- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
（1）外源目的基因导入原核时期受精卵的原核中常用方法是______，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用需要______．
（2）受精卵可以从供体母鼠体内获得，也可以通过体外受精获得：
①若受精卵细胞从供体母鼠体内获得，其基本过程是：首先对供体母鼠用促性腺激素进行______处理，再通过自然交配或______完成受精，最后从供体母鼠输卵管中获得受精卵细胞．
②若受精卵通过体外受精，基本操作过程包括______、______和受精．
（3）受精卵经过体外培养，形成______，再移植到代孕母鼠体内．幼鼠发生断乳后自尾部DNA，与______作分子杂交，鉴定外源基因是否整合，有整合的鼠称为嵌合鼠．将带有外源基因的嵌合鼠小鼠与未经转基因的小鼠杂交、筛选后，可得到纯合转基因小鼠．
正确答案
解：（1）将目的基因导入动物受精卵常用显微注射法，构建基因表达载体可以使目的基因在受体细胞中稳定存在，可以遗传给下一代并表达．
（2）①为获得较多的卵母细胞，可用促性腺激素进行超数排卵，自然交配或人工授精后通过冲卵获得早期胚胎．
②若体外受精的基本操作过程包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精．
（3）受精卵需要经过体外培养形成早期胚胎才能移植到代孕母鼠体内．幼鼠发生断乳后自尾部DNA，与目的基因探针作分子杂交，鉴定外源基因是否整合，有整合的鼠称为嵌合鼠．
故答案为：
（1）显微注射法 构建基因表达载体
（2）①超数排卵 人工授精
②卵母细胞的采集（和培养） 精子的采集（和获能）
（3）早期胚胎 目的基因探针
解析
解：（1）将目的基因导入动物受精卵常用显微注射法，构建基因表达载体可以使目的基因在受体细胞中稳定存在，可以遗传给下一代并表达．
（2）①为获得较多的卵母细胞，可用促性腺激素进行超数排卵，自然交配或人工授精后通过冲卵获得早期胚胎．
②若体外受精的基本操作过程包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精．
（3）受精卵需要经过体外培养形成早期胚胎才能移植到代孕母鼠体内．幼鼠发生断乳后自尾部DNA，与目的基因探针作分子杂交，鉴定外源基因是否整合，有整合的鼠称为嵌合鼠．
故答案为：
（1）显微注射法 构建基因表达载体
（2）①超数排卵 人工授精
②卵母细胞的采集（和培养） 精子的采集（和获能）
（3）早期胚胎 目的基因探针
2012年4月，世界首例转乳糖酶基因奶牛“克拉斯”在我国内蒙古大学生命科学院生物制造重点实验室诞生．2011年5月，科研人员在一头黑白花奶牛（甲）怀孕45天的一个胎儿（乙）中提取成纤维细胞，然后用病毒作运载体把乳糖酶基因转到该细胞中，接着再将该细胞注入到去核的卵母细胞中，再在体外将该杂合细胞培养成早期胚胎，然后将胚胎移植到代孕母牛（丙）的子宫内，283天后，代孕母牛正常分娩，“克拉斯”就此诞生；科研人员预期，“克拉斯”所产的牛奶中，乳糖含量将大大降低，这样的牛奶适合于乳糖不耐症的人群的饮用．
（1）人类婴幼儿时期以乳汁为食，此时小肠上皮细胞是能够产生乳糖酶的，但成年后乳汁摄入很少，尤其在亚洲人群中，乳糖酶基因的表达受到抑制，这体现了基因表达在______上的差异．
（2）“克拉斯”是否是一头真正的转基因牛，可以对其基因进行检测，检测的原理是______．
（3）“克拉斯”转入的目的基因是______，该基因只在______细胞中表达．
（4）将早期胚胎移植到代孕母牛（丙）子宫内时，必须对丙注射______，使其子宫适合于胚胎的着床，囊胚时期的细胞发育为胎膜和胎盘，可与子宫______建立正常的生理和组织联系．
（5）“克拉斯”的培育过程涉及的生物技术有______、______、______．
正确答案
解：（1）人类婴幼儿时期能够产生乳糖酶，但是成年后不能，这体现了基因表达在个体不同时期的差异，即时间上的差异．
（2）检测目的基因是否成功导入受体细胞，可用DNA分子杂交原理．
（3）据题意分析，用病毒作运载体把乳糖酶基因转到成纤维细胞，形成重组细胞，故目的基因是乳糖酶基因．“克拉斯”所产的牛奶中，乳糖含量将大大降低，故该基因只在乳腺细胞表达．
（4）胚胎移植受体必须处于与供体相同生理状态，故必须对丙注射孕激素，使其子宫适合于胚胎的着床．囊胚时期的滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，内细胞团发育为胎儿各种组织．
（5）用病毒作运载体把乳糖酶基因转到该细胞中为基因工程技术；将该细胞注入到去核的卵母细胞中为体细胞核移植技术；胚胎移植到代孕母牛（丙）的子宫内为胚胎移植技术．
故答案为：
（1）时间
（2）DNA分子杂交原理
（3）乳糖酶基因 乳腺
（4）激素（或孕激素） 滋养层
（5）转基因技术（或DNA重组技术） 体细胞核移植技术 胚胎移植技术
解析
解：（1）人类婴幼儿时期能够产生乳糖酶，但是成年后不能，这体现了基因表达在个体不同时期的差异，即时间上的差异．
（2）检测目的基因是否成功导入受体细胞，可用DNA分子杂交原理．
（3）据题意分析，用病毒作运载体把乳糖酶基因转到成纤维细胞，形成重组细胞，故目的基因是乳糖酶基因．“克拉斯”所产的牛奶中，乳糖含量将大大降低，故该基因只在乳腺细胞表达．
（4）胚胎移植受体必须处于与供体相同生理状态，故必须对丙注射孕激素，使其子宫适合于胚胎的着床．囊胚时期的滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，内细胞团发育为胎儿各种组织．
（5）用病毒作运载体把乳糖酶基因转到该细胞中为基因工程技术；将该细胞注入到去核的卵母细胞中为体细胞核移植技术；胚胎移植到代孕母牛（丙）的子宫内为胚胎移植技术．
故答案为：
（1）时间
（2）DNA分子杂交原理
（3）乳糖酶基因 乳腺
（4）激素（或孕激素） 滋养层
（5）转基因技术（或DNA重组技术） 体细胞核移植技术 胚胎移植技术
植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关．若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性．
回答下列问题：
（1）理论上，基因组文库含有生物的______基因；而cDNA文库中含有生物的______基因．
（2）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物______的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株．如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的______是否得到提高．
（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，则可推测该耐旱基因整合到了______（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）．
（4）耐旱基因与载体用______切割后，通过______连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用______技术．
（5）若利用植物体细胞杂交培育优良品种，则必须用______酶和______酶出去杂交细胞的细胞壁，用促溶剂诱导融合，再进行______技术获得杂交植株，所依据的原理是______．
正确答案
解：（1）基因组文库含有某种生物的全部基因；cDNA文库中只含有该种生物的部分基因．
（2）由于植物乙的耐旱性低，因此将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物乙的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株．要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的耐旱性是否得到提高．
（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，该比例符合杂合子（Aa）自交后代的结果，则可推测该耐旱基因（A）整合到了同源染色体的一条上．
（4）耐旱基因与载体用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（5）在进行植物体细胞杂交时需要使用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，最终通过植物组织培养 技术获得杂交植株，其原理是植物细胞的全能性．
故答案为：
（1）全部 部分
（2）乙 耐旱性
（3）同源染色体的一条上
（4）限制酶 DNA连接酶 DNA分子杂交
（5）纤维素 果胶 植物组织培养 植物细胞的全能性
解析
解：（1）基因组文库含有某种生物的全部基因；cDNA文库中只含有该种生物的部分基因．
（2）由于植物乙的耐旱性低，因此将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物乙的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株．要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的耐旱性是否得到提高．
（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，该比例符合杂合子（Aa）自交后代的结果，则可推测该耐旱基因（A）整合到了同源染色体的一条上．
（4）耐旱基因与载体用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（5）在进行植物体细胞杂交时需要使用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，最终通过植物组织培养 技术获得杂交植株，其原理是植物细胞的全能性．
故答案为：
（1）全部 部分
（2）乙 耐旱性
（3）同源染色体的一条上
（4）限制酶 DNA连接酶 DNA分子杂交
（5）纤维素 果胶 植物组织培养 植物细胞的全能性
应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品，是生物科学技术转化为生产力的重要体现．请据图回答下列问题：
（1）在培育转基因山羊的过程中，①过程需要的工具酶是______，______．②过程常用的方法是______．
（2）转抗血栓基因山羊可以通过分泌乳汁来生产抗血栓药物．在构建的相应基因表达载体中，人抗血栓基因的首端必须含有使其仅能在山羊乳腺细胞中特异性表达的______，它是______识别和结合点部位．人们通常将此类转基因动物称为______．
（3）山羊早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于______时期的______细胞进行检测．若要培育出多只相同的转抗血栓基因山羊，可以采用______技术获取．
（4）prG基因的产物能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是______细胞，Ⅲ代表的细胞具有______的特点．
（5）在培育抗虫棉过程中，通常利用Ti质粒将抗虫基因导入棉花受体细胞，为了使抗虫基因顺利连接到受体染色体基因组中，抗虫基因通常位于Ti质粒的______片段中．从分子水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是______．从个体水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是______．
正确答案
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建过程，首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．②表示将目的基因导入动物受精卵的过程，而将目的基因导入动物细胞的最有效的方法是显微注射法．
（2）在构建的相应基因表达载体中，人抗血栓基因的首端必须含有使其仅能在山羊乳腺细胞中特异性表达的启动子，它是RNA聚合酶识别和结合点部位．人们通常将此类转基因动物称为乳腺生物反应器．
（3）对胚胎进行性别鉴定时，一般是取处于囊胚或桑椹胚时期的滋养层细胞进行检测．来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此为了获得多头相同的转基因动物，人们可以采用胚胎分割技术．
（4）Ⅲ能产生单克隆抗体，其特点是既能无限增殖又能产生特定抗体；给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）后，即可得到既能无限增殖又能产生特定抗体的Ⅲ，由此可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（5）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．因此，为了使抗虫基因顺利连接到受体染色体基因组中，抗虫基因通常位于Ti质粒的T-DNA片段中．从分子水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是抗原-抗体杂交法．从个体水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是让虫子食用，观察虫子的存活状况．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶 显微注射法
（2）启动子 RNA聚合酶 乳腺生物反应器
（3）囊胚或桑椹胚 滋养层 胚胎分割
（4）浆（或效应B或经抗原刺激的B细胞） 既能无限增殖又能产生特定抗体
（5）T-DNA 抗原-抗体杂交法 让虫子食用
解析
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建过程，首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．②表示将目的基因导入动物受精卵的过程，而将目的基因导入动物细胞的最有效的方法是显微注射法．
（2）在构建的相应基因表达载体中，人抗血栓基因的首端必须含有使其仅能在山羊乳腺细胞中特异性表达的启动子，它是RNA聚合酶识别和结合点部位．人们通常将此类转基因动物称为乳腺生物反应器．
（3）对胚胎进行性别鉴定时，一般是取处于囊胚或桑椹胚时期的滋养层细胞进行检测．来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此为了获得多头相同的转基因动物，人们可以采用胚胎分割技术．
（4）Ⅲ能产生单克隆抗体，其特点是既能无限增殖又能产生特定抗体；给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）后，即可得到既能无限增殖又能产生特定抗体的Ⅲ，由此可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（5）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．因此，为了使抗虫基因顺利连接到受体染色体基因组中，抗虫基因通常位于Ti质粒的T-DNA片段中．从分子水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是抗原-抗体杂交法．从个体水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是让虫子食用，观察虫子的存活状况．
故答案为：
（1）限制酶、DNA连接酶 显微注射法
（2）启动子 RNA聚合酶 乳腺生物反应器
（3）囊胚或桑椹胚 滋养层 胚胎分割
（4）浆（或效应B或经抗原刺激的B细胞） 既能无限增殖又能产生特定抗体
（5）T-DNA 抗原-抗体杂交法 让虫子食用
广州在2014年夏天爆发登革热疫情，主要传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊（俗称花蚊）．登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热．
（1）为切断蚊媒传播途径，广东省多年来采用喷施菊酯类化学药剂灭蚊．在生态学的角度看，这种控制动物危害的技术方法属于______．但这种控制方法最近却引发争议，因为站在进化的角度，从长远来看会促使蚊子______，以后再次大规模使用同类化学药剂就难以起效．
（2）中山大学热带病虫媒控制研究中心的科研团队成功研发了阻断登革热传播的新型策略，用一种名叫沃巴克氏菌的细菌来感染雄蚊（雄蚊不会叮咬人），当带有细菌的雄蚊对不带细菌的雌蚊进行交配受精后，受精卵不会发育为幼虫．沃巴克氏菌与蚊子的种间关系最可能是______．研究证实，登革热病毒结构是由RNA和衣壳蛋白共同组成．登革热病毒复制时，在寄主细胞内没有出现逆转录酶．请写出登革热病毒复制时遗传信息的传递途径（用文字、箭头等形式表示）______．
（3）2014年初有一个由英国牛津Oxitec公司主持的项目，利用基因工程改造埃及伊蚊来对抗登革热，这些经过基因改造的雄蚊比一般雄蚊多了两个外来基因，改造过程会使用的酶有______．当改造后的雄蚊与一般的野生雌蚊交配，后代即遗传了这两个外来基因从而使它们在发育为幼虫前全部死亡．但在实验室均经过基因改造的雌蚊与雄蚊，其彼此交配的后代却可以存活并正常繁殖后代，从进化角度看，此现象说明这种改造后的埃及伊蚊与一般的野生埃及伊蚊间形成了______．
（4）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB），A、B基因位于非同源染色体上，且均位于常染色体上．当只有A基因或只有B基因时（即A_bb和aaB_），受精卵不会变成幼虫，即无法发育成个体．若纯合的突变雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，在F1群体中进行自由交配，F2群体中A基因频率是______．如果位于X染色体的D基因控制白纹，d基因控制无纹，一对均为白纹的雌雄蚊子交配，F1中出现了无纹蚊子．若F1的蚊子彼此自由交配，则F2蚊子中，白纹：无纹=______．
正确答案
解：（1）采用喷施菊酯类化学药剂灭蚊的技术属于化学防治．从长远来看，用这种控制方法灭蚊，会促使蚊子抗性基因频率上升，以后再次大规模使用同类化学药剂就难以起效．
（2）由题意可知，沃巴克氏菌与蚊子的种间关系最可能是寄生．登革热病毒结构是由RNA和衣壳蛋白共同组成，且登革热病毒复制时，在寄主细胞内没有出现逆转录酶，则登革热病毒复制时遗传信息的传递途径为：
（3）改造后的雄蚊与一般的野生雌蚊交配，它们的后代在发育为幼虫前全部死亡，这说明这种改造后的埃及伊蚊与一般的野生埃及伊蚊间形成了生殖隔离．
（4）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB），A、B基因位于非同源染色体上，且均位于常染色体上．当只有A基因或只有B基因时（即A_bb和aaB_），受精卵不会变成幼虫，即无法发育成个体．若纯合的突变雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1的基因型均为AaBb，在F1群体中进行自由交配，F2的情况为A_B_：A_bb（无法发育成个体）：aaB_（无法发育成个体）：aabb=9：3：3：1，即A_B_（AABB：AaBB：AABb：AaBb=1：2：2：4）：aa=9：1，其中A基因频率是
故答案为：
（1）化学防治 抗性基因频率上升/产生抗药性
（2）寄生
（3）限制酶和DNA连接酶 生殖隔离
（4）60% 13：3
解析
解：（1）采用喷施菊酯类化学药剂灭蚊的技术属于化学防治．从长远来看，用这种控制方法灭蚊，会促使蚊子抗性基因频率上升，以后再次大规模使用同类化学药剂就难以起效．
（2）由题意可知，沃巴克氏菌与蚊子的种间关系最可能是寄生．登革热病毒结构是由RNA和衣壳蛋白共同组成，且登革热病毒复制时，在寄主细胞内没有出现逆转录酶，则登革热病毒复制时遗传信息的传递途径为：
（3）改造后的雄蚊与一般的野生雌蚊交配，它们的后代在发育为幼虫前全部死亡，这说明这种改造后的埃及伊蚊与一般的野生埃及伊蚊间形成了生殖隔离．
（4）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB），A、B基因位于非同源染色体上，且均位于常染色体上．当只有A基因或只有B基因时（即A_bb和aaB_），受精卵不会变成幼虫，即无法发育成个体．若纯合的突变雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1的基因型均为AaBb，在F1群体中进行自由交配，F2的情况为A_B_：A_bb（无法发育成个体）：aaB_（无法发育成个体）：aabb=9：3：3：1，即A_B_（AABB：AaBB：AABb：AaBb=1：2：2：4）：aa=9：1，其中A基因频率是
故答案为：
（1）化学防治 抗性基因频率上升/产生抗药性
（2）寄生
（3）限制酶和DNA连接酶 生殖隔离
（4）60% 13：3
某竹芋科植物果实中含有一种甜蛋白，其甜度为蔗糖的三千倍，是理想的甜味剂．某研究小组试图把甜蛋白基因（目的基因）导入黄瓜中，以改良这种黄瓜的品质．获得转基因黄瓜植株的流程图如下，请回答：
（1）通过步骤①和②可人工合成目的基因，在步骤②中先以mRNA为模板在______酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出______基因．此外，还可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出______序列，再用______合成．
（2）通过______技术，可以获得大量目的基因．利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成一段______，用于DNA的复制．
（3）导入了目的基因的叶片组织细胞经过步骤③______和④______后形成了完整的植株，说明______．
（4）可以通过______技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白．
正确答案
解：（1）图中②表示逆转录获得甜蛋白基因的过程，先以mRNA为模板在逆转录酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出甜蛋白基因．也可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出甜蛋白基因的脱氧核苷酸序列，再用化学方法人工合成．
（2）获取的目的基因可以通过PCR技术进行扩增，利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成一段引物，用于DNA的复制．
（3）图中③表示脱分化、④表示再分化，组织细胞经过组织培养技术培养成完整的植株的过程体现了植物细胞的全能性．
（4）检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用抗原-抗体杂交技术，所以可以通过抗原-抗体杂交技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白．
故答案为：
故答案为：
（1）逆转录 甜蛋白 甜蛋白基因的脱氧核苷酸 化学方法
（2）PCR 引物
（3）脱分化 再分化 植物细胞具有全能性
（4）抗原-抗体杂交
解析
解：（1）图中②表示逆转录获得甜蛋白基因的过程，先以mRNA为模板在逆转录酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出甜蛋白基因．也可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出甜蛋白基因的脱氧核苷酸序列，再用化学方法人工合成．
（2）获取的目的基因可以通过PCR技术进行扩增，利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成一段引物，用于DNA的复制．
（3）图中③表示脱分化、④表示再分化，组织细胞经过组织培养技术培养成完整的植株的过程体现了植物细胞的全能性．
（4）检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用抗原-抗体杂交技术，所以可以通过抗原-抗体杂交技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白．
故答案为：
故答案为：
（1）逆转录 甜蛋白 甜蛋白基因的脱氧核苷酸 化学方法
（2）PCR 引物
（3）脱分化 再分化 植物细胞具有全能性
（4）抗原-抗体杂交
应用生物工程技术能获得人们需要的生物新品种或新产品．请据图回答下列问题：
（1）在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是______，②过程常用的方法是______．
（2）转基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的前端必须有______，它是______识别和结合的部位．
（3）动物细胞培养过程中，培养环境中除须提供O2外还须混入一定量的CO2，CO2的主要作用是______．为保证被培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，还要在细胞培养液中添加一定量______，以防培养过程中的污染．
（4）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是______细胞，Ⅲ代表的细胞具有______的特点．
（5）在抗虫棉培育过程中，进行④过程最常用的方法是______．⑤过程用到的技术是______．
（6）为获得较多的受精卵用于研究，我们可以用______激素对雌性动物进行______处理．若所得的卵母细胞是从卵巢中获得的，则体外受精前应培养至______期．而精子在受精前进行______处理．
正确答案
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建，该过程首先需要用限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．
（2）基因的表达需要启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列．
（3）动物细胞培养过程中，培养环境中除须提供O2外还须混入一定量的CO2，CO2的主要作用是维持培养液的pH．为保证被培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，还要在细胞培养液中添加一定量抗生素，以防培养过程中的污染．
（4）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（5）当受体细胞是植物细胞时，导入目的基因常用农杆菌转化法；将转基因细胞培育成转基因植株还需采用植物组织培养技术．
（6）为获得较多的受精卵用于研究，我们可以用促性腺激素对雌性动物进行超数排卵处理．体外受精前，卵母细胞应培养至减数第二次分裂中期，而精子在受精前进行获能处理．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶 显微注射法
（2）（乳腺蛋白基因的）启动子 RNA聚合酶
（3）维持培养液的pH 抗生素
（4）浆（或效应B） 既能无限增殖又能产生特定抗体
（5）农杆菌转化法 植物组织培养
（6）促性腺 超数排卵 减数第二次分裂中 获能
解析
解：（1）图中①表示基因表达载体的构建，该过程首先需要用限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．
（2）基因的表达需要启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列．
（3）动物细胞培养过程中，培养环境中除须提供O2外还须混入一定量的CO2，CO2的主要作用是维持培养液的pH．为保证被培养的动物细胞处于无菌、无毒的环境，还要在细胞培养液中添加一定量抗生素，以防培养过程中的污染．
（4）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．
（5）当受体细胞是植物细胞时，导入目的基因常用农杆菌转化法；将转基因细胞培育成转基因植株还需采用植物组织培养技术．
（6）为获得较多的受精卵用于研究，我们可以用促性腺激素对雌性动物进行超数排卵处理．体外受精前，卵母细胞应培养至减数第二次分裂中期，而精子在受精前进行获能处理．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶 显微注射法
（2）（乳腺蛋白基因的）启动子 RNA聚合酶
（3）维持培养液的pH 抗生素
（4）浆（或效应B） 既能无限增殖又能产生特定抗体
（5）农杆菌转化法 植物组织培养
（6）促性腺 超数排卵 减数第二次分裂中 获能
（1）过程②中常用______技术将目的基因导入受精卵．
（2）如果⑤过程在体外进行，那么卵母细胞需要培养到______，精子需要获能．受精过程中精子头部接触卵细胞膜时产生______反应，以防止多精入卵．
（3）在体外培养受精卵时，为了维持无菌、无毒环境，定期向培养液添加______．受精卵发育到______时期，开始分化，该时期______属于胚胎干细胞．
（4）图中⑦过程称为______，为使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，此前需对代孕雌猴做______处理．
正确答案
解：（1）过程②表示将目的基因导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞（受精卵）时，常采用显微注射法．
（2）⑤过程在体外进行，需要将所采集到的卵母细胞在体外培养到减数分裂第二次分裂中期，才可以与精子完成受精作用，对精子进行获能处理方法包括培养法和化学诱导法．
（3）动物细胞培养时需要一定的其他环境，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持培养液的pH．
（4）由以上分析可知，图中⑦为胚胎移植过程；胚胎移植前需对代孕雌猴作同期发情处理，使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，为移植入的胚胎提供相同的生理环境．
故答案为：
（1）显微注射
（2）MⅡ中期 透明带反应
（3）抗生素 囊胚 内细胞团
（4）胚胎移植 同期发情
解析
解：（1）过程②表示将目的基因导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞（受精卵）时，常采用显微注射法．
（2）⑤过程在体外进行，需要将所采集到的卵母细胞在体外培养到减数分裂第二次分裂中期，才可以与精子完成受精作用，对精子进行获能处理方法包括培养法和化学诱导法．
（3）动物细胞培养时需要一定的其他环境，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供CO2气体以维持培养液的pH．
（4）由以上分析可知，图中⑦为胚胎移植过程；胚胎移植前需对代孕雌猴作同期发情处理，使代孕雌猴与供体雌猴生殖器官的生理变化相同，为移植入的胚胎提供相同的生理环境．
故答案为：
（1）显微注射
（2）MⅡ中期 透明带反应
（3）抗生素 囊胚 内细胞团
（4）胚胎移植 同期发情
如图为培育转基因抗虫棉的技术流程．请据图回答：
（1）进行过程①，先要运用的酶是______．
（2）基因工程核心步骤的名称是______．
（3）在培育成功的转基因抗虫棉的传种接代过程中，抗虫基因和标记基因是否遵循基因的自由组合定律______．为什么？______．
（4）过程②采用最多的方法是______．在实验室中，检测抗虫基因是否整合到棉花细胞的DNA分子上的方法是______．
（5）经过③过程形成愈伤组织的细胞分裂方式是______．
（6）过程④所表达的两个重要的生理现象是______．
正确答案
解：（1）过程①是将目的基因和质粒重组成重组质粒的过程是基因表达载体的构建，需要先用限制性核酸内切酶进行切割，再用DNA连接酶连接．
（2）基因工程核心步骤的名称是基因表达载体的构建．
（3）在培育成功的转基因抗虫棉的传种接代过程中，由于抗虫基因和标记基因不是位于细胞核内的两对同源染色体上，所以抗虫基因和标记基因的遗传不遵循基因的自由组合定律．
（4）过程②采用最多的方法是农杆菌转化法．在实验室中，检测抗虫基因是否整合到棉花细胞的DNA分子上的方法是DNA分子杂交．
（5）植物组织培养过程中，经过③过程形成愈伤组织的细胞分裂方式是有丝分裂．
（6）过程④为再分化，所表达的两个重要的生理现象是生长和分化．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶
（2）基因表达载体的构建
（3）不遵循 抗虫基因和标记基因不是位于细胞核内的两对同源染色体上
（4）农杆菌转化法 DNA分子杂交
（5）有丝分裂
（6）生长和分化
解析
解：（1）过程①是将目的基因和质粒重组成重组质粒的过程是基因表达载体的构建，需要先用限制性核酸内切酶进行切割，再用DNA连接酶连接．
（2）基因工程核心步骤的名称是基因表达载体的构建．
（3）在培育成功的转基因抗虫棉的传种接代过程中，由于抗虫基因和标记基因不是位于细胞核内的两对同源染色体上，所以抗虫基因和标记基因的遗传不遵循基因的自由组合定律．
（4）过程②采用最多的方法是农杆菌转化法．在实验室中，检测抗虫基因是否整合到棉花细胞的DNA分子上的方法是DNA分子杂交．
（5）植物组织培养过程中，经过③过程形成愈伤组织的细胞分裂方式是有丝分裂．
（6）过程④为再分化，所表达的两个重要的生理现象是生长和分化．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶
（2）基因表达载体的构建
（3）不遵循 抗虫基因和标记基因不是位于细胞核内的两对同源染色体上
（4）农杆菌转化法 DNA分子杂交
（5）有丝分裂
（6）生长和分化
（1）过程①为基因工程中的______，人β-酪蛋白基因为______，可从基因文库中获取，基因文库包括______．
（2）过程②指的是胚胎移植过程，一般选取______的胚胎进行胚胎移植，不选用原肠胚时期．
（3）过程③为加速转基因动物的繁育，可以采用______、______ 等方法．
（4）过程④指的是目的基因的表达，包括______两个阶段，在分子水平上检测目的基因是否在转基因山羊体内成功表达的方法是______．
正确答案
解：（1）过程①表示基因表达载体的构建，所用的人β-酪蛋白基因为目的基因．基因文库包括基因组文库和部分基因文库．
（2）过程②为胚胎移植，一般选用发育完好的桑椹胚时期或者囊胚期的胚胎进行移植．
（3）过程③为加速转基因动物的繁育，可使用核移植技术和胚胎分割技术扩大转基因山羊群体．
（4）过程④指的是目的基因的表达产生β-酪蛋白，包括转录与翻译两个阶段，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交．
故答案为：
（1）构建基因表达载体 目的基因 基因组文库和部分基因文库
（2）桑椹胚时期或者囊胚期
（3）胚胎分割移植 体细胞核移植（或克隆技术）
（4）转录与翻译 抗原-抗体杂交
解析
解：（1）过程①表示基因表达载体的构建，所用的人β-酪蛋白基因为目的基因．基因文库包括基因组文库和部分基因文库．
（2）过程②为胚胎移植，一般选用发育完好的桑椹胚时期或者囊胚期的胚胎进行移植．
（3）过程③为加速转基因动物的繁育，可使用核移植技术和胚胎分割技术扩大转基因山羊群体．
（4）过程④指的是目的基因的表达产生β-酪蛋白，包括转录与翻译两个阶段，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交．
故答案为：
（1）构建基因表达载体 目的基因 基因组文库和部分基因文库
（2）桑椹胚时期或者囊胚期
（3）胚胎分割移植 体细胞核移植（或克隆技术）
（4）转录与翻译 抗原-抗体杂交
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