- 基因工程的基本操作程序
- 共6244题
人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）．
（1）进行①过程之前，需对人工采集的精子进行获能处理．获能的方法有培养法和______法．①过程中精子入卵后，卵细胞膜会立即发生______，这是防止多精入卵的第二道屏障．
（2）高血成相关基因B在导入②之前需要______，这是基因工程的核心．为保证基因B正确表达，应将其插入在______和之间．其中标记基因的作用是为了鉴别______．
（3）④过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的______．并且一般需将细胞置于含95%的空气加______的混合气体的培养箱中进行培养．
（4）圈示中甲细胞是______．其在核移植⑤之前需要进行去核处理，同时用微型吸管吸走______．
正确答案
解：（1）精子获能的方法有培养法和化学诱导（或用肝素或钙离子载体处理）；阻止精子入卵的第二道屏障是卵黄膜封闭作用．
（2）②是将目的基因导入受体细胞的过程，在此之前需要先构建基因表达载体；基因表达载体由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，为保证基因B正确表达，应将其插入在启动子、终止子和之间；标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因．
（3）④表示动物细胞培养过程，该过程中为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的抗生素．动物细胞培养需要一定的气体环境，即95%的空气+5%的CO2．
（4）核移植技术的受体细胞是去核卵细胞，因此图中甲为（次级）卵母细胞．在核移植⑤之前需要进行去核处理，同时用微型吸管吸走（第一）极体．
故答案为：
（1）化学诱导（或用肝素或钙离子载体处理）卵细胞膜反应
（2）构建基因表达载体 启动子、终止子 受体细胞中是否含有目的基因
（3）抗生素 5%的CO2
（4）（次级）卵母细胞 （第一）极体
解析
解：（1）精子获能的方法有培养法和化学诱导（或用肝素或钙离子载体处理）；阻止精子入卵的第二道屏障是卵黄膜封闭作用．
（2）②是将目的基因导入受体细胞的过程，在此之前需要先构建基因表达载体；基因表达载体由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，为保证基因B正确表达，应将其插入在启动子、终止子和之间；标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因．
（3）④表示动物细胞培养过程，该过程中为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的抗生素．动物细胞培养需要一定的气体环境，即95%的空气+5%的CO2．
（4）核移植技术的受体细胞是去核卵细胞，因此图中甲为（次级）卵母细胞．在核移植⑤之前需要进行去核处理，同时用微型吸管吸走（第一）极体．
故答案为：
（1）化学诱导（或用肝素或钙离子载体处理）卵细胞膜反应
（2）构建基因表达载体 启动子、终止子 受体细胞中是否含有目的基因
（3）抗生素 5%的CO2
（4）（次级）卵母细胞 （第一）极体
如图是科学家培育生产人血清白蛋白（hALB）的乳腺生物反应器的流程图，请回答下列问题：
（1）为获得更多的卵母细胞，在过程A中常对良种奶牛注射______．体外受精前，需对精子进行______处理．
（2）过程C使用的酶是______．
（3）获得囊胚后可切割[______]（填标号）______做DNA分析性别鉴定．
（4）进行E操作前要对受体进行______处理．通过______处理，再植入受体内，可获得更多的转基因牛．
正确答案
解：（1）对良种母畜注射促性腺激素可促其超数排卵；精子获能后才能参与受精，因此体外受精前，需对精子进行获能处理．
（2）C表示基因表达载体的构建过程，该过程中首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组DNA．
（3）进行性别鉴定时，可取囊胚的①滋养层细胞做DNA分析．
（4）E表示胚胎移植过程，在胚胎移植时，要对供受体进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此通过胚胎分割移植技术可获得更多的转基因牛．
故答案为：
（1）促性腺激素 获能
（2）限制酶和DNA连接酶
（3）①滋养层
（4）同期发情 胚胎分割
解析
解：（1）对良种母畜注射促性腺激素可促其超数排卵；精子获能后才能参与受精，因此体外受精前，需对精子进行获能处理．
（2）C表示基因表达载体的构建过程，该过程中首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组DNA．
（3）进行性别鉴定时，可取囊胚的①滋养层细胞做DNA分析．
（4）E表示胚胎移植过程，在胚胎移植时，要对供受体进行同期发情处理，以保证胚胎移植入相同的生理环境；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此通过胚胎分割移植技术可获得更多的转基因牛．
故答案为：
（1）促性腺激素 获能
（2）限制酶和DNA连接酶
（3）①滋养层
（4）同期发情 胚胎分割
人们应用生物工程技术可以获得所需要的生物新品种或新产品．请据图回答下列问题：
（1）获得上述各种目的基因的常用方法除人工合成法、反转录法外，还可以从______中获取，然后再利用______进行大量扩增．
（2）转基因牛可通过分泌乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有启动子，它是______的结合位点．
（3）prG基因的产物能激发细胞不断分裂，一般采用______技术将prG基因导入受体细胞Ⅱ中，图中Ⅱ应是______．若将图中prG基因换成甲肝抗体基因，则图中Ⅱ可能是______等．
（4）④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞比直接采用叶肉细胞更好，原因是______．⑤过程采用的技术是______．
正确答案
解：（1）抗虫基因作为目的基因常从基因文库中获取，然后可用PCR技术进行扩增．
（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点．
（3）将目的基因导入受体细胞常用显微注射法；图中Ⅱ能产生抗体，应为浆细胞；图中Ⅲ能产生单克隆抗体，说明其既能无限增殖，也能产生特异性抗体，若将prG基因换成甲肝抗体基因，说明Ⅱ具有无限增殖的能力，但不能产生抗体，可能是骨髓瘤细胞．
（4）愈伤组织的全能性比体细胞高，因此④过程中的受体细胞采用愈伤组织细胞比直接采用叶肉细胞更好．⑤过程要将转基因细胞培育成转基因植株，需要采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）基因文库 PCR技术
（2）RNA聚合酶
（3）显微注射 浆细胞（或效应B细胞） 骨髓瘤细胞
（4）愈伤组织的全能性高 植物组织培养
解析
解：（1）抗虫基因作为目的基因常从基因文库中获取，然后可用PCR技术进行扩增．
（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点．
（3）将目的基因导入受体细胞常用显微注射法；图中Ⅱ能产生抗体，应为浆细胞；图中Ⅲ能产生单克隆抗体，说明其既能无限增殖，也能产生特异性抗体，若将prG基因换成甲肝抗体基因，说明Ⅱ具有无限增殖的能力，但不能产生抗体，可能是骨髓瘤细胞．
（4）愈伤组织的全能性比体细胞高，因此④过程中的受体细胞采用愈伤组织细胞比直接采用叶肉细胞更好．⑤过程要将转基因细胞培育成转基因植株，需要采用植物组织培养技术．
故答案为：
（1）基因文库 PCR技术
（2）RNA聚合酶
（3）显微注射 浆细胞（或效应B细胞） 骨髓瘤细胞
（4）愈伤组织的全能性高 植物组织培养
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割．为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶______分别对______进行切割，切割后产生的DNA片段分别为______种．
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有______作为标记基因．
（3）研究人员通常采用______法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．通常采用______方法，在个体水平检测目的基因是否表达．
正确答案
解：（1）含目的基因的外源DNA分子上有PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ三种限制酶切割位点，但用AluⅠ切割会破坏目的基因，单独用PstⅠ切割会导致目的基因或质粒自身环化，也会导致目的基因和载体的黏性末端发生任意连接，因此为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ分别对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割；用限制酶PstⅠ、SmaⅠ切割含目的基因的外源DNA分子后会产生4种DNA片段，而用限制酶PstⅠ、SmaⅠ切割质粒后会产生2种DNA片段．
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有抗氨苄青霉素基因作为标记基因．
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；在个体水平检测鱼抗冻蛋白基因是否表达，通常采用将植物在寒冷的环境中培养方法．
故答案为：
（1）PstⅠ、SmaⅠ含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒 4、2
（2）抗氨苄青霉素基因
（3）农杆菌转化 将植物在寒冷的环境中培养
解析
解：（1）含目的基因的外源DNA分子上有PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ三种限制酶切割位点，但用AluⅠ切割会破坏目的基因，单独用PstⅠ切割会导致目的基因或质粒自身环化，也会导致目的基因和载体的黏性末端发生任意连接，因此为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ分别对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割；用限制酶PstⅠ、SmaⅠ切割含目的基因的外源DNA分子后会产生4种DNA片段，而用限制酶PstⅠ、SmaⅠ切割质粒后会产生2种DNA片段．
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有抗氨苄青霉素基因作为标记基因．
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；在个体水平检测鱼抗冻蛋白基因是否表达，通常采用将植物在寒冷的环境中培养方法．
故答案为：
（1）PstⅠ、SmaⅠ含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒 4、2
（2）抗氨苄青霉素基因
（3）农杆菌转化 将植物在寒冷的环境中培养
某科研公司应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白以满足临床需求，大致过程如图（说明：将人血清白蛋白基因导入“雌性奶牛胚胎”的细胞中，形成重组细胞①）．请回答下列问题：
（1）重组细胞______（填“①”或“②”）实现了基因的重组，此技术的最核心步骤是______．
（2）通过核移植技术最终产生克隆动物，体现了______的全能性．胚胎工程操作中最后环节是______．
（3）该过程培养的牛被称为克隆牛．与其相比，试管牛培育过程特有的生物技术是______
（4）若将胚胚进行分割，将来发育成的多个子代小牛的基因型______（填“相同”或“不同”），操作过程需要特别注意的问题是______．否则会影响胚胎的恢复和进一步发育．
（5）运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞（ES细胞），培养过程如下：早期胚胎→内细胞团→胚胎干细胞．在培养过界中，必须用______处理内细胞团，使之分散成单个细胞，为了维持此细胞不分化的状态一般将ES细胞在______细胞上或在添加抑制因于的培养液中进行培养．
（6）哺乳动物的胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及______等物质．
正确答案
解：（1）将人血清白蛋白基因导入“雌性奶牛胚胎”的细胞中，形成重组细胞①，实现了基因的重组．基因表达载体的构建是基因工程的最核心步骤．
（2）动物细胞全能性受到限制，通过核移植技术最终产生克隆动物，体现了细胞核的全能性．胚胎移植是胚胎工程操作中最后环节．
（3）该过程培养的牛被称为克隆牛，属于无性生殖，利用核移植技术培育的生物．试管牛培育过程需经过体外受精、胚胎培养、胚胎移植等技术．特有的生物技术是体外受精．
（4）若将胚胚进行分割，由于来自同一个胚胎，将来发育成的多个子代小牛的基因型相同，操作过程需要将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育．
（5）运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞（ES细胞），培养过程如下：早期胚胎→内细胞团→胚胎干细胞．在培养过界中，必须用胰蛋白酶处理内细胞团，使之分散成单个细胞，为了维持此细胞不分化的状态一般将ES细胞在饲养层细胞上或在添加抑制因于的培养液中进行培养．
（6）哺乳动物的胚胎发育的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及动物血清等物质．
故答案为：
（1）①基因表达载体的构建
（2）细胞核 胚胎移植
（3）体外受精
（4）相同 将内细胞团均等分割
（5）胰蛋白酶 饲养层
（6）动物血清
解析
解：（1）将人血清白蛋白基因导入“雌性奶牛胚胎”的细胞中，形成重组细胞①，实现了基因的重组．基因表达载体的构建是基因工程的最核心步骤．
（2）动物细胞全能性受到限制，通过核移植技术最终产生克隆动物，体现了细胞核的全能性．胚胎移植是胚胎工程操作中最后环节．
（3）该过程培养的牛被称为克隆牛，属于无性生殖，利用核移植技术培育的生物．试管牛培育过程需经过体外受精、胚胎培养、胚胎移植等技术．特有的生物技术是体外受精．
（4）若将胚胚进行分割，由于来自同一个胚胎，将来发育成的多个子代小牛的基因型相同，操作过程需要将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育．
（5）运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞（ES细胞），培养过程如下：早期胚胎→内细胞团→胚胎干细胞．在培养过界中，必须用胰蛋白酶处理内细胞团，使之分散成单个细胞，为了维持此细胞不分化的状态一般将ES细胞在饲养层细胞上或在添加抑制因于的培养液中进行培养．
（6）哺乳动物的胚胎发育的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及动物血清等物质．
故答案为：
（1）①基因表达载体的构建
（2）细胞核 胚胎移植
（3）体外受精
（4）相同 将内细胞团均等分割
（5）胰蛋白酶 饲养层
（6）动物血清
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______连接．
（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是______末端，其产物长度为______．
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有______种不同DNA片段．
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加______的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是______．
正确答案
解：（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接，构成基本骨架．
（2）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．
（3）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．
（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．
故答案为：
（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）平 537bp、790bp、661bp
（3）4
（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接
解析
解：（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接，构成基本骨架．
（2）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．
（3）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．
（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．
故答案为：
（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）平 537bp、790bp、661bp
（3）4
（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接
（1）限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是-G↓AATTC-，SmaⅠ的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-．图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是______．
（2）获得目的基因后，常利用______技术在体外将其大量扩增．
（3）在构建基因表达载体的过程中，除了目的基因外，还必须有______和______复制原点和标记基因等．
（4）转化过程中，大肠杆菌应先用______处理，使其成为______细胞．
（5）菌落①②③中颜色为白色的是______，原因是______．
（6）菌落③中的目的基因是否表达，可采用的分子检测办法是______．
正确答案
解：（1）由图可知，目的基因的左侧有限制酶EcoRI的识别序列，右侧是限制酶Sma I的识别序列，而质粒上只有限制酶EcoRI的识别序列，所以需要用限制酶EcoRI来切割质粒，用限制酶EcoRI和Sma I来切割含有目的基因的外源DNA分子，这样就使目的基因右侧无法与质粒连接，所以目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接限制酶EcoRI切割形成的末端，即-TTAA．
（2）获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增．
（3）基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等．
（4）将目的基因导入大肠杆菌细胞之前，应先用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于能吸收周围DNA的感受态．
（5）用限制酶EcoRI切割质粒时，会破坏质粒上的lacZ‘基因，但切割后的质粒自身环化后，lacZ'基因又被修复，能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，所以菌落①②呈现蓝色；菌落③导入的是重组质粒，其lacZ'基因被破坏，不能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，菌落颜色为白色．
（6）检测目的基因是否表达产生蛋白质，可采用抗原一抗体杂交法．
故答案为：
（1）-TTAA
（2）PCR
（3）启动子和终止子
（4）Ca2+ 感受态细胞
（5）菌落③lacZ′标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色
（6）抗原-抗体杂交
解析
解：（1）由图可知，目的基因的左侧有限制酶EcoRI的识别序列，右侧是限制酶Sma I的识别序列，而质粒上只有限制酶EcoRI的识别序列，所以需要用限制酶EcoRI来切割质粒，用限制酶EcoRI和Sma I来切割含有目的基因的外源DNA分子，这样就使目的基因右侧无法与质粒连接，所以目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接限制酶EcoRI切割形成的末端，即-TTAA．
（2）获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增．
（3）基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等．
（4）将目的基因导入大肠杆菌细胞之前，应先用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于能吸收周围DNA的感受态．
（5）用限制酶EcoRI切割质粒时，会破坏质粒上的lacZ‘基因，但切割后的质粒自身环化后，lacZ'基因又被修复，能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，所以菌落①②呈现蓝色；菌落③导入的是重组质粒，其lacZ'基因被破坏，不能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，菌落颜色为白色．
（6）检测目的基因是否表达产生蛋白质，可采用抗原一抗体杂交法．
故答案为：
（1）-TTAA
（2）PCR
（3）启动子和终止子
（4）Ca2+ 感受态细胞
（5）菌落③lacZ′标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色
（6）抗原-抗体杂交
口蹄疫是由RNA病毒引起的一种偶蹄动物传染病．科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗（主要成分：该病毒的一种结构蛋白VP1），过程如图所示．
请据图回答下列问题：
（1）在上述实验过程中所涉及的生物技术工程有______，如图所示①②成功构建重组质粒的过程中，需要用到的工具酶有______和______
（2）⑤过程代表的是______，⑥过程中重要的两种植物激素是______和______
（3）⑥培养基中添加______可筛选能表达疫苗的细胞；检测转化成功的蕃茄植株，除检测标记基因产物外，还可采用______技术检测目的基因在蕃茄体内是否转录．
（4）该过程运用原理有______、______等．
正确答案
解：（1）由以上分析可知，上述实验过程涉及的生物技术工程有基因工程、植物细胞工程；基因表达载体的构建过程中，需要限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组质粒．
（2）⑤表示脱分化过程；⑥表示再分化过程，该过程中重要的两种植物激素是细胞分裂素和生长素．
（3）由图可知，运载体上的标记基因是卡那霉素抗性基因，因此在⑥培养基中添加卡那霉素可筛选能表达疫苗的细胞；检测目的基因是否转录形成mRNA可采用分子杂交技术，即用DNA分子探针和受体细胞中的mRNA分子进行杂交，观察是否形成杂交带．
（4）上述实验过程涉及到基因工程和植物组织培养技术，其基因工程的原理是基因重组，而植物组织培养的原理是植物细胞的全能性．
故答案为：
（1）基因工程、植物细胞工程 限制酶 DNA连接酶
（2）脱分化 细胞分裂素 生长素
（3）卡那霉素 DNA分子探针
（4）基因重组 植物细胞的全能性
解析
解：（1）由以上分析可知，上述实验过程涉及的生物技术工程有基因工程、植物细胞工程；基因表达载体的构建过程中，需要限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组质粒．
（2）⑤表示脱分化过程；⑥表示再分化过程，该过程中重要的两种植物激素是细胞分裂素和生长素．
（3）由图可知，运载体上的标记基因是卡那霉素抗性基因，因此在⑥培养基中添加卡那霉素可筛选能表达疫苗的细胞；检测目的基因是否转录形成mRNA可采用分子杂交技术，即用DNA分子探针和受体细胞中的mRNA分子进行杂交，观察是否形成杂交带．
（4）上述实验过程涉及到基因工程和植物组织培养技术，其基因工程的原理是基因重组，而植物组织培养的原理是植物细胞的全能性．
故答案为：
（1）基因工程、植物细胞工程 限制酶 DNA连接酶
（2）脱分化 细胞分裂素 生长素
（3）卡那霉素 DNA分子探针
（4）基因重组 植物细胞的全能性
如图所示为农作物新品种的育种方式：
（1）图示育种方式涉及到的生物工程技术有、______．
（2）②、③过程分别称为______、______．
（3）⑤过程中常用的载体是______，形成的结构A是______．⑥过程常用的方法是______．
（4）上述育种方式与传统杂交育种方式相比，突出的优点是______．
正确答案
解：（1）图中⑤过程涉及到基因工程、植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术．
（2）图中②为脱分化的过程，可获得愈伤组织，然后经过③再分化而得到胚状体．
（3）基因工程中常用的载体为质粒；⑤过程指的是基因表达载体的构建，形成的A是基因表达载体，⑥指的是将目的基因导入受体细胞，常用的方法是农杆菌转化法．
（4）与传统的杂交育种相比，基因工程育种和植物体细胞杂交育种的优点：打破生殖隔离、实现遗传物质的定向改变、克服了远缘杂交不亲和的障碍，周期短．
故答案为：
（1）基因工程、植物组织培养 植物体细胞杂交
（2）脱分化 再分化
（3）（土壤农杆菌的）质粒 基因表达载体 农杆菌转化法
（4）打破生殖隔离、实现遗传物质的定向改变、克服了远源杂交不亲和的障碍（和周期短）
解析
解：（1）图中⑤过程涉及到基因工程、植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术．
（2）图中②为脱分化的过程，可获得愈伤组织，然后经过③再分化而得到胚状体．
（3）基因工程中常用的载体为质粒；⑤过程指的是基因表达载体的构建，形成的A是基因表达载体，⑥指的是将目的基因导入受体细胞，常用的方法是农杆菌转化法．
（4）与传统的杂交育种相比，基因工程育种和植物体细胞杂交育种的优点：打破生殖隔离、实现遗传物质的定向改变、克服了远缘杂交不亲和的障碍，周期短．
故答案为：
（1）基因工程、植物组织培养 植物体细胞杂交
（2）脱分化 再分化
（3）（土壤农杆菌的）质粒 基因表达载体 农杆菌转化法
（4）打破生殖隔离、实现遗传物质的定向改变、克服了远源杂交不亲和的障碍（和周期短）
2012年4月24日内蒙古农业大学生命科学院成功培育出了转基因“低乳糖奶牛”．这只奶牛所产牛奶中不含乳糖或含量很低．其生产过程大致如下：
请回答下列问题：
（1）在过程①中构建基因表达载体时，需要获取仅在______细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低．构成启动子的基本单位是______．
（2）进行过程④操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用______技术进行DNA分析，以鉴定其性别．胚胎中滋养层细胞将发育成______．
（3）人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原-抗体杂交进行检测，其中的抗原是指______．
正确答案
解：（1）由于细胞中基因选择性表达，所以在过程①中构建基因表达载体时，需要获取仅在优良奶牛乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低．由于启动子位于质粒DNA上，所以构成启动子的基本单位是脱氧核苷酸．
（2）由于只在雌性个体才能分泌牛奶，所以进行过程④操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用DNA分子杂交技术进行DNA分析，以鉴定其性别．胚胎中滋养层细胞将发育成胎膜和胎盘．
（3）人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原-抗体杂交进行检测，其中的抗原是指人的肠乳糖酶．
故答案为：
（1）优良奶牛乳腺 脱氧核苷酸
（2）DNA分子杂交 胎膜和胎盘
（3）人的肠乳糖酶
解析
解：（1）由于细胞中基因选择性表达，所以在过程①中构建基因表达载体时，需要获取仅在优良奶牛乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低．由于启动子位于质粒DNA上，所以构成启动子的基本单位是脱氧核苷酸．
（2）由于只在雌性个体才能分泌牛奶，所以进行过程④操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用DNA分子杂交技术进行DNA分析，以鉴定其性别．胚胎中滋养层细胞将发育成胎膜和胎盘．
（3）人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原-抗体杂交进行检测，其中的抗原是指人的肠乳糖酶．
故答案为：
（1）优良奶牛乳腺 脱氧核苷酸
（2）DNA分子杂交 胎膜和胎盘
（3）人的肠乳糖酶
扫码查看完整答案与解析