- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
酵母菌的维生素、蛋白质含量高，可生产食品和药品等．科学家将大麦细胞的LTP1基因植入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌种可产生LTP1蛋白，并酿出泡沫丰富的啤酒．基本的操作过程如图：
（1）该技术定向改变了酵母菌的性状，这在可遗传变异的来源中属于______．
（2）从大麦细胞中可直接分离获得LTP1基因，还可采用______方法获得目的基因．本操作中为了将LTP1基因导人酵母菌细胞内，所用的载体是______．
（3）此操作中可以用分别含有青霉素、四环素的两种选择培养基进行筛选，则有C进入的酵母菌在选择培养基上的生长情况是______
（4）除了看啤酒泡沫丰富与否外，还可以怎样检测LTP1因在啤酒酵母菌中的表达？______．
正确答案
解：（1）图示为转基因技术，其原理是基因重组．
（2）从大麦细胞中可直接分离获得LTP1基因，还可采用人工合成方法获得目的基因．由图中可以看出所用的运载体B是环状的质粒．
（3）将有C导入的酵母菌分别在含有青霉素和四环素的两种选择培养基上培养，则生长情况是在含有青霉素的培养基上能存活，但在含有四环素的培养基上不能存活．
（4）检测LTP1基因在啤酒酵母菌中的表达的方法是检测转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白．
故答案为：
（1）基因重组
（2）人工合成 质粒
（3）在含有青霉素的培养基上能存活，但不能在含有四环素的培养基上存活
（4）检验转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白
解析
解：（1）图示为转基因技术，其原理是基因重组．
（2）从大麦细胞中可直接分离获得LTP1基因，还可采用人工合成方法获得目的基因．由图中可以看出所用的运载体B是环状的质粒．
（3）将有C导入的酵母菌分别在含有青霉素和四环素的两种选择培养基上培养，则生长情况是在含有青霉素的培养基上能存活，但在含有四环素的培养基上不能存活．
（4）检测LTP1基因在啤酒酵母菌中的表达的方法是检测转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白．
故答案为：
（1）基因重组
（2）人工合成 质粒
（3）在含有青霉素的培养基上能存活，但不能在含有四环素的培养基上存活
（4）检验转基因啤酒酵母能否产生LTP1蛋白
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：
（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是______末端，其产物长度分别为______．
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有______种不同DNA片段．
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加______的培养基进行培养．
（4）限制酶MumⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分是
（5）图3中A、B、C、D表示四种质粒，其中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因，适于作为目的基因运载体的质粒是______，理由是______．
正确答案
解：（1）SmaⅠ的识别序列和酶切位点是CCC↓GGG，可知其切割产生的末端是平末端，产物长度是534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp．
（2）基因D会被SmaⅠ切割形成三个片段（长度分别为537bp、790bp、661bp）；若图中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，则基因D就突变为基因d，且基因d只有一个SmaⅠ的酶切位点，因而基因d会被SmaⅠ切割形成两个片段（长度分别为1327bp、661bp）．所以，从杂合子（Dd）中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有4种不同长度的DNA片段（537bp、790bp、661bp、1327bp）．
（3）由图可知，目的基因D两侧都是限制酶BamH I的识别序列，因此应选用限制酶BamH I切割图1中含有目的基因D的外源DNA分子和图2中的质粒．用BamH I切割质粒后会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，因此可用添加抗生素B的培养基筛选含有重组质粒的大肠杆菌．
（4）限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点是
（5）图3中A质粒没有标记基因，不适于作为目的基因的运载体；B质粒具有与目的基因两端相同的识别序列，且限制酶EcoRⅠ不会破坏标记基因，适于作为目的基因的运载体；质粒C和D经过酶切后标记基因都会被破坏，不适于作为目的基因的运载体．故选：B．
故答案为：
（1）平 537bp、790bp、661bp
（2）4
（3）BamH I 抗生素B
（4）
（5）B 具有与目的基因两端相同的识别序列，且限制酶EcoRⅠ不会破坏标记基因
解析
解：（1）SmaⅠ的识别序列和酶切位点是CCC↓GGG，可知其切割产生的末端是平末端，产物长度是534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp．
（2）基因D会被SmaⅠ切割形成三个片段（长度分别为537bp、790bp、661bp）；若图中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，则基因D就突变为基因d，且基因d只有一个SmaⅠ的酶切位点，因而基因d会被SmaⅠ切割形成两个片段（长度分别为1327bp、661bp）．所以，从杂合子（Dd）中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有4种不同长度的DNA片段（537bp、790bp、661bp、1327bp）．
（3）由图可知，目的基因D两侧都是限制酶BamH I的识别序列，因此应选用限制酶BamH I切割图1中含有目的基因D的外源DNA分子和图2中的质粒．用BamH I切割质粒后会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，因此可用添加抗生素B的培养基筛选含有重组质粒的大肠杆菌．
（4）限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点是
（5）图3中A质粒没有标记基因，不适于作为目的基因的运载体；B质粒具有与目的基因两端相同的识别序列，且限制酶EcoRⅠ不会破坏标记基因，适于作为目的基因的运载体；质粒C和D经过酶切后标记基因都会被破坏，不适于作为目的基因的运载体．故选：B．
故答案为：
（1）平 537bp、790bp、661bp
（2）4
（3）BamH I 抗生素B
（4）
（5）B 具有与目的基因两端相同的识别序列，且限制酶EcoRⅠ不会破坏标记基因
（1）此图表示的是采取______方法获取______基因的过程．
（2）图中①DNA是以______为模板，______形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（3）图中②代表的是______酶，在它的作用下将质粒切出______末端．
（4）图中③代表重组DNA，含______基因．
（5）图中④表示的过程是______．
正确答案
解：（1）分析图解可知，图中通过反转录法合成目的基因，即表示采取人工合成方法获取原胰岛素目的基因的过程．
（2）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（3）在切割质粒和目的基因时，需要用同一种特定的限制性内切酶进行切割，在它的作用下将质粒切出黏性末端．
（4）图中③代表重组DNA，含原胰岛素基因．
（5）图中④过程表示目的基因导入受体细胞．
故答案为：
（1）人工合成 原胰岛素目的
（2）原胰岛素mRNA 反转录
（3）特定的限制性的切酶 黏性
（4）原胰岛素基因
（5）目的基因导入受体细胞
解析
解：（1）分析图解可知，图中通过反转录法合成目的基因，即表示采取人工合成方法获取原胰岛素目的基因的过程．
（2）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（3）在切割质粒和目的基因时，需要用同一种特定的限制性内切酶进行切割，在它的作用下将质粒切出黏性末端．
（4）图中③代表重组DNA，含原胰岛素基因．
（5）图中④过程表示目的基因导入受体细胞．
故答案为：
（1）人工合成 原胰岛素目的
（2）原胰岛素mRNA 反转录
（3）特定的限制性的切酶 黏性
（4）原胰岛素基因
（5）目的基因导入受体细胞
（1）构建的重组质粒除了要有reAnti基因和标记基因外，还要有______和复制原点．
（2）从猪中取胎儿成纤维细胞，用______处理，然后进行分散培养，培养时，将培养瓶置于含______的混合气体培养箱中进行培养．
（3）去核前的卵母细胞应培养到______期．其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚胎．
（4）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行______处理．
正确答案
解：（1）基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子和终止子，所以构建的重组质粒除了要有reAnti基因和标记基因外，还要有启动子和终止子．
（2）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使动物细胞分散成单个细胞．动物细胞培养时要放入到95%的空气（保证细胞代谢）和5%CO2（调节培养液的PH）培养箱中．
（3）去核前的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期才成熟，其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚．
（4）在进行胚胎移植前，需要对受体进行同期发情处理，为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境．
故答案为：
（1）（Anti基因的）启动子 终止子
（2）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 95%空气加5%CO2
（3）MII中
（4）同期发情
解析
解：（1）基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子和终止子，所以构建的重组质粒除了要有reAnti基因和标记基因外，还要有启动子和终止子．
（2）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使动物细胞分散成单个细胞．动物细胞培养时要放入到95%的空气（保证细胞代谢）和5%CO2（调节培养液的PH）培养箱中．
（3）去核前的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期才成熟，其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚．
（4）在进行胚胎移植前，需要对受体进行同期发情处理，为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境．
故答案为：
（1）（Anti基因的）启动子 终止子
（2）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 95%空气加5%CO2
（3）MII中
（4）同期发情
（1）基因工程的操作过程中，萝卜A基因与运载体DNA用同种______ 酶切割后，黏性末端可以相互黏合，这种黏合只能使______连接起来．
（2）转基因植株X产生配子的过程中，四分体时期含有______个A0基因，A0基因与正常M基因的分离发生在______期．
（3）研究发现a基因是A基因发生一个碱基对的替换后而形成的，这种变异称______．基因表达时，以DNA-条链为模板合成mRNA的过程称为______．若A基因形成的mRNA末端序列为“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，且A比a多编码2个氨基酸，由此可知，突变后替换位置的碱基对是______（起始密码位置相同，UGA、UAA为终止密码）．
（4）科研人员进一步研究发现，A0基因插入M基因中会导致M基因功能丧失．为了推测M基因的功能，研究人员利用转基因植株X设计了如下的实验：
由实验结果推测，植株X产生的雄配子所含控制种皮颜色的基因是______，进而推测基因M的功能可能与______有关．A0基因相对于A基因为______ 性，若植株X自交，子代中红色种皮植株所占的比例______
（5）拟南芥的叶片正常对叶片卷曲为显性，叶形与种皮性状独立遗传．转基因植株X叶片卷曲，用它做母本与纯合叶片正常的突变型植株杂交得到F1，再将F1中红色种皮植株自交得到F2，F2中表现型为红色种皮正常叶的植株所占的比例是______．
正确答案
解：（1）基因工程的操作过程中，构建基因表达载体时，应该用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，以产生相同的黏性末端；黏性末端可以相互黏合，但这种黏合只能使互补的碱基连接起来．
（2）转基因植株X是将萝卜体内的一个A基因定向插入野生型拟南芥的M基因中再通过培养获得的，即转基因植株X的体细胞中只含有1个A0基因．经过减数第一次分裂间期的复制，在四分体时期（减数第一次分裂前期），细胞中含有2个A0基因；A基因与正常M基因位于一对同源染色体上，它们的分离发生在减数第一次分裂后期，随着同源染色体的分开而分离．
（3）基因突变是指基因中碱基对的增添、缺失或替换，因此a基因是A基因发生基因突变后形成的．基因表达包括转录和翻译两个步骤，其中转录是以DNA-条链为模板合成mRNA的过程．a基因和A基因形成的mRNA中起始密码位置相同，且A比a多编码2个氨基酸，又已知终止密码为UGA、UAA，若A基因形成的mRNA末端序列为“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，则由此可知，A基因倒数第9个碱基突变后，相应的密码子由AGA变为UGA，即替换位置的碱基对是A/T（或T/A）．
（4）测交实验可以验证F1产生的配子种类及比例．由实验结果可知，当母本为植株X时，后代比例符合测交的结果；当父本为植株X时其后代都是褐色，说明植株X含有A0基因的花粉致死，因为插入M基因中会导致M基因功能丧失，由此可以推测M基因可能与雄配子的正常发育有关，且A0基因（红色）相对于A基因（褐色）为显性，则植株X产生的雄配子所含控制种皮颜色的基因是A．若植株X自交（A0AMM），由于含有A0基因的花粉致死，则子代中红色种皮植株：褐色种皮植株=1：1，即红色种皮植株所占的比例
（5）拟南芥的叶片正常对叶片卷曲为显性（用B、b表示），叶形与种皮性状独立遗传．转基因植株X叶片卷曲（A0Abb），用它做母本与纯合叶片正常的突变型植株（aaBB）杂交得到F1（红色正常叶A0aBb、褐色正常叶AaBb），再将F1中红色种皮植株（A0aBb）自交得到F2，由于含有A0基因的花粉致死，F2中表现型为红色种皮正常叶的植株所占的比例是
故答案为：
（1）限制 互补的碱基
（2）2 减数第一次分裂后
（3）基因突变 转录 A/T（或T/A）
（4）A 雄配子的正常发育（或花粉的活性） 显
（5）
解析
解：（1）基因工程的操作过程中，构建基因表达载体时，应该用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，以产生相同的黏性末端；黏性末端可以相互黏合，但这种黏合只能使互补的碱基连接起来．
（2）转基因植株X是将萝卜体内的一个A基因定向插入野生型拟南芥的M基因中再通过培养获得的，即转基因植株X的体细胞中只含有1个A0基因．经过减数第一次分裂间期的复制，在四分体时期（减数第一次分裂前期），细胞中含有2个A0基因；A基因与正常M基因位于一对同源染色体上，它们的分离发生在减数第一次分裂后期，随着同源染色体的分开而分离．
（3）基因突变是指基因中碱基对的增添、缺失或替换，因此a基因是A基因发生基因突变后形成的．基因表达包括转录和翻译两个步骤，其中转录是以DNA-条链为模板合成mRNA的过程．a基因和A基因形成的mRNA中起始密码位置相同，且A比a多编码2个氨基酸，又已知终止密码为UGA、UAA，若A基因形成的mRNA末端序列为“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，则由此可知，A基因倒数第9个碱基突变后，相应的密码子由AGA变为UGA，即替换位置的碱基对是A/T（或T/A）．
（4）测交实验可以验证F1产生的配子种类及比例．由实验结果可知，当母本为植株X时，后代比例符合测交的结果；当父本为植株X时其后代都是褐色，说明植株X含有A0基因的花粉致死，因为插入M基因中会导致M基因功能丧失，由此可以推测M基因可能与雄配子的正常发育有关，且A0基因（红色）相对于A基因（褐色）为显性，则植株X产生的雄配子所含控制种皮颜色的基因是A．若植株X自交（A0AMM），由于含有A0基因的花粉致死，则子代中红色种皮植株：褐色种皮植株=1：1，即红色种皮植株所占的比例
（5）拟南芥的叶片正常对叶片卷曲为显性（用B、b表示），叶形与种皮性状独立遗传．转基因植株X叶片卷曲（A0Abb），用它做母本与纯合叶片正常的突变型植株（aaBB）杂交得到F1（红色正常叶A0aBb、褐色正常叶AaBb），再将F1中红色种皮植株（A0aBb）自交得到F2，由于含有A0基因的花粉致死，F2中表现型为红色种皮正常叶的植株所占的比例是
故答案为：
（1）限制 互补的碱基
（2）2 减数第一次分裂后
（3）基因突变 转录 A/T（或T/A）
（4）A 雄配子的正常发育（或花粉的活性） 显
（5）
天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用．研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转人酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精．请回答下列问题：
（1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是______，用将淀粉酶基因______与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子______，以完成工程菌的构建．
（2）若要鉴定淀粉酶基因是否插人酿酒酵母菌，可采用的检测方法是______；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用______检测．
正确答案
解：（1）将目的基因（淀粉酶基因）切割下来所用的工具是限制酶，将淀粉酶基因和运载体连接起来需要DNA连接酶，之后将重组DNA分子导入受体细胞，以完成工程菌的构建．
（2）检测目的基因是否导入受体细胞，可采用DNA分子杂交技术；要鉴定目的基因是否翻译成蛋白质，可采用抗原抗体杂交技术；因为该工程菌产生的淀粉酶可分泌至培养基，水解淀粉后的区域，遇碘不再变蓝色，产生透明圈．所以也可以通过检测淀粉酶活性来检测目的基因是否翻译成蛋白质，即将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液检验，并检验工程菌菌落周围是否出现透明圈．
故答案为：
（1）限制酶（限制性内切酶） DNA连接酶 导入受体细胞
（2）DNA分子杂交技术 抗原-抗体杂交或淀粉酶活性 会
解析
解：（1）将目的基因（淀粉酶基因）切割下来所用的工具是限制酶，将淀粉酶基因和运载体连接起来需要DNA连接酶，之后将重组DNA分子导入受体细胞，以完成工程菌的构建．
（2）检测目的基因是否导入受体细胞，可采用DNA分子杂交技术；要鉴定目的基因是否翻译成蛋白质，可采用抗原抗体杂交技术；因为该工程菌产生的淀粉酶可分泌至培养基，水解淀粉后的区域，遇碘不再变蓝色，产生透明圈．所以也可以通过检测淀粉酶活性来检测目的基因是否翻译成蛋白质，即将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液检验，并检验工程菌菌落周围是否出现透明圈．
故答案为：
（1）限制酶（限制性内切酶） DNA连接酶 导入受体细胞
（2）DNA分子杂交技术 抗原-抗体杂交或淀粉酶活性 会
如图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．图中质粒上有两种限制酶PstⅠ和HindⅢ的识别序列和切割位点，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因．图中过程⑦是用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙、丙培养基的相同位置上．请据图回答有关问题：
（1）图中mRNA是从人体______细胞中获取的，过程①必需的酶是______．
（2）据图分析，过程②使用的限制酶是______．
（3）图中受体大肠杆菌中不能含有______基因，以免影响后面的筛选．
（4）图中甲培养基上生长的A、B、C三个菌落中的大肠杆菌分别是
A______ B______ C______
（5）过程⑧应选择甲中的______菌落进行纯化和扩大培养．
正确答案
解：（1）由于细胞的基因选择性表达，只有垂体细胞中产生生长激素，因此图中mRNA是从人体垂体细胞中获取的，逆转录过程必须要逆转录酶的催化．
（2）据图分析，过程②表示限制酶切割目的基因．根据甲、乙、丙培养基中菌落生长的情况看出，能够抗四环素的菌落均能抗青霉素，但是能够抗青霉素的菌落中有两个不能抗四环素，说明这两个菌落中的四环素抗性基因被破坏，因此确定该过程使用的限制酶是HindⅢ．
（3）图中受体大肠杆菌中不能含有Ampr和Tetr（青霉素抗性和四环素抗性）基因，以免影响后面的筛选．
（4）图中甲培养基上生长的A菌落既能抗青霉素，也能抗四环素，说明该大肠杆菌含外源非重组（普通）质粒；而B菌落既不能抗青霉素，也不能抗四环素，因此是不含外源质粒的大肠杆菌，而C菌落能够抗青霉素，但是不能抗四环素，说明该菌落是含重组质粒的大肠杆菌．
（5）根据第（2）（4）小题可知，应该选择能够抗青霉素，但是不能抗四环素的菌落C进行纯化和扩大培养．
故答案为：
（1）垂体细胞 逆转录酶
（2）HindⅢ
（3）Ampr和Tetr（青霉素抗性和四环素抗性）
（4）含外源非重组（普通）质粒的大肠杆菌 不含外源质粒的大肠杆菌 含重组质粒的大肠杆菌
（5）C
解析
解：（1）由于细胞的基因选择性表达，只有垂体细胞中产生生长激素，因此图中mRNA是从人体垂体细胞中获取的，逆转录过程必须要逆转录酶的催化．
（2）据图分析，过程②表示限制酶切割目的基因．根据甲、乙、丙培养基中菌落生长的情况看出，能够抗四环素的菌落均能抗青霉素，但是能够抗青霉素的菌落中有两个不能抗四环素，说明这两个菌落中的四环素抗性基因被破坏，因此确定该过程使用的限制酶是HindⅢ．
（3）图中受体大肠杆菌中不能含有Ampr和Tetr（青霉素抗性和四环素抗性）基因，以免影响后面的筛选．
（4）图中甲培养基上生长的A菌落既能抗青霉素，也能抗四环素，说明该大肠杆菌含外源非重组（普通）质粒；而B菌落既不能抗青霉素，也不能抗四环素，因此是不含外源质粒的大肠杆菌，而C菌落能够抗青霉素，但是不能抗四环素，说明该菌落是含重组质粒的大肠杆菌．
（5）根据第（2）（4）小题可知，应该选择能够抗青霉素，但是不能抗四环素的菌落C进行纯化和扩大培养．
故答案为：
（1）垂体细胞 逆转录酶
（2）HindⅢ
（3）Ampr和Tetr（青霉素抗性和四环素抗性）
（4）含外源非重组（普通）质粒的大肠杆菌 不含外源质粒的大肠杆菌 含重组质粒的大肠杆菌
（5）C
请回答下列有关现代生物科技的问题：
（1）科学家将外源基因导入绵羊的受精卵中，常用的方法是______．由于外源基因可能随机插入到受精卵的DNA中，因而有时会导致早期胚胎死亡，最可能原因是______．
（2）从早期胚胎或原始性腺分离出来的一类体积小、核大具有发育的全能性的细胞是______．
（3）若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行______处理，经过“最后一道工序“______，植入到受体母绵羊体内．
（4）我国在“863“计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的使用，这将对______起到重要作用．生态工程所遵循的基本原理有物质循环再生、整体性、______、______与系统学和工程学原理等原理．
正确答案
解：（1）将外源基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；由于外源基因可能随机插入到受精卵的DNA中，外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达，因而有时会导致早期胚胎死亡．
（2）从早期胚胎或原始性腺分离出来的一类体积小、核大具有发育的全能性的细胞是胚胎干细胞（ES或EK细胞）．
（3）若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行胚胎分割处理，经过“最后一道工序”胚胎移植，植入到受体母绵羊体内．
（4）我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的使用，这将对环境保护起到重要作用．生态工程所遵循的基本原理有物质循环再生、整体性、物种多样性、协调与平衡与系统学和工程学原理等原理．
故答案为：
（1）显微注射 外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达
（2）胚胎干细胞（ES或EK细胞）
（3）胚胎分割 胚胎移植
（4）环境保护 物种多样性 协调与平衡
解析
解：（1）将外源基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；由于外源基因可能随机插入到受精卵的DNA中，外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达，因而有时会导致早期胚胎死亡．
（2）从早期胚胎或原始性腺分离出来的一类体积小、核大具有发育的全能性的细胞是胚胎干细胞（ES或EK细胞）．
（3）若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行胚胎分割处理，经过“最后一道工序”胚胎移植，植入到受体母绵羊体内．
（4）我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的使用，这将对环境保护起到重要作用．生态工程所遵循的基本原理有物质循环再生、整体性、物种多样性、协调与平衡与系统学和工程学原理等原理．
故答案为：
（1）显微注射 外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达
（2）胚胎干细胞（ES或EK细胞）
（3）胚胎分割 胚胎移植
（4）环境保护 物种多样性 协调与平衡
（1）此图表示的是采取______方法获取______基因的过程．
（2）图中①DNA是以______为模板，通过______形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的______．
（3）图中②代表的是______酶，在它的作用下将质粒切出______末端或______末端．
（4）图中④表示的过程是______，所使用的方法是______．
正确答案
解：（1）分析图解可知，图中通过反转录法合成目的基因，即表示采取人工合成方法获取原胰岛素目的基因的过程．
（2）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（3）在切割质粒和目的基因时，需要用同一种特定的限制性内切酶进行切割，在它的作用下将质粒切出黏性末端或平末端．
（4）图中④表示目的基因导入受体细胞，一般需将大肠杆菌用氯化钙处理，以增大其细胞壁的通透性，使得细胞成为感受态细胞．
故答案为：
（1）人工合成 原胰岛素目的
（2）原胰岛素mRNA 反转录 胰岛素基因
（3）特定的限制性的切酶 黏性 平
（4）目的基因导入受体细胞 将大肠杆菌用氯化钙处理
解析
解：（1）分析图解可知，图中通过反转录法合成目的基因，即表示采取人工合成方法获取原胰岛素目的基因的过程．
（2）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．
（3）在切割质粒和目的基因时，需要用同一种特定的限制性内切酶进行切割，在它的作用下将质粒切出黏性末端或平末端．
（4）图中④表示目的基因导入受体细胞，一般需将大肠杆菌用氯化钙处理，以增大其细胞壁的通透性，使得细胞成为感受态细胞．
故答案为：
（1）人工合成 原胰岛素目的
（2）原胰岛素mRNA 反转录 胰岛素基因
（3）特定的限制性的切酶 黏性 平
（4）目的基因导入受体细胞 将大肠杆菌用氯化钙处理
运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种．这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，保护农业生态环境．
（1）将Bt毒蛋白基因从苏云金芽孢杆菌DNA中剪切出来的“分子手术刀”是______，它能使双链DNA每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的______键断开：该基因表达载体中除了Bt毒蛋白基因外，还必须有启动子、终止子以及______等．
（2）将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，题中所用的是______．
（3）转基因抗虫油菜的培育是否成功，最简便的检测方法是______．
（4）已知转基因油菜中杀虫蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡．而该杀虫蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞表面______．
（5）转基因油菜获得的______是由Bt毒蛋白基因的表达 产物来体现的，苏云金芽孢杆菌中的Bt毒蛋白基因和油菜细胞中的Bt毒蛋白基因所控制合成的Bt毒蛋白在功能和______序列上是相同的．
正确答案
解：（1）将目的基因（Bt毒蛋白基因）从外源DNA中剪切出来的“分子手术刀”是限制酶，它能使双链DNA每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开；基因表达载体的组成包括目的基因（Bt毒蛋白基因）、启动子、终止子以及标记基因等．
（2）由图可知，题中将目的基因导入受体细胞的方法农杆菌转化法．
（3）转基因抗虫油菜的培育是否成功，最简便的检测方法是用该油菜叶饲喂害虫，若害虫死亡则说明培育成功．
（4）已知转基因油菜中杀虫蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡．而该杀虫蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞表面无（相应的）特异性受体．
（5）转基因油菜获得的抗虫性状是由Bt毒蛋白基因的表达产物来体现的，苏云金芽孢杆菌中的Bt毒蛋白基因和油菜细胞中的Bt毒蛋白基因所控制合成的Bt毒蛋白在功能和
氨基酸序列上是相同的．
故答案为：
（1）限制酶 磷酸二酯键 标记基因
（2）农杆菌转化法
（3）用该油菜叶饲喂害虫
（4）无（相应的）特异性受体
（5）抗虫性状 氨基酸
解析
解：（1）将目的基因（Bt毒蛋白基因）从外源DNA中剪切出来的“分子手术刀”是限制酶，它能使双链DNA每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开；基因表达载体的组成包括目的基因（Bt毒蛋白基因）、启动子、终止子以及标记基因等．
（2）由图可知，题中将目的基因导入受体细胞的方法农杆菌转化法．
（3）转基因抗虫油菜的培育是否成功，最简便的检测方法是用该油菜叶饲喂害虫，若害虫死亡则说明培育成功．
（4）已知转基因油菜中杀虫蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡．而该杀虫蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞表面无（相应的）特异性受体．
（5）转基因油菜获得的抗虫性状是由Bt毒蛋白基因的表达产物来体现的，苏云金芽孢杆菌中的Bt毒蛋白基因和油菜细胞中的Bt毒蛋白基因所控制合成的Bt毒蛋白在功能和
氨基酸序列上是相同的．
故答案为：
（1）限制酶 磷酸二酯键 标记基因
（2）农杆菌转化法
（3）用该油菜叶饲喂害虫
（4）无（相应的）特异性受体
（5）抗虫性状 氨基酸
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