）抗生素B 抗生素A
（5）生物界共用一套遗传密码子 340
解析
解：（1）图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp．隐形纯合子的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，即被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会2种不同的DNA片段．
（2）为了提高试验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝．该方法也是检测遗传多样性的最简单方法．
（3）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．
（4）用限制酶BamHⅠ切割质粒后，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌，能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；再用含有抗生素A的培养基培养，能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌．最后能在培养皿1上生存，但不能在培养皿2上生存的大肠杆菌菌落进行培养，即可得到含重组质粒的大肠杆菌．图4中空心圈在图3中对应的位置是含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落．
（5）不同生物共用一套遗传密码子，所以基因D能再大肠杆菌内成功表达．基因D含有1020对碱基，最多能翻译形成含有1020÷3-1（终止密码子）=339个氨基酸的多肽链．多肽链含有O原子数=肽键数+2肽链数+R基中的O原子数，所以该多肽至少含有O原子数为338+2×1=340个．
故答案为：
（1）537bp、790bp、661bp 2
（2）遗传（基因）
（3）BamH1
（4）抗生素B 抗生素A
（5）生物界共用一套遗传密码子 340
普通番茄属双子叶茄科植物，其细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏．科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种，操作流程如图．请据图回答：
（1）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞最常用的方法是______，筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的______表达．
（2）为促使图中②、③过程的顺利完成，需要向培养基中加入的植物激素主要有______和______，并需要在______条件下进行．
（3）要短时间得到更多的转基因抗软化番茄植株，目前常用的技术方法是______．要想获得这种番茄的脱毒苗，应用其进行培养______．
（4）除了图示培育方法外，还可通过______蛋白质工程技术，对进行定向改造，从而获得抗软化的番茄品种．
（5）为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的______（结构）中．
正确答案
解：（1）番茄属于双子叶植物，在受体细胞为双子叶植物细胞时，一般利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的标记基因表达．
（2）分析图解可知，图中②、③过程分别表示植物组织培养过程中的脱分化和再分化，为保证脱分化和再分化的顺利完成，需要向培养基中加入生长素和细胞分裂素，并需要在无菌和人工控制条件下进行．
（3）要短时间得到更多的转基因抗软化番茄植株，目前常用的技术方法是植物组织培养（微型繁殖）．由于植物细胞的根尖或茎尖属于新生组织，一般不含病毒，因此可以利用茎尖分生组织获得这种番茄的脱毒苗．
（4）由于蛋白质工程可以改造基因，因此除了图示培育方法外，还可通过多聚半乳糖醛酸酶基因蛋白质工程技术，对进行定向改造，从而获得抗软化的番茄品种．
（5）由于导入的抗多聚半乳糖醛酸酶基因位于染色体上，转基因番茄产生的花粉细胞中可能含有该基因，上述转基因番茄会通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染．因此为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的线粒体或叶绿体中．
故答案为：
（1）农杆菌转化法 标记基因
（2）生长素 细胞分裂素（不分先后） 无菌和人工控制
（3）植物组织培养（微型繁殖） 茎尖
（4）多聚半乳糖醛酸酶基因
（5）线粒体或叶绿体
解析
解：（1）番茄属于双子叶植物，在受体细胞为双子叶植物细胞时，一般利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的标记基因表达．
（2）分析图解可知，图中②、③过程分别表示植物组织培养过程中的脱分化和再分化，为保证脱分化和再分化的顺利完成，需要向培养基中加入生长素和细胞分裂素，并需要在无菌和人工控制条件下进行．
（3）要短时间得到更多的转基因抗软化番茄植株，目前常用的技术方法是植物组织培养（微型繁殖）．由于植物细胞的根尖或茎尖属于新生组织，一般不含病毒，因此可以利用茎尖分生组织获得这种番茄的脱毒苗．
（4）由于蛋白质工程可以改造基因，因此除了图示培育方法外，还可通过多聚半乳糖醛酸酶基因蛋白质工程技术，对进行定向改造，从而获得抗软化的番茄品种．
（5）由于导入的抗多聚半乳糖醛酸酶基因位于染色体上，转基因番茄产生的花粉细胞中可能含有该基因，上述转基因番茄会通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染．因此为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的线粒体或叶绿体中．
故答案为：
（1）农杆菌转化法 标记基因
（2）生长素 细胞分裂素（不分先后） 无菌和人工控制
（3）植物组织培养（微型繁殖） 茎尖
（4）多聚半乳糖醛酸酶基因
（5）线粒体或叶绿体
（1）被①处理后的分散细胞进行培养，通常要在培养液中添加一定量的______，同时应定期更换______，以便保证被培养的细胞处于______ 的环境中进行培养．
（2）在形成图中③的过程中，我们称②为______，获取②的途径主要有______、______、______．
（3）⑤能在⑥子宫中存活的生理基础是______．
（4）人的血清白蛋白的生产，说明该工程突破了自然界物种之间的______，在基因表达载体中，人的血清白蛋白基因前端必须要有______．
正确答案
解：（1）动物细胞培养需要在在培养液中添加一定量的抗生素，防止培养过程中杂菌污染．此外应定期更换培养液，以清除代谢废物，保证被培养的细胞处于无毒、无菌的环境．
（2）在形成图中③重组细胞的过程中，我们称②为目的基因，获取②的途径主要有从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成．
（3）⑤早期胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应．
（4）人血清白蛋白的生产说明该工程突破了自然界物种之间的生殖隔离；在基因表达载体中，人的血清白蛋白基因前端必须要有启动子，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．
故答案为：
（1）抗生素 更换营养液 无毒、无菌
（2）目的基因 从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成
（3）受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应（无免疫排斥）
（4）生殖隔离 启动子
解析
解：（1）动物细胞培养需要在在培养液中添加一定量的抗生素，防止培养过程中杂菌污染．此外应定期更换培养液，以清除代谢废物，保证被培养的细胞处于无毒、无菌的环境．
（2）在形成图中③重组细胞的过程中，我们称②为目的基因，获取②的途径主要有从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成．
（3）⑤早期胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应．
（4）人血清白蛋白的生产说明该工程突破了自然界物种之间的生殖隔离；在基因表达载体中，人的血清白蛋白基因前端必须要有启动子，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．
故答案为：
（1）抗生素 更换营养液 无毒、无菌
（2）目的基因 从基因文库中获取、PCR技术扩增、人工合成
（3）受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应（无免疫排斥）
（4）生殖隔离 启动子
如图a示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因．目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性．为了检查载体是否导入原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）．再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）．据此分析并回答：
（1）pBR322质粒的基本组成单位是______．在基因工程中，质粒上的Amrr、Tetr称为______基因．
（2）与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是______，由此说明______．
（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，属于基因工程基本操作中的______步骤，该基因工程中的受体细胞是______．
正确答案
解：（1）质粒的本质是双链环状DNA分子，其基本组成单位是脱氧核苷酸．在基因工程中，质粒上的Amrr、Tetr是标记基因，用于筛选重组子．
（2）图b中的菌落能抗氨苄青霉素，图c中的实心圈能抗氨苄青霉素和四环素，所以与图c空圈相对应的图b中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，由此说明目的基因插入了四环素抗性基因（Tetr）中．
（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，目的是筛选含目的基因的受体细胞．由题意可知，该基因工程中的受体细胞是大肠杆菌．
故答案：（1）脱氧核苷酸 标记
（2）能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素 目的基因插入了Tetr中
（3）筛选含目的基因的受体细胞 大肠杆菌
解析
解：（1）质粒的本质是双链环状DNA分子，其基本组成单位是脱氧核苷酸．在基因工程中，质粒上的Amrr、Tetr是标记基因，用于筛选重组子．
（2）图b中的菌落能抗氨苄青霉素，图c中的实心圈能抗氨苄青霉素和四环素，所以与图c空圈相对应的图b中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，由此说明目的基因插入了四环素抗性基因（Tetr）中．
（3）将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素、四环素培养基上的过程，目的是筛选含目的基因的受体细胞．由题意可知，该基因工程中的受体细胞是大肠杆菌．
故答案：（1）脱氧核苷酸 标记
（2）能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素 目的基因插入了Tetr中
（3）筛选含目的基因的受体细胞 大肠杆菌
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