热门试卷

解：（1）由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端．这样，具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3种连接产物，目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物，所以要进行分离纯化．

（2）由于将细胞放入含四环素的培养基，要将存活tctR 为四环素抗性基因结构要保持完整，用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是目的基因-载体连接物．

（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是启动子，其合成的产物是RNA．

（4）防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，需要有两种限制酶，而ampR为青霉素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点，结构不能被破坏，故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶．

（5）DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图为：

故答案为：

（1）目的基因-载体连接物      载体-载体连接物      目的基因-目的基因连接物      分离纯化  

（2）载体-载体连接物  目的基因-载体连接物

（3）启动子              RNA

（4）EcoRⅠ和BamHⅠ

（5）

解：（1）由图可知，质粒上的两个标记基因中均有限制酶Ⅰ（-↓GATC-）的识别序列和切点，若用该酶切割会将两个标记基因均破坏，因此只能用限制酶Ⅱ切割质粒，但切割含有抗虫基因的外源DNA分子时可以只用限制酶Ⅰ，也可以同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ．限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，因此用限制酶Ⅱ割后所形成的黏性末端是．①表示基因表达载体的构建过程，该过程还需要用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒；DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列酶有专一性要求，只要黏性末端相同即可．

（2）基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、标记基因和终止子等，因此除了图中组成（标记基因和目的基因）外，还必须有的组成是启动子、终止子等．构建基因表达载体是基因工程的核心，其目的：是使目的基因在受体细胞中在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代、能够表达和发挥作用．

（3）用限制酶Ⅱ切割质粒后会破坏氨苄青霉素抗性基因，不会破坏四环素抗性基因，因此能在含四环素的培养基上生存的大肠杆菌已经成功导入普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入．

（4）检测目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上可采用DNA分子杂交技术；该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子（记作Aa），则理论上，该转基因植株与普通普通棉（aa）杂交所获F1代中，仍具有抗虫特性的植株（A_）占总数的．

故答案为：

（1）ⅡⅠ（Ⅰ和Ⅱ）        DNA连接酶     否

（2）启动子、终止子   在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代     能够表达和发挥作用

（3）四环素

（4）DNA分子杂交技术   

解：（1）A．控制核糖体蛋白质合成的基因在所有细胞中都表达，A正确；

B．控制胰岛素合成的基因只在胰岛B细胞中表达，B错误；

C．控制呼吸酶合成的基因在所有细胞中都表达，C正确；

D．控制抗体合成的基因只在浆细胞中才表达，D错误．

故选：AC．

（2）图1所示细胞中，1和6表达的基因最相似，因此这两种细胞的功能最为近似．

（3）图3所示基因1用EcoR I切割后产生的片段为“”．DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA连接起来，因此为使基因7与基因1相连，含有基因7的DNA除可用EcoR I切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶切割所产生的DNA片段末端要与EcoRⅠ切割产生的相同．

（4）限制酶的切割位点应该在目的基因前后，所以要将基因1和基因7连接形成新基因，需用限制酶切割的正确位置是B．

（5）若下划线“0”表示的是一个决定谷氨酸的密码子，根据核糖体移动的方向，起始密码子应该位于“0”的左侧，由于密码子是mRNA上决定一个氨基酸的3个相邻的碱基，且大多数生物的翻译起始密码子为AUG或GUG，则该mRNA的起始密码子可能是2．

故答案为：

（1）AC

（2）1与6

（3）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同

（4）B

（5）B

解：（1）用马铃薯发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做马铃薯的cDNA文库．

（2）重组质粒中，目的基因的两端还必须有启动子和终止子．用含重组质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，检测目的基因是否插入马铃薯染色体的DNA上可采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否在转基因马铃薯细胞中表达，可采用抗原-抗体杂交技术．

（3）培育愈伤组织的固体培养基中，除了无机盐、有机营养物质、琼脂、卡那霉素外，还需添加植物激素（细胞分裂素和生长素）；由图可知，抗卡那霉素基因为抗性基因，因此培养基中添加卡那霉素的作用是筛选含卡那霉素抗性基因的细胞．

故答案为：

（1）多种cDNA　cDNA（部分基因）文库

（2）启动子　DNA分子杂交　染色体的DNA　抗原-抗体杂交

（3）植物激素　筛选含卡那霉素抗性基因的细胞

解：（1）过程①表示获得的目的基因，是RNA通过逆转录获得DNA．

（2）①加热至94℃的目的是使DNA样品的氢键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过解旋酶的作用来完成的．

②新合成的DNA分子与模板DNA分子完全相同是因为DNA复制的原理是半保留复制．

③PCR就是聚合酶链式反应，用于扩增DNA序列，所以可以用PCR扩增血液中病毒逆转录产生的核酸DNA，便于检测．

（3）由图分析，⑤过程在含有卡那霉素的培养基上培养，说明构建的重组质粒上含有的标记基因是卡那霉素抗性基因．目的基因导入植物体细胞的方法常用农杆菌转化法．

（4）植物组织培养过程，除需要加入各种营养成分外，还需要添加植物激素，以保证植物生根、发芽过程．

（5）绞股蓝的基因之所以能接到烟草植物中去，原因是绞股蓝与烟草的DNA组成相同，其结构相同．

（6）过程⑥需要对表达的产生进行鉴定，可采取抗原-抗体杂交，若从个体水平鉴定，可通过接种烟草花叶病毒的方法来确定植株是否具有抗性．

故答案为：

（1）逆转录

（2）①氢     解旋     ②半保留复制  ③D

（3）卡那霉素抗性（抗卡那霉素）　农杆菌转化法

（4）植物激素

（5）绞股蓝与烟草的DNA组成相同，其结构相同

（6）抗原-抗体杂交　接种烟草花叶病毒

解：（1）图中①表示获取目的基因的过程，则A为目的基因，根据DNA复制原理，通过PCR技术可在体外大量扩增目的基因；B表示基因表达载体，主要包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等结构．

（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中②过程中将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，使用的绵羊受体细胞为受精卵；④过程中用到的生物技术主要有动物细胞培养、早期胚胎培养以及胚胎移植．

（3）B→D为转基因抗虫棉的培育过程，其中③过程中将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；将转基因植物细胞培育成转基因植株还需要采用植物组织培育技术，因此⑤过程用到的技术是植物组织培养；要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，在棉花细胞中是否成功表达，从分子水平上鉴定可以采用抗原-抗体杂交法．

故答案为：

（1）PCR技术    基因表达载体     标记基因

（2）显微注射法    受精卵    动物细胞培养   早期胚胎培养（或胚胎移植）

（3）农杆菌转化法    植物组织培养    抗原-抗体杂交

解：（1）过程①表示基因表达载体的构建，该过程必需用到的工具酶是限制酶（限制性核酸同切酶）和DNA连接酶．

（2）过程②将基因表达载体导入小鼠受精卵时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．然后还可以通过DNA分子杂交技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已导入成功．

（3）在进行胚胎移植前，利用胚胎分割技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠．

（4）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能，且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的标记基因．

故答案为：

（1）限制酶（限制性核酸同切酶）和DNA连接酶

（2）显微注射技术           DNA分子杂交

（3）胚胎分割      

（4）标记基因

解：（1）获取目的基因时通常利用限制酶．

（2）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法．

（3）动物体细胞核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎再经胚胎移植到受体子宫中，最终发育为克隆动物．

（4）由于自然界中所有生物共用一套遗传密码子，因此不同种生物之间的基因移植能成功．

（5）科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，并用基因工程的方法将该基因导入金茶花叶片细胞的染色体DNA上，经培养长成的植株具备了抗病性，这说明目的基因（或抗枯萎病基因）已表达．叶绿体中基因的遗传属于细胞质遗传，因此把该基因导入叶绿体DNA中，将来产生的配子中不一定含有抗病基因．

故答案为：

（1）限制性内切酶

（2）显微注射技术

（3）细胞核移植（或体细胞核移植）胚胎移植

（4）遗传密码（或密码子）

（5）目的基因（或抗枯萎病基因）已表达

解：（1）过程①为切割质粒、过程②为获取含目的基因的DNA，切割质粒和含目的基因的DNA时用同一种限制酶，可获得相同的黏性末端．在通过过程③构建目的基因表达载体，此过程需要DNA连接酶．

（2）将目的基因导入受体细胞的过程，当受体细胞是微生物细胞是，常采用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使细胞成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．

将某种生物的基因组DNA利用切限制酶割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆．这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合，即基因组文库．

（3）将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有T-DNA，它能把目的基因整合到受体细胞（植株细胞）的染色体DNA上．

（4）①②③涉及基因工程，获取⑥基因工程产物工程猪，还需要涉及细胞工程、胚胎工程．

故答案为：

（1）同一种限制酶   DNA连接酶

（2）感受态    基因组文库

（3）农杆菌转化法    染色体DNA上

（4）基因工程、细胞工程、胚胎工程