热门试卷

解：（1）A为逆转录过程，该过程需要以四种脱氧核苷酸为模板，而组成脱氧核苷酸的碱基为A、G、C、T．

（2）B表示基因表达的构建过程，该过程首先要用限制酶切断质粒DNA，再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接重组在一起．

故答案为：

（1）A、C、G、T

（2）限制酶     DNA连接酶

解：（1）目的基因较小，而且核苷酸序列已知的情况，可以用人工合成法合成目的基因．还可以通过基因文库中直接获取、PCR技术扩增目的基因．

（2）①根据图示．Z2由Z1中的EF段被目的基因替换而成的．假设目的基因的大小为Xkb，根据图示可知：3.2+0.8+0.6+x=5.4，可得x=0.8kb．

②构建重组质粒时用同种限制酶切割目的基因和质粒，使它们具有相同的末端，再用DNA连接酶链接形成重组质粒．由Z2的形成过程图，可知，ɤ-蛋白的基因是用限制酶E和F从原核生物基因组DNA上切下，并取代质粒Z1上相应的E-F区域．如果用限制酶E和F处理Z2，可能E、F两处位点再次被切开．

③已知重组质粒Z2的大小为5.4kb，若用限制酶G切割Z2，可得到2.5kb、1.4kb和0.1kb三种片段，可推知共产生四各片段分别为：一段为2.5kb、两段为1.4kb和一段为0.1kb，因此限制酶G将环状的Z2切割四个位点，获得如上的三种片段．

（3）农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力．

故答案为：

（1）人工合成　基因文库　   PCR

（2）①0.8kb   ②A      ③4     

（3）不含

解：（1）由图可知，目的基因前有HindⅢ限制酶切割位点，后有SalⅠ限制酶切割位点，因此要将P5CS基因成功插入Ti质粒中，Ti质粒的T-DNA中应含有HindⅢ、SalⅠ限制酶切割位点．由图可知，标记基因是四环素抗性基因，因此③过程需在农杆菌的培养基中添加四环素才能筛选出含P5CS基因的Ti质粒的农杆菌．

（2）检测目的基因是否整合到烟草细胞染色体DNA上，采用DNA分子杂交技术；转基因是否成功可以直接在个体水平上对转基因植物与非转基因植物的抗旱（或耐旱）性能进行比较．

（3）将转基因烟草细胞培育成完整的植株还需采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个重要的步骤，即转基因烟草细胞首先经过脱分化过程形成愈伤组织，愈伤组织再经过再分化发育成完整植株；决定脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，尤其是生长素和细胞分裂素．

故答案为：

（1）T-DNA        四环素

（2）DNA分子杂交    抗旱/耐旱

（3）植物组织培养　   再分化（细胞增殖和分化）　 植物激素（生长素和细胞分裂素）

解：（1）由于正常基因的编码链（模板链的互补链）部分序列为、，其一个C被T替换，则新序列为TTC、CGA或CTT、CGA或CTC、TGA，对应的模板链变为AAG、GCT或GAA、GCT或GAG、ACT，转录后形成的密码子为UUC、CGA或CUU、CGA或CUC、UGA．由于UGA是终止密码，所以这种突变可能使基因的翻译终止，但不能使转录终止．基因工程的“剪刀”是限制酶．

（2）根据A、B基因使体重增加的作用相同且具累加效应，两对基因独立遗传，所以显性基因越多，体重越大．由于如一对夫妇的基因型均为AaBb，含有两个显性基因，且其遗传遵循基因的自由组合定律，所以其子女体重超过父母的基因型及概率为AABB、AaBB、AABb，共概率是．

（3）由于利于脂肪积累的基因由于适应早期人类食物缺乏而得以保留并遗传到现代，说明自然选择决定生物进化的方向．在这些基因的频率未明显改变的情况下，随着营养条件改善，肥胖发生率明显增高，说明肥胖是遗传因素和环境因素共同作用的结果．

故答案为：

（1）CTCTGA（TGA）   不能   限制性核酸内切酶

（2）     aaBb、Aabb、aabb

（3）自然选择     遗传（基因）    环境

解：（1）由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端．这样，具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3种连接产物，目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物，所以要进行分离纯化．

（2）由于将细胞放入含四环素的培养基，要将存活tctR 为四环素抗性基因结构要保持完整，用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整．

（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是启动子，其合成的产物是RNA，此过程称为转录，原料是核糖核苷酸．

（4）防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，需要有两种限制酶，而ampR为青霉素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点，结构不能被破坏，故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶．

故答案为：

（1）目的基因-载体连接物      载体-载体连接物      目的基因-目的基因连接物      分离纯化  

（2）载体-载体连接物  

（3）启动子              RNA            转录           核糖核苷酸

（4）EcoRⅠ和BamHⅠ

解：（1）获取目的基因时，可从基因文库中直接提取，而基因文库包括基因组文库和部分基因文库，其中要用到反转录技术的是部分基因文库．

（2）构建基因表达载体时，限制酶Ⅰ识别的核苷酸序列是-CGATATCG-．用限制酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA，两种酶切割DNA产生的末端能拼接到一起，则限制酶Ⅱ必须具有切割产生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割产生的粘性末端相同的特点．一个完整的基因表达载体包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因．目的基因是外源基因，是基因表达载体的必须组成；启动子是基因表达载体的必须组成，是RNA聚合酶的识别位点；标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来；终止子是基因表达载体的必须组成，能终止转录过程．

（3）将目的基因导入受体细胞时，如果受体细胞是水稻（单子叶植物）细胞，则常用的方法是农杆菌转化法；如果受体细胞是大肠杆菌，则需要用钙离子处理，处理后的细胞具有吸收周围环境中的DNA分子的特点．

（4）检测与鉴定目的基因时，检测目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上．

故答案为：

（1）基因组文库     部分基因文库     部分基因文库

（2）-CGATATCG-切割产生的粘性末端和限制酶Ⅰ切割产生的粘性末端相同    标记基因、终止子   RNA聚合酶

（3）农杆菌转化法    吸收周围环境中的DNA分子

（4）目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上

解：（1）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．

（2）B过程是培养并选择含有重组质粒的土壤农杆菌，其中“选择”体现了质粒作为运载体必须具备具有标记基因；“培养”体现了质粒作为运载体必须能在宿主细胞中复制并稳定保存．

（3）C过程为诱导选择，既要诱导出愈伤组织还要进行筛选，筛选出被含重组质粒的农杆菌侵染的叶片细胞，淘汰掉普通细胞，故应添加卡那霉素．

（4）如果要检测转基因是否成功，D过程最好采用放射性同位素标记的抗虫基因作为探针，利用DNA分子杂交原理进行检测．

故答案为：

（1）限制性核酸内切酶和DNA连接酶

（2）具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存

（3）卡那霉素

（4）放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因

解：（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，获取目的基因常用的方法是人工合成或从基因文库中获取．由图可知，①过程表示基因表达载体的构建，该过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶；当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的常用方法为显微注射法．

（2）基因的表达需要启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列；为了获得多头相同的转基因动物，人们可以采用胚胎分割和胚胎移植的技术．为了使胚胎移植能成功，需要对代孕母牛进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同．

（3）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力．由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．

（4）愈伤组织是经脱分化而来，其全能性要高于体细胞；⑤过程表示将单个体细胞培育成完整植株个体，其方法是植物组织培养．若要检测转基因抗虫棉细胞的染色体上是否插入了目的基因，可采用DNA分子杂交技术．

故答案为：

（1）人工合成（基因文库中获取）    ①限制酶  DNA连接酶  ②显微注射

（2）（乳腺蛋白基因的）启动子  胚胎分割  同期发情

（3）浆  既能无限增殖又能产生特定抗体

（4）全能性高    植物组织培养  DNA分子杂交

解：（1）用农杆菌将抗盐基因导入烟草细胞染色体的DNA上，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状的产生能遗传，这种新性状的产生所依据的原理是基因重组．

（2）质粒的化学本质是环状DNA，是常见的运载体，常用DNA连接酶将抗盐基因与质粒连接，形成重组DNA．

（3）如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能表达．因此要让抗盐基因表达需要对抗盐基因进行修饰和改造．

（4）只要Sa1I酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；HindIII会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．

（5）除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌烟草植株来鉴定烟草的耐盐性．

（6）推广种植抗虫棉可减少农药使用对环境的污染．

故答案为：

（1）能  基因重组    

（2）DNA   运载体    DNA连接酶    

（3）复制  修饰和改造  

（4）Sal\ⅠⅢ

（5）一定浓度的盐水浇灌  

（6）农药